Результаты опыта рск

123

1-опыт, 2-контроль сыворотки, 3-контроль антигена.

Контрольные вопросы

Дайте определение понятиям "антиген" и "антитело".

Каковы основные свойства антигена?

Что такое вакцины?

Как определяется концентрация бактериальных тел во взвеси?

Что такое оптический стандарт?

Какие методы введения антигенов в организм животного Вы знаете?

Какие компоненты участвуют в реакции агглютинации?

Как ставится ориентировочная реакция агглютинации на стекле?

Для чего нужен контроль при постановке реакции агглютинации?

По каким признакам определяется степень агглютинации в пробирках?

Как производится оценка степени агглютинации?

Для чего необходим контроль в реакции агглютинации?

При какой степени агглютинации реакция считается еще положительной?

Какая агглютинация происходит раньше: 0- или Н-?

Какие компоненты участвуют в реакции преципитации?

Какова методика постановки реакции кольцепреципитации?

Для каких целей используется реакция преципитации в агаре?

Какова методика постановки реакции преципитации в агаре?

В чем заключается сущность реакции пассивной гемагглютинации?

В чем заключается сущность реакции латекс-агглютинации?

Какие преимущества имеет РПГА?

Какие компоненты участвуют в РПГА?

Что такое сенсибилизированные эритроциты?

Как определяют результаты РПГА?

Какова методика постановки реакции пассивной гемагглютинации?

Что такое комплемент?

Какую роль играет комплемент в реакциях иммунной сыворотки?

Как получают гемолитическую сыворотку?

Какова методика постановки реакции гемолиза?

Что такое гемолитическая (индикаторная) система?

Если конечным результатом РСК является гемолиз - реакция положительная или отрицательная?

Какие компоненты участвуют в РСК?

Для чего необходимо определение рабочих доз антигена и компле­мента?

Как определяют рабочую дозу комплемента?

Почему испытуемая сыворотка должна быть инактивирована?

Как ставят основной опыт РСК?

Если в сыворотке больного отсутствуют антитела к антигену, ка­ким будет результат РСК?

Что называется титром гемолитической сыворотки?

В каком разведении берется в основной опыт гемолитическая сы­воротка?

Какие контроли используются в РСК?

Какова классификация форм приобретенного иммунитета?

Каковы различия между искусственным активно и искусственным пассивно приобретенным иммунитетом?

Какой иммунитет создается при введении гамма-глобулина?

Какие условия хранения иммунопрепаратов?

Как получают химические вакцины?

Как готовят анатоксины?

Как получают иммунные диагностические сыворотки?

Какими свойствами обладают иммунные сыворотки?

Как получают лечебно-профилактические сыворотки?

Как производят очистку лечебно-профилактических сывороток?

Какие преимущества имеет гамма-глобулин перед сыворотками?

В каких единицах дозируются антитоксические сыворотки?

В каких единицах дозируются анатоксины?

Каковы методы введения аллергенов?

Каковы способы введения вакцин?

Как готовят аутовакцины, каково их назначение?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 16

Классификация диагностических серологических реакций по природе антигена, технике постановки и механизму протекания

• Реакции агглютинации

• Реакции преципитации

• Реакции лизиса

• Реакция нейтрализации

• Реакция иммунофлуоресценции

• Иммуносорбентные реакции

Антигены- любые вещества, в том числе содержащиеся в микроорганизмах и клетках или выделяемые ими, которые несут признаки генетически чужеродной информации и при введении в организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций.

Антитела - иммуноглобулины, которые вырабатываются клетками лимфоидных органов после парентерального поступления антигена и способны специфически взаимодействовать с ним.

Основные типы иммунологических реакций в организме

1. Синтез антител.

2. Гиперчувствительность немедленного типа.

3. Гиперчувствительность замедленного типа.

4. Иммунологическая память.

5. Иммунологическая толерантность.

6. Идиотип-антиидиотипические взаимоотношения.

Механизм реакции агглютинации

Реакция агглютинации, как любая серологическая реакция, протекает в две фазы.

Первая фаза- специфическое соединение активного центра антитела с детерминантой антигена может происходить в отсутствие электро­литов. Эта фаза не сопровождается, видимыми изменениями системы и может быть обнаружена только косвенным путем.

