Вопрос 73. Устойчивость и диагностика возбудителя сибирской язвы

1. Устойчивость к физико-химическим факторам

2. Лабораторная диагностика

1. Вегетативные формы микробов без доступа кислорода относи­тельно быстро отмирают, особенно под влиянием гнилостной флоры.

Они быстро погибают при нагревании до 50 °С в течение 30 мин, при температуре 75—80 °С — через минуту, а при воздействии различных дезинфицирующих средств — от действия сулемы, формальдегида, хлора в обычных концентрациях — гибель воз­будителя наступает через несколько минут. К низкой темпера­туре бациллы сибирской язвы весьма устойчивы. Сибиреязвенные споры высокоустойчивы во внешней среде. В воде сохраняются жизнеспособными в течение нескольких лет, в почве — десятки лет; сухой жар губит их при 140 °С за 3 ч, ки­пячение — через 45—60 мин. Споры устойчивы и к дезинфици­рующим средствам; в шкурах животных, выделанных дублением, они могут сохраняться живыми длительное время, засаливание мяса не уничтожает спор.

Выявление специфических свойств и отношения возбудителя к внешней среде имеет большое значение в связи с трудностями дифференциальной диагностики. В природе широко распро­странены ложносибиреязвенные палочки, которые морфологиче­ски невозможно отличить. Помимо этого имеются и другие спорогенные аэробы, такие, как сенная, картофельная, капу­стная и корневидная палочки, которые могут находиться в раз­личных объектах среды. Из старых лабораторных культур, почвы и сточных вод выделен специфический сибиреязвенный фаг, используемый для дифференциальной лабораторной диаг­ностики возбудителя сибирской язвы.

2. Лабораторная диагностика сибирской язвы состоит:

• в бактериоскопии нативного материала;

• посеве его на питательные среды;

• заражении животных (биологическая проба);

• постановке реакции термопреципитации по Асколи.

Для диагностики сибирской язвы у больных и ретроспективно­го анализа используют внутрикожную пробу с антраксилом. Для лабораторного исследования от больного в стерильную по­суду берут содержимое пустулы, гной, отделяемое карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения, рвотные массы, соблюда­ют при этом правила работы с особо опасными инфекциями. Исследование начинают с бактериоскопии мазков, окрашенных по Граму и анилиновыми красками. Окраску мазков произво­дят также раствором Ребигера на предмет обнаружения кап-сульных форм бацилл сибирской язвы — капсулы окрашивают­ся в красно-фиолетовый цвет, бактерии — в темно-фиоле­товый. Для бактериологического исследования материал засе­вают в чашки Петри на мясо-пептонный агар и в пробирки с мясо-пептонным бульоном. Через 24 ч выращивания в термо­стате при 37 °С в положительных случаях на поверхности агара можно видеть матовые шероховатые колонии с ворсистыми краями типа "львиной гривы", в пробирках с мясо-пептонным бульоном сибиреязвенный возбудитель растет на дне пробирки в виде комка ваты. Выделенные культуры в мазках исследуют под микроскопом на морфологию и в висячей капле — на под­вижность.

Биологическая проба: окончательное подтверждение видовой принадлежности выделенной культуры устанавливают путем подкожного заражения белых мышей, морских свинок, кроли­ков эмульсией из однодневной агаровой культуры. Наблюде­ние за животными проводят 10 дней. Павших животных вскрывают: делают мазки-отпечатки из внутренних органов для микроскопирования, производят посевы из крови, сердца, селезенки и инфильтрата на месте инъекции.

Для ускоренной диагностики сибиреязвенной инфекции исполь­зуют иммунофлюоресцентный метод. Этот метод состоит в об­работке мазков культур микробов люминесцентными сыворот­ками и просмотре их в люминесцентном микроскопе — бациллы сибирской язвы выглядят в виде палочек с ободком, светя­щимся зеленом цветом. Лаборатория может дать предваритель­ное заключение по исследуемому материалу через сутки после его получения и окончательное — через 3—4 дня после резуль­татов постановки биологической пробы.

Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью обнару­жения сибиреязвенного антигена. Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиоло­гическом растворе 10—15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют. Фильтрат наслаивают на преципитирующую сыво­ротку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации.

Аллергическая проба состоит во внутрикожном введении 0,1 мл антраксина — антигена, извлекаемого из оболочки сибиреяз­венного возбудителя. На месте введения у больных и перебо­левших сибирской язвой появляются гиперемия и инфильтрат размером 3,5 х 3 см.