2. Стерилизация

Стерилизация - это обеспложивание, т. е. ос­вобождение какого-либо материала от живых микроорга­низмов или их покоящихся форм.

Стерилизацию проводят различными способами: физическими (воздействие высокой температуры, ультрафиолетовых лучей, использование бактериальных фильтров); химическими (использование различ­ных антисептиков для консервирования питательных сред); биологическими (применение антибиотиков).

Целесообразность использования того или иного способов стерилизации обусловлена особенностями материала, подлежащего стерилизации, его физиче­скими и химическими свойствами.

В лабораторной практике обычно применяют фи­зические способы стерилизации.

Прокаливание в пламени горелки или спиртов­ки (фламбирование) - способ стерилизации, при ко­тором происходит полное обеспложивание объекта, так как погибают не только вегетативные клетки, но и споры микроорганизмов. Обычно прокаливают бак­териологические петли, шпатели, предметные и покровные стекла, мелкие инструменты.

Стерилизацию сухим жаром проводят в сушильных шкафах (стерилизаторах), представляющих собой термоcтaт (рис.5) с электрическим обогревом, в котором автома­тически на заданном уровне может поддерживаться высокая температура. Этим способом стерилизуют лабораторную посуду, предварительно тщательно вымытую, высушенную и плотно завернутую в бумагу.

Стерильность сухим паром при 160-465°С обеспечивается не менее чем за 90 мин, при 180°С - не менее чем за 30 мин.

Жидкости (питательные среды, физиологический раствор и др.), предметы из резины и синтетических материалов стерилизовать сухим жаром нельзя, так как жидкости выкипают и выливаются, а резина и синтетические материалы разрушаются. Питательные среды и другие жидкости стерилизуют нагревом в парах воды.

Стерилизация паром может проводиться паром под давлением и текучим паром. Чаще применяют первый способ.

Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве (рис.6).

Рис.5. Термостат

Рис.6. Автоклав

Способ основан на воздействии на стерилизуемые материалы насыщенного водяного пара под давлением, выше атмосферного. В результате такой стерилизации погибают вегетативные и споровые формы микроорганизмов.

Автоклав представляет собой двустенный массивный котел, снаружи обшитый металлическим кожухом, с герметически закрывающейся крышкой, которая плотно прижимается к котлу откидывающимися болтами с барашками. За счет кипения воды и герметизации в автоклаве создается повышенное давление, позволяющее поднять температуру выше 100°С. Обычно температура 112-120°С.

В автоклавах обрабатывают питательные среды, физиологический раствор, воду, лабораторные прибо­ры и мелкое оборудование, имеющее резиновые детали и др. В автоклавах обезвреживают также инфицированный материал. Чашки и пробирки, содержащие куль­туры микроорганизмов помещают в специальные металличе­ские ведра или баки с отверстиями в крышке для проникновения пара и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С в течение часа. Таким же образом стерилизуют инструменты после работы с бакте­риями, образующими споры.

К работе с автоклавом допускаются специально подготовленные люди, которые должны строго и точ­но выполнять правила, указанные в инструкции, прилагаемой к аппарату. Различные питательные среды и другие материа­лы для заготовки впрок разливают в пробирки, кол­бы и закрывают ватными пробками. После обработки в автоклаве они хранятся длительное время, не под­вергаясь порче, и используются по мере надобности.

В лабораторной практике для получения эффекта стерильности при температуре, не превышающей 100ºС, иногда пользуются кипятильником Коха. Это металлический цилиндрический сосуд, на дно которо­го наливается вода, над водой, на решете, помещают стерилизуемые предметы.

При кипячении воды все предметы оказываются в атмосфере пара (при темпе­ратуре 100 °С), вытекающего через неплотно закры­вающуюся крышку, отчего и возникло выражение «стерилизация текучим паром».

Однократное прогревание текучим паром в тече­ние часа не приводит к гибели споровых микробов. Достичь этого можно, прибегнув к двукратному по­вторному нагреванию, которое проводят с интерва­лом 24 ч по часу. Это так называемая дробная стерилизация.