Глава 2. Результаты исследования

2.1. Цели и задачи исследования

Целью данного исследования являлось изучение влияния окситоцина на объем общей воды в организме крыс.

Для осуществления данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучение литературы по теме исследования.

2. Определение объема общей воды в организме интактных крыс и после введения окситоцина.

3. Определение концентрации глюкозы и мочевины в плазме крови интактных крыс и после введения окситоцина.

4. Определение концентрации натрия в плазме крови и в эритроцитах интактных крыс и после введения окситоцина.

5. Определение осмоляльности плазмы крови интактных крыс и после введения окситоцина.

2.2. Объект и методы исследования

Объектом исследования являлись 4 беспородных крыс, (самцы) массой 250-400г. Животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище, с естественным световым режимом, при температуре 18 - 20С. Крысам в течение 5 дней внутрибрюшинно вводился окситоцин в объеме 0,1 мл на 0,5 мл физиологического раствора на крысу.

Перед проведением операции крысу взвешивали и подвергали наркотизации, для чего применялся ингаляционный наркоз - хлороформ. Наркотизированную крысу обездвиживали фиксацией к операционному столику.

Определение общей воды по антипирину

Антипирин (АП) вводился внутрибрюшинно из расчета 20 мг АП в 0,5 мл физиологического раствора. Через час осуществляли забор крови из сердца.

Кровь центрифугировали при 3000 об/мин. Отбирали плазму. К 1 мл плазмы крови добавить 5% раствор ТХУ и центрифугип3000 об/мин отобрать супернатант. А) К 3 мл супернатанта добавить 20 мкл 4 N раствора серной кислоты. Колориметрировать при длине волны 364 нм. B) Затем к этому раствору добавить 40 мкл 2 % раствора нитрита натрия. Колориметрировать при длине волны 364 нм. 3. От 2 отнять 1, результат определить по калибровочному графику. Расчет ОВ производится по формуле:

ОВ = кол-во введенного АП  100 / количество АП по калибровке  массу крысы, полученный результат умножить на кратность разведения плазмы раствором ТХУ.

Определение концентрации натрия

Определения концентрации натрия в плазме крови и эритроцитах осуществляли методом пламенной фотометрии.

Определение осмоляльности плазмы

Осмоляльность плазмы (ОСМ) крови определяли по формуле:

ОСМ = 2  [концентрация натрия] (ммоль/л) + [концентрация глюкозы] (ммоль/л) + [концентрация мочевины] (ммоль/л) (мОсм / кг H₂O)

2.3. Полученные результаты и их обсуждение

В результате проведенных исследований было установлено, что у интактных крыс ОВ составил 6,6 мл/100 г массы, после введения животным окситоцина - 4 мл/100 г массы. Введение крысам окситоцина вызывало снижение ОВ на 39,4 %, а - (табл.1, рис. 4).

Таблица 1

Объем общей воды в организме крыс

Серии эксперимента	ОВ (мл/100 г массы)
Интактные крысы (Контроль)	6,6  0,05
Интактные крысы (Введение физиологического раствора)	6,6  0,02
После введения окситоцина	4,0  0,1*

* - Достоверность отличий по сравнению с контролем

Рис. 1 Объем общей воды

Таблица 2

Концентрация глюкозы и мочевины в плазме крови крыс

Серии эксперимента	Концентрация глюкозы (ммоль/л)	Концентрация мочевины (ммоль/л)
Интактные крысы (Контроль)	5,647  0,600	5,382  0,306
Интактные крысы (Введение физиологического раствора)	5,647  0,600	5,382  0,306
После введения окситоцина	6,829  0,367	12,571  0,920*

* - Достоверность отличий по сравнению с контролем

Рис. 2 Концентрация глюкозы и мочевины

Таблица 3

Концентрация натрия и осмоляльность плазмы крови крыс

Серии эксперимента	Концентрация натрия (ммоль/л)		Осмоляльность плазмы крови (мОсм/кг)
	В плазме	В эритроцитах
Интактные крысы (Контроль)	120,167  0,167	14,867  1,049	251,033  0,642
Интактные крысы (Введение физиологического раствора)	101,667  1,667*	11,367  0,033*	210,5  0,526*
После введения окситоцина	131,485  5,702*	6,806  2,054	265,93  10,660

* - Достоверность отличий по сравнению с контролем

Рис. 3 Концентрация натрия и осмоляльности

ВЫВОДЫ

1. Изучили литературу по теме исследования.