Вторая фаза- склеивание антигенов - следует за первой и ее спе­цифичность менее выражена. Для ее проявления необходимы электролиты, которые снижают электрический заряд комплекса антиген - антитело и ускоряют реакцию. Эта фаза сопровождается видимым изменением среда, склеиванием антигенов и выпадением их в осадок.

Склеивание антигена осуществляется за счет связывания двухвалентными антителами поливалентных антигенов, в результате чего образуются комплексы связанных между собой антигенов через антитела.

Серологические реакции, используемые с диагностической целью

1. Классическая реакция агглютинации с бактериальными антигенами (развернутая и на стекле).

2. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее варианты (рНАг, рНАт).

3. Реакция Кумбса (для выявления неполных антител).

4. Реакция коагглютинации.

5. Реакция латекс-агглютинации.

6. Реакция агрегат-гемагглютинации.

7. Реакция иммунофлуоресцентного метода (прямого и непрямого).

8. Реакция связывания комплемента (РСК).

9. Реакция преципитации (в жидкой среде и в геле).

10. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР).

11. Реакции иммуноферментного метода (ИФМ).

12. Реакции радиоиммунного метода (РИМ).

Система комплемента и ее основные функции

Комплемент- большая группа взаимодействующих между собой белков и гликопротеинов крови, имеющихся у всех позвоночных (белки С1-С9, различные факторы и инактиваторы, всего около 20 компонентов).

Существует три пути активации системы комплемента:

а) Классический, инициируемый комплексом антиген-антитело;

б) Альтернативный, инициируемый бактериальными эндотоксинами, пропердином и различными другими агентами, но протекающий без учас­тия компонентов С1, С4 и С2;

в) Механизм С1 -шунта, реализуется при дефиците С4-компонента, требует активации С1-компонента.

Основные функции системы комплемента:

1. Лизис чужеродных клеток, включая бактерий.

2. Опсонизация чужеродных клеток, включая бактерий. Они становятся более доступными для макрофагов, благодаря феномену иммунного прилипания (он обусловлен прилипанием к клеткам СЗв и в меньшей степени С4в, С5в, С3вi ; С2 компонентов и их фрагментов).

3. Стимуляция хемотаксиса (С5а, в меньшей степени СЗа, фрагмент Ва, комплекс С5в67).

4. Стимуляция фагоцитоза (благодаря присоединению к иммунному комплексу С1q или СЗв).

5. Повышение сосудистой проницаемости и усиление лейкоцитоза (С5а, СЗе).

6. Стимуляция внутриклеточных процессов анафилотоксинами С5а, СЗа, в результате которой из мастоцитов выбрасываются биологически активные соединения (гистамин, брадикинин, серотонин, лейкотриены и т.п.), обусловливающие развитие воспаления.

Компоненты и регуляторы комплемента могут быть синтезированы самими иммунекомпетентными клетками.

Макрофаги синтезируют белки С1q , С2, СЗ, С4, С5, факторы В,Д, Р, ингибиторы - фактор 1, Н, С1 -инактиватор (гены С2, С4 и фактора В связаны с системой MHC).

Реакция Кумбса

При помощи реакций прямой и пассивной агглютинации определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами, так как, соединяясь с анти­геном, блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигена в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют специальную реакцию Кумбса. В реакции участвуют: а) сыворотка больного, в которой определяют неполные антитела; б) антиген-диагностикум; в) антиглобулиновая сыворотка - антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в два этапа: 1) взаимодействие антигена с не­полными антителами; 2) взаимодействие антиглобулиновой сыворотки (антиглобулиновых антител) с антителами, адсобрированными на анти­гене. В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают два одновалентных антитела, адсорбированных соответствен­но на двух антигенах, что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Перечень обязательных сведений, которые должны быть на этикет­ках лечебно-профилактических препаратов:

а) полное наименование препарата;

б) номер государственного контроля;

в) номер серии препарата;

г) срок годности;

д) дозировка.

Вакцины по состоянию входящих в них антигенов делят на:

1) живые (БЦЖ, туляремийная, бруцеллезная, сыпнотифозная, сибиреязвенная, гриппозная, коревая, полиомиелитная и т.д.);

2) убитые (против кишечных инфекций, лептоспирозов, коклюша и т. д. );

3) химические, в состав которых входят полные антигены (хими­ческая сорбированная брюшнотифозная).

По количеству входящих в них антигенов вакцины делят на: моновакцины, дивакцины, тривакцины, поливакцины.

