4. Оформление результатов

• Напишите, из каких двух греческих слов (также укажите их перевод) состоит термин «микроскоп».

• Впишите в таблицу части микроскопа, элементы микроскопа и их назначение.

Часть микроскопа	Название элемента микроскопа	Назначение элемента микроскопа

• Напишите, от какого латинского слова (также укажите его перевод) произошел термин окуляр.

• Рассчитайте общее увеличение микроскопа, если применяли объектив 8^х и окуляр 10^х.

• Запишите методику приготовления препарата «раздавленная капля».

• Запишите методику приготовления препарата «висячая капля».

• Методика приготовления фиксированного препарата.

• Запишите методику окраски по Граму.

5. Домашнее задание

Подготовиться к защите лабораторной работы №1

Вопросы для контроля

1. Строение микроскопа.

2. Правила пользования микроскопом.

3. Методика приготовления препарата «раздавленная капля».

4. Методика приготовления препарата «висячая капля».

5. Методика приготовления фиксированного препарата.

6. Техника окраски по Граму.

Лабораторно-практическая работа №2

Питательные среды для выращивания микроорганизмов. Стерилизация

Цель работы: ознакомиться с приготовлением питательных сред и методиками стерилизации.

Объекты исследования: питательные среды

Оборудование: чашка Петри, фотографии микробиологического оборудования (термостат, автоклав).

Техника безопасности: Во время работы уделять особое внимание работе со спиртовкой.

Методика выполнения работы

1. Питательные среды

Питательные среды служат местом обитания микроорганизмов, источником питательных веществ, местом, где они растут, размножаются и гибнут.

Среды должны содержать вещества, необходимые для построения клетки микроорганизма, а также источни­ки энергии. В состав сред входят макро- и микро­элементы, органогены и факторы роста (витамины, некоторые амино­кислоты, гормоны и т. д.).

Все перечисленные вещества и элементы должны находиться в легкоусвояемой форме.

Следует готовить общеупотребительные питательные среды, чтобы они были пригодны для выра­щивания многих или хотя бы нескольких видов микроорганизмов. Желательно, чтобы они в то же время были унифицированными, т. е. содержали постоянные количества отдельных ингредиентов, например общего азота - 250-300 мг %, NaCL - 0,5-0,8 % и т. д.

Среды должны иметь определенную кислотность. Так, для большинства бактерий оптимальной, т.е. обеспечивающей наилучшие условия развития, явля­ется нейтральная или слабощелочная среда - рН 7,0-7,4. Для успешного выращивания дрожжей, плесневых грибов активная кислотность сред должна находиться в пределах рН 4,5-6,5. Кислотность сред регулируется добавлением растворов соляной, молочной кислот или пищевой соды.

Чтобы во время роста микробов кислые или ще­лочные продукты их жизнедеятельности не изменяли значения рН, среды должны обладать буферностью, т. е. содержать вещества, способ­ные нейтрализовать кислые или щелочные продукты обмена.

Среды должны содержать достаточное количество влаги (около 80 % и более).

Естественными питательными средами для микроорганизмов мо­гут являться обычные пищевые продукты - молоко, мясной или рыбный бульон, овощи, фрукты или их отвары. Чаще используют искусственные питательные среды, т. е. среды, приготовленные с добавлением каких-либо дополнительных веществ. Им придаются свойства, позволяющие легко наблюдать за развити­ем микроорганизмов (по изменению прозрачности, цвета, консистенции и др.) и изучать их.

Для получения плотных (студнеобразных) сред в бульоны вводят желирующие вещества - агар (до 2%) или желатин (до 16%).

Агар - высокомолекулярное соединение типа полисахарида. Получают его из морских водорослей. Желатин - белковое вещество, получаемое из кожи, сухожилий, костей и хрящей животных. Оба эти вещества при растворении в горячей воде образуют коллоидный раствор, дающий при охлаждении плотный студень - гель. Студнеобразные среды, можно вновь разжижать (расплавлять) - нагреванием. Температура плавления агаровых сред составляет около 97ºС, застудневания - около 40ºС. Желатиновые среды плавятся при температуре 22-27°С, застудневают - при температуре около 20ºС.

Иногда готовят дифференциально-диагностические среды, которые позволяют различать (дифференцировать) микроорганизмы, основываясь на особенностях их обмена веществ.

Для выращивания отдельных видов или специфических групп микроорганизмов используют элективные (избирательные) среды. Они малопригодны или совсем непригодны для большинства других микроорганизмов.

Для выращивания бактерий наиболее часто используют следующие общеупотребительные питательные среды:

Мясопептонный бульон (МПБ.) Готовят его варкой мясного фарша, свободного от жира, соединительной и костной тканей, в двойном количестве воды в течение часа. Для улучшения питательных и других свойств к отфильтрованной жидкой части при кипячении добавляют 0,5 % NaCl и 1 % пептона Раствором пищевой соды доводят рН в охлажденном бульоне до 7,2-7,4. Повторная фильтрация через бумажный фильтр позволяет получит прозрачный бульон. Готовый бульон разливают в колбы, пробирки и другую посуду.

Мясопептонный агар (МПА). К МПБ добавляют 1,5-2 % агара, нагревают до полного растворения последнего. Горячий раствор фильтруют через вату и разливают в пробирки и колбы. Во избежание застывания МПА при фильтровании рекомендуется применять воронку горячего фильтрования

Сухой агар - удобная для использования питательная среда заводского приготовления. Это бурого цвета порошок, реализуемый в герметично закрытых упаковках. Готовят высушиванием мясного или рыбного бульона. Кроме того, он содержит хлористый и фосфорно-кислый натрий. 5 г порошка вносят в 100 мл холодной воды. Смесь тщательно перемешивают взбалтыванием и нагревают при помешивании до полного растворения агара. Разливают по колбам или пробиркам.

Мясопептонный желатин (МПЖ). К МПБ добавляют 10-15 % желатина, дают ему набухнуть и нагревают до растворения. Доводят рН среды до нужного значения. Горячий МПЖ фильтруют через бумажный фильтр и разливают в пробирки и колбы.

Для выращивания грибов и дрожжей применяют солодовое сусло. Неохмеленное пивное сусло, получаемое на пивоваренных заводах из ячменного солода, является хорошей средой для раз­вития дрожжей и плесневых грибов. Заводские сусло фильтруют и разбавляют водопроводной водой до плотности 1,04-1,05 г/см².

Сусло-агар (СА). К солодовому суслу добавляют 2% агара. После расплавлений полученный горячий раствор тот­час фильтруют через вату и разливают в сосуды.

После разливки все сосуды со средами плотно закрывают и стерилизуют.