2. Определили объем общей воды в организме интактных крыс и после введения окситоцина.

3. Определили концентрацию глюкозы и мочевины в плазме крови интактных крыс и после введения окситоцина.

4. Определили концентрацию натрия в плазме крови и в эритроцитах интактных крыс и после введения окситоцина.

5. Определение осмоляльности плазмы крови интактных крыс и после введения окситоцина.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Аметов А.С. // Болезни эндокринной системы / А.С. Аметов // Медицина. – 2006. - № 3 - С. 52–56.

2. Аничков Н.Н. Секреция гормонов гипофиза и коры надпочечников регулируется центральной нервной системой в соответствии с потребностями организма / Н.Н. Аничков // Физиологический журнал СССР. - 1950. - № 36. – С. 11-12.

3. Ашмарин И.П. Нейрохимия / И.П. Ашмарин // М.: ИБХ РАМН. - 1996. - 469 c.

4. Баранов В.Г. Руководство по клинической эндокринологии / В.Г Баранов // Медицина, 1977. - 664 c.

5. Берехин Е.Б. Фармакология почек и ее физиологические основы / Е.Б Берехин // М.: Медецина, 1979. - С. - 23 - 48.

6. Березов Т.Т. Биологическая химия/ Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // М: Медицина, 1990. - 528 c.

7. Березов Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // - М «Медицина», 1990. - С. 56 - 83.

8. Браун Ф. Сравнительная физиология животных / Ф. Браун Ф // пер. с англ, М, 1967. С. 49 – 85.

9. Быков К.М. Кора головного мозга и внутренние органы / К.М. Быков // - М, «Медицина», 1945. - 362 c.

10. Вайдо А.И. Сравнительно-генетический анализ возбудимости нервной системы / А.И. Вайдо , Ю.С .Дмитриев // Генетика, 1983. - № 19 – С. – 54-103.

11. Вандер А. Физиология почек / А.Вандер // М.: Медецина, 2000. - С. – 4 – 33.

12. Гинецинский А. Г.Физиологические механизмы водно-солевого равновесия / А.Г. Глинецинский // М: Медецина, 1963. – С – 85-93.

13. Григорьева М.Е. Нейрохимия / М.Е. Григорьева, М.Е. Голубева // Вестн. МГУ. Сер. Биология. - 2004. - № 3 - С. – 18 – 45.

14. Григорьева М.Е. Окситоцин: строение, синтез, рецепторы и основные эффекты / М.Е Григорьева, М.Г. Голубева // Нейрохимия . № 2 . - 2010 . - С. 93-101.

15. Иванова Л.Н. физиологические механизмы регуляции водно - солевого баланса у животных и человека / Л.Н. Иванова// Соросовский образовательный журнал, Биология. - 1996 - № 10 – С.1-2.

16. Константинова М.С. Гормоны нейрогипофиза - вазопрессин и окситоцин / М.С Константинова, Ю.В. Наточин // Физиология эндокринной системы. Ред. Баранов В.Г. Л.: Наука, 1979. - С. 90-91.

17. Кравчинский Б.Д. Физиология водно - солевого обмена жидкостей тела/ Б.Д. Кравчинский // Государственное издательство медицинской литературы. – 1963. – С. 1-2.

18. Кузнецова А.А. Физиология человека / Кузнецова А.А // научный журнал, Биология. - 2004 - № 3 - С. 103-109.

19. Лейкок Д.Ф. Основы эндокринологии / Д.Ф.Лейкок, П.Г.Вайс // М.: Медицина. - 2000. – 502 c.

20. Марри Р. Биохимия человека / Р. Марри, Д.Греннер // Москва, «Мир». – 1993. - Том. 1. – С. 90-120.

21.Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал. – 2005 - № 3. - С. 3-32.

22. Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал. - 2008 - № 5. – С. 15 – 59.

23. Нилссон Л.Х. Гликоген печени человека / Л.Х.Нилссон // Скандинавский журнал клинических и лабораторных исследований. – 1973. - № 32 - С. 325-330.

24. Розен В. Б.Основы эндокринологии / В. Б.Розен - 3-е изд.  -  М.: Изд. МГУ: Медицина. - 1994. - С. 40-41.

25. Смирнов А.Н. Элементы эндокринной регуляции / А.Н. Смирнов // Медецина. - 2006. - 351 с.