Ассоциированные (комбинированные) вакцины представляют собой комплексные препараты из различных вакцин (и анатоксинов).

Анатоксины получают, добавляя к нативному экзотоксину 0,5% формалина. Смесь выдерживают в течение 3-4 недель при 38-40 °С. Анатоксин применяют для создания активного антитоксического иммуните­та. Концентрация анатоксина выражается в иммуногенных единицах (ИЕ) или в единицах связывания (ЕС). Одна ИЕ или ЕС- это то коли­чество анатоксина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей (АЕ) сыворотки дает инициальную флокуляцию.

Иммунные сыворотки делят на лечебно-профилактические и диагностические .

Для получения лечебно-профилактических сывороток иммунизируют крупных животных - лошадей, баранов, мулов, волов.

Для получения диагностических сывороток используют кроликов.

Лечебно-профилактические сыворотки делят на:

а) антибактериальные и

б) антитоксические

Антибактериальные сыворотки дозируются в миллилитрах (мл).

Антитоксические сыворотки дозируются в международных антитоксических единицах - МБ. Одна МЕ - количество сыворотки, нейтрализующее определенное количество доз токсина для животных определенного вида и веса. Количество МЕ сыворотки в I мл является ее титром. Титрование антитоксических сывороток проводят на животных и in vitroв реакции флокуляции.

Лечебно-профилактические сыворотки подвергаются очистке от балластных белков методом ферментативного гидролиза и последующего диализа (сыворотки-"Диаферм"). Эти сыворотки используют также для получения чистого концентрированного иммунного гаммаглобулина.

Основные свойства макрофагов

Функциональная активность макрофагов, посредством которой они оказывают решающее воздействие на течение защитных реакций, может быть разделена на следующие четыре типа:

1. Хемотаксис.

2. Фагоцитоз.

3. Секреция биологически активных соединений.

4. Обработка и представление клеткам иммуной системы, принимающим участие в кооперативном иммунном ответе, процессированного антигена.

Важнейшим следствием макрофагального фагоцитоза является сти­муляция секреторной активности макрофагов. Активированные макрофа­ги синтезируют и секретируют широчайший набор биологически активных соединений (более 50) и в этом смысле не имеют себе разных среди других типов клеток организма. Особый интерес представляет синтез и секреция простагландинов (ПГ), которые, с одной стороны, являются медиаторами воспаления и иммунного ответа, а с другой стороны, контролируют эффективность фагоцитоза, секреции и цитотоксической ак­тивности самих макрофагов. Фагоцитоз стимулирует секрецию макрофа­гами ПГ разных типов: ПГЕ₁, ПГЕ₂, ПГД₂, ПГФ₂и пр. Возможно, что синтез и секреция ПГ во время фагоцитоза обеспечивает как положи­тельную, так и отрицательную связь и таким образом достигается тон­кая саморегуляция фагоцитарной активности.

Важным секреторным продуктом макрофагов являются активные формы кислорода (супероксидный анион 0₂, перекись водорода Н₂О₂и и др.) образующиеся в результате "окислительного взрыва", которые играют ключевую роль в уничтожении фагоцитированных микробов. Макрофаги синтезируют также некоторые компоненты системы комплемента.

Активация макрофагов - основная часть иммунного ответа организма при различных инфекционных процессах. Она представляет собой се­рию структурных и биохимических изменений, в результате которых макрофаг становится способным осуществлять свои защитные функции. Условно различают два пути стимулирования макрофагов, один опосре­дуется факторами иммунного ответа - иммуноглобулинами, лимфокинами, комплементом, другой - микробными и другими стимулами. Макрофаги не сразу достигают полной активации, при которой максимально мобилизуются их цитопатогенные свойства. Вначале моноциты крови рекрутируются в зону воспаления, где они приобретают готовность к цитотоксической реакции. Такие макрофаги принято называть примированными. В качестве примирующих факторов достаточно эффективны интерфероны α иβ, лимфокины. Примированные макрофаги готовы, но еще не реализуют цитопатический эффект. Для реализации последнего необходимо действие стимулирующих агентов – интерферона γ, других лимфокинов, липополисахаридов и прочих стимуляторов.

Активация макрофагов опосредуется с помощью имеющихся в их плазматической мембране большого количества соответствующих рецепторов для стимуляторов. После стимуляции макрофаги увеличиваются в размерах, обогащаются лизосомами, возрастает адгезия их наружных