Определение времени свертывания крови

Метод Ли-Уайта (время свертывания венозной крови)

Подготавливают водяную баню с температурой 37 град. Цельсия, секундомер. Из вены забирают 1 мл крови, помещают в пробирку, которую устанавливают на водяную баню и включают секундомер. Через 2 минуты, а затем через каждые 30 секунд пробирку наклоняют под углом 45 градусов и наблюдают образование плотного сгустка (кровь не выливается при переворачивании пробирки). Время свертывания регистрируют от момента ее взятия до образования плотного сгустка. В норме 5-10 минут.

Метод Бюркера (свертывание капиллярной крови)

На стекле смешиваются равные по объему капли крови и дистиллированной воды. Включается секундомер и путем помешивания образовавшейся смеси регистрируется образование нитей фибрина.

Определение времени кровотечения по Duke

Определить время и интенсивность кровотечения по Дюку. Обработать палец спиртом или эфиром. Сделать прокол мякоти пальца на глубину 3-3,5мм. Включить секундомер и снимать капли фильтровальной бумагой каждые 30 сек. Секундомер выключается в тот момент, когда на бумаге не останется следа крови. В норме время кровотечения равно 2-4 мин.

Для определения интенсивности кровотечения число капель крови на фильтровальной бумаге делят на время кровотечения. В норме она равна 2-3.

Увеличение времени кровотечения и интенсивности свидетельствует о нарушении сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.

Определение осмотической стойкости эритроцитов

Известно, что в гипотонических растворах эритроциты набухают и лопаются, в результате чего гемоглобин выходит в окружающую среду. Это явление называется гемолизом. В крови человека имеются эритроциты, обладающие различной устойчивостью к действию гипотонических растворов. Необходимо определить максимальную концентрацию хлористого натрия, при которой начинается (минимальная осмотическая стойкость) и заканчивается (максимальная осмотическая стойкость) гемолиз. С этой целью из рабочего (1%) раствора хлорида натрия готовится серия разведений по следующей схеме:

Вода (мл)	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,55	0,6	0,62	0,65	0,7
1%р-р NаСl (мл)	0,9	0,3	0,7	0,6	0,5	0,45	0,4	0,38	0,35	0,3
Полученная концентрация (%)	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,45	0,4	0,33	0,35	0,3

В каждую пробирку вносится по капле крови, которую тотчас же перемешивают с раствором и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 мин. Для здоровых людей верхняя (минимальная) граница осмотической стойкости соответствует 0,42-0,48% NаСl. При этом разрушаются наименее устойчивые к осмотическому давлению эритроциты. Полный же гемолиз (максимальная граница стойкости) происходит при 0,30-0,34% NаСl.

Расшифровка агрегатограммы

Агрегатограмма записывается с помощью прибора, получившего название агрегометр. К сожалению, мы не можем воспользоваться на занятиях этим прибором, ибо у нас он предназначен лишь для научной работы. Принцип записи агрегатограммы основан на изменении оптической плотности плазмы, содержащей тромбоциты, в которую вносится один из агрегирующих агентов (АДФ, адреналин, коллаген, тромбоксан А2, антибиотик ристомицин и др.). При этом регистрируется кривая, схема которой изображена на рисунке. В норме агрегатограмма носит двугорбый характер, хотя в зависимости от дозы агрегирующего агента можно получить и одногорбую прямую, а также агрегацию с последующей дезагрегацией (возвращение кривой к исходной величине) (см. рисунок).

Обычно агрегатограмма включает в себя латентный период АВ (момент внесения агрегирующего агента до начала записи агрегатограммы), величину максимальной амплитуды (МА), угол агрегации, время наступления максимальной агрегации и время дезагрегации (СД), если он наступает.

В норме для первой волны индекс агрегации (процент агрегированных тромбоцитов) равен 25-35%, время агрегации колеблется в пределах 30-35 сек, угол агрегации 60-65 градусов.

Нормы для второй волны агрегации: индекс агрегации - 60-70%, время агрегации - 90-100 сек, угол агрегации - 50-60 градусов.

После помещения индуктора в норме агрегация должна наступать не позднее, чем через 20-30 сек. (АВ). Следует помнить, что цена данного деления на агрегатограмме равна 20 сек (1 см ленты). Как правило, врачу необходимо обнаружить значительные нарушения агрегации. Они могут выражаться в отсутствии агрегации, ее чрезмерно низкой амплитуде, длительном латентном периоде. При повышении агрегационной активности тромбоцитов наступает спонтанная (без внесения индуктор) агрегация.