26. Сперанская А.Д. Физиологичексий журнал / А. Д. Сперанский // CCCP. - 1956. - № 52. - С. 5 – 45.

27. Тепляшина Е.А. Роль окситоцина в регуляции репродуктивных функций и фолликулогенеза / Е.А. Тепляшина // Сибирский медецинский журнал - 2013 - № 8 - C - 21- 45.

28. Устинович А.К. Справочник педиатра по организации медицинской помощи детям / А.К. Устинович // Медицина. - 1985. - С. 25-37.

29. Bernal A. Oxytocin polyuria and polydipsia is NaCl in food-deprived male rats / A. Bernal, J. Mahia, C.Garcia del Rio, A. Puerto // J. Neuroendocrinol. - 2010 - № 10 - p. 1043-1051.

30. Claud Bernard. Lecons sur les proprieties physiologiques et les alterations pathologiques de liquids de organism. - 1859 - № 14 - p. 102 – 145.

31. Douglas A.J. Quo vadis neurohypophysial hormone research // Exp. Physiol. 2000 - № 85 - p. 257-272.

32. Petersson M. Steroid dependent effects of oxytocin on spontaneous motor activity in female rats / М. Petersson // Brain Res Bull. - 1998 - № 45 – 305 p.

Пат. 6894026, МКИ{7} A61K 38/00. Long-acting oxytocin analogues for the treatment and prevention of breast cancer and psychiatric disorders = Пролонгированные аналоги окситоцина для лечения и профилактики рака молочной железы и психических заболеваний / Quav Steven C.,Atossa Healthcare, Inc. — N 09/678591 ; Заявл. 03.11.00 ; Опубл. 03.11.00.— ОНКОЛОГИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ .— 2006 .— N 3.

Патентуют методы и составы для профилактики и лечения рака молочной железы и психических заболеваний, состоящие во введении терапевтически эффективного количества карбетоцина и/или другого пролонгированного аналога окситоцина. Карбетоцин может вводиться в фармакологически приемлемом носителе внутримышечно, внутривенно, интраназально, внутрилегочно и др. способами. Приводят примеры эффективности карбетоцина против рака молочной железы человека у мышей и при лечении психических нарушений у взрослых больных.

Rasmussen, M.S.Effects of oxytocin in normal man during low and high sodium diets = Эффекты окситоцина у здорового человека, получающего низко- и высокосолевой рацион / Rasmussen M.S.,Simonsen J.A.,Sandgaard N.C.F.,Hoilund-Carlsen P.F.,Bie P. // Acta physiol. scand. . N 2 .— 2004 .— 247-258 .— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ) .— 2006 .— N 6.

Обследовали 14 здоровых мужчин, получавших 30 ммоль NaCl/дн (низкосолевой рацион; НСР) или 230 ммоль NaCl/дн (высокосолевая диета; ВСР) в течение 4 дн. Через 4 дн испытуемым в/в инфузионно вводили окситоцин (ОКС) в дозе 1 пмоль/кг/мин в течение 240 мин. Во время инфузии ОКС не было отмечено изменения ср. АД, частоты сердечных сокращений и скорости клубочковой фильтрации. ОКС снижал мочеобразование в ср. с 4,2 до 0,75 и с 4,6 до 1,4 мл/мин при НСР и ВСР соотв. ОКС уменьшал конц-ии ренина, ангиотензина II, альдостерона в плазме крови и почечную экскрецию метаболитов оксида азота нитрата и нитрита. ОКС уменьшал экскрецию натрия и калия в ср. с 11 до 4 и с 93 до 42 мкмоль/мин соотв. Конц-ии предсердного натрийуретического пептида (ПНП) и цГМФ в плазме крови не изменялись после НСР. Сходные изменения были отмечены и при ВСР, однако в этом случае антинатрийуретическое действие ОКС было сходным с контролем. Сделан вывод, что действие ОКС на натрийурез у здорового человека не связано с оксидом азота и/или ПНП. Дания, Univ. of Southern Denmark, Winslowparken, DK-5000.

   Amico, J.A. Anxiety and stress responses in female oxytocin deficient mice = Тревожная и стрессорная реакции у самок мышей с недостаточностью окситоцина / Amico J.A.,Mantela R.C.,Vollmer R.R.,Li X. // J. Neuroendocrinol. . N 4 .— 2004 .— 319-324 .— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ) .— 2006 .— N 6.

