3. Подсчет эритроцитов

Камеру кладут на предметный столик микроскопа, установленный горизонтально, и приступают к подсчету эритроцитов при малом увеличении микроскопа (объектив 8x, окуляр 10x или 15x). Поле зрения должно быть затемнено диафрагмой и несколько опущенным конденсатором. Подсчитывают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (всего в 5 x 16 = 80 малых квадратах), расположенных по диагонали. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границах квадратов руководствуются правилом Егорова: считают эритроциты, находящиеся внутри квадрата и на его верхней и левой границах.

Подсчитав, таким образом, сумму эритроцитов в 5 больших квадратах (т.е. в 80 малых), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном малом квадрате - Э/80. Зная, что объем пространства камеры над одним малым квадратом равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на кратность разведения (200), рассчитывают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови.

Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х = (А  4000  200) / 80,

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мкл крови;

А - число эритроцитов в 80 малых квадратах;

1/4000 мм³ - объем разведенной крови над одним малым

квадратом;

80 - число малых квадратов;

200 - степень разведения.

Полученное число эритроцитов умножают на 10⁶ и получают содержание клеток в 1 литре крови.

Ошибка метода составляет 2-3%.

Возможные источники ошибок при подсчете эритроцитов:

1. Образование сгустка во время взятия и разведения крови.

2. Несоблюдение условий, обеспечивающих должную высоту камеры (неправильный выбор покровного стекла и плохое его прижатие к камере).

3. Проведение подсчета сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не распределились равномерно и не осели.

4. Попадание воздуха в капилляр с кровью.

Оформление протокола. Указать чем разводится кровь для подсчета эритроцитов и почему. Написать формулу подсчета эритроцитов, провести ее анализ – описать значение всех цифр в формуле. Нарисовать фрагмент сетки Горяева, указать площадь малого квадрата и объем крови над ним. Начертить пять больших квадратов, указать подсчитанное количество эритроцитов в них. Записать нормальные значения количества эритроцитов у мужчин, женщин (новорожденных).

Вывод. Сравнить полученный результат с нормой.

2.1.2. Подсчет эритроцитов с использованием пробирочного

метода разведения крови

Для работы необходимы: донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия (желательно подкрасить красителем типа метиленового синего), микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4 мл разводящей жидкости и закрывают ее резиновой пробкой. Кровь в количестве 20 мкл набирают до метки в капилляр от гемометра Сали. Осторожно выдувают кровь из капилляра в пробирку и тщательно перемешивают и промывают капилляр разводящей жидкостью; полученное разведение можно приравнять к 1:200. Капиллярную пипетку промывают несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет эритроцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. в пунктах 2 и 3. Источник ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.