2.2. Экспериментальная часть исследований

2.2.1. Эксперименты в условиях in vivo

Эксперименты in vivo выполнены на 188 белых нелинейных крысах-самцах массой 200-220 г., находящихся в стандартных условиях вивария на типовом рационе в соответствии с нормами, утвержденными Приказом Минздрава СССР № 1179 от 10.10.1983 г., свободном доступе к пище и воде при 12-14-часовом световом дне.

Все манипуляции с экспериментальными животными выполнялись в соответствии с правилами гуманного отношения к животным, методическими рекомендациями по их выведению из опыта и эвтаназии, регламентированными «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР № 775 от 12.08.1977 г.) и положениями Хельсинской Декларации ВОЗ (1997).

Моделирование термической травмы. Под эфирным наркозом с участков кожи спины, предназначенных для ожога, выбривали шерсть, депилировали, обмывали теплым физиологическим раствором и вытирали насухо. Для создания модели термической травмы использовали плоскодонный стеклянный стакан из химического стекла с диаметром дна 4 см, наполненный дистиллированной водой с температурой 100^оС.

Площадь ожога вычисляли по формуле площади круга (S=πr²). В нашем эксперименте она составила 3,14•2² = 12,56 см². Для расчета поверхности тела у крыс использовали формулу Мее-Рубнера в модификации Lee: S=К•W^0,60, где S - поверхность тела в квадратных сантиметрах, К- коэффициент, равный 12,54, W- вес животного в граммах. Площадь поверхности тела животных в нашем эксперименте составила 316,44±12,67 см². Так как абсолютная площадь ожога была одинаковой во всех случаях (12,56 см²), то относительная площадь составила 3,97%±0,14%, т.е. около 4%.

В предварительных экспериментах с использованием морфологических методов исследования кожи в области травмы установлено, что для воспроизведения термической травмы ІІІА степени площадью 4% от поверхности тела крыс при использовании плоскодонного стеклянного стакана необходимое время контакта с кожей составляет 30 секунд. Кожный лоскут иссекали по границе раны с захватом участка неповрежденной кожи. Клиническими критериями термической травмы ІІІА являлось формирование пузырей со светлым содержимым, при вскрытии которых дно было розового цвета, струп желтого или светло-коричневого цвета, развитие коагуляционного некроза, распространяющегося до сосочкового слоя дермы. Ожоговая рана формировалась на 2-3 сутки от начала опыта.

Животные с термической травмой были случайным образом разделены на 2 основных группы: контрольная и опытная. Опытной группе с первых суток после ТТ на рану наносился эпидермальный фактор роста в составе препарата «Эбермин». В контроле использовался препарат «Сульфаргин», содержащий сульфадиазин серебра. В обеих группах препараты использовались 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактный контроль - белые нелинейные крысы, сопоставимые по возрасту и массе с животными основных групп.

На 1, 3, 7, 14, 21, 28 сутки от термической травмы из хвостовой вены забиралась кровь для определения общего количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, НСТ-теста, показателей фагоцитоза. Забор материала для определения показателей адаптивного иммунитета и исследования морфологии раны проводился на 7, 14, 21, 28 сутки.