У самок мышей с делецией гена окситоцина психогенный стресс вызывал более выраженное тревожное состояние и усиливал секрецию кортикостерона по сравнению с животными дикого типа. Одновременно развивалась повышенная гипертермия. Характер суточных колебаний секреции кортикостерона и ее реакция на введение КРГ существенно не изменялись. Экспрессия иммунореактивного Fos-белка, служившего показателем активации нейронов, в медиальном отделе миндалины в базальных условиях оставалась нормальной, но под действием стресса усиливалась сильнее, чем в контроле. Полученные результаты подтверждают гипотезу, согласно которой окситоцин ЦНС обладает анксиолитической активностью и ослабляет реакцию на психогенное стрессорное воздействие. Библ. 45.

ГригорьеваМ.Е., . ОКСИТОЦИН: СТРОЕНИЕ, СИНТЕЗ, РЕЦЕПТОРЫ И ОСНОВНЫЕ ЭФФЕКТЫ / ГригорьеваМ.Е.,ГолубеваМ.Г. // Нейрохимия . N 2 .— 2010 .— 93-101 .— БИОХИМИЯ .— 2010 .— N 11.

Суммированы данные о структуре, синтезе, метаболизме, рецепторах и физиологических эффектах окситоцина. Классическое гормональное действие пептида проявляется в стимуляции сокращения миометрия матки во время родов и усилении лактации при действии на миоэпителиальные клетки грудных желез. Кроме прямых гормональных эффектов этот пептид осуществляет влияние на консолидацию памяти, оказывает антидепрессивное действие, участвует в регуляции сердечно-сосудистой системы и натриуреза. Особое внимание уделено влиянию окситоцина на функциональное состояние различных звеньев системы гемостаза.

Kunchulia, M.Effects of oxytocin on behaviour and memory in rats subjected to chronic restrained stress = Влияние окситоцина на поведение и память крыс в условиях иммобилизационного стресса / Kunchulia M.,Bolkvadze T.,Zhvania M.,Kotaria N.,Kiladze M. // Georg. Med. News . N10 .— 2010 .— 56-60 .— ФАРМАКОЛОГИЯ ОБЩАЯ. ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА .— 2011 .— N 5.

Изучено влияние окситоцина на поведение и память крыс в условиях 21-дневного иммобилизационного стресса. В условиях иммобилизационного стресса животным подопытной группы окситоцин вводился ежедневно в дозе 1 мг/кг. Для оценки эмоционального состояния и памяти крыс были использованы тесты "открытое поле" (день 22-й) и "fear conditioning" (день 23-й, 24-й). Эксперимент выявил в группе животных, к-рые подвергались премедикации окситоцином, увеличение продолжительности времени нахождения в центре "открытого поля". Окситоцин, очевидно, снижает реакцию страха. Иммобилизационный стресс понижает р-цию замирания, независимо от того, вводился окситоцин или нет. Считаем, что окситоцин не предотвращает повреждение памяти, вызванное стрессом. Согласно полученным данным, окситоцин при стрессе принимает участие в регуляции эмоций и памяти различными путями. Грузия, Ин-т физиологии им. И. Бериташвили, Тбилиси.

   Bernal, A.Oxytocin polyuria and polydipsia is blocked by NaCl administration in food-deprived male rats = Индуцированные окситоцином полиурия и полидипсия у голодных крыс-самцов блокируется введением NaCl / Bernal A.,Mahia J.,Garcia del Rio C.,Puerto A. // J. Neuroendocrinol. . N10 .— 2010 .— 1043-1051 .— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ) .— 2011 .— N 7.

Голодание и подкожное введение окситоцина крысам усиливали у них мочеотделение, но снижали потребление воды. Введение им гипертонического раствора NaCl или возобновление кормления блокировало индукцированные окситоцином полиурию и полидипсию, но стимулировало потребление воды. Т. обр., эти эффекты окситоцина ассоциируются с отрицательным балансом натрия и воды.

1. Серая И.П. Современные представления о биологической роли оксида азота / И.П. Серая, Я.Р. Нарциссов // Успехи современ. биол. – 2002. – Т. 122, № 3. – С. 249 – 258.

2. Шанин В.Ю. Клиническая патофизиология  В.Ю. Шанин //  СПб.: Наука, 1998. – 821 с.

3. Edelman I.S. Anatomy of body water and electrolytes / I.S. Edelman, J. Leibman // Am. J. Med. − 1952. −Vol. 171. −P. 279-296.