3.3.2. Определение группы крови системы резус

с помощью цоликлона анти-Д

Действующим началом цоликлона анти-Д являются моноклональные человеческие анти-Д-антитела. Последние вызывают агглютинацию эритроцитов, содержащих «Д» антиген.

Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлон анти-Д, предметные стекла (чашка Петри), пипетка, стеклянная палочка.

Проведение работы. Принцип определения группы крови человека системы резус тот же, что и при определении по системе АВО.

1. На чашку Петри (предметное стекло) наносят большую капле (0,1 мл) цоликлона анти-Д.

2. Рядом с этой каплей помещают маленькую каплю исследуемой крови (0,01-0,05 мл).

3. Индивидуальной стеклянной палочкой смешивают кровь с цоликлоном анти-Д.

4. Через 20-30с после смешивания реагента с кровью начинают легкое покачивание чашки Петри и продолжают его в течение 3 минут.

5. Наблюдают за ходом реакции визуально.

6. Результаты реакции учитывают через 3 минуты. Положительный результат выражается в плотной крупнолепестковой реакции агглютинации.

Заключение о присутствии Д-антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации: есть реакция агглютинации – кровь резус положительная (Rh+), нет агглютинации – кровь резус отрицательная (Rh-).

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученный на чашке Петри результат: обозначить содержание анти-Д-антител в капле цоликлона и указать отсутствие или наличие агглютинации, например,

Rh+ Rh-

группа крови

неизвестная кровь (эритроциты)

цоликлон анти-Д

Вывод. Назвать и правильно записать группу исследуемой крови (Rh+ или Rh-). Обосновать это заключение. Реципиенту с какой группой крови системы резус можно перелить Rh+, Rh- кровь. Дать определение резус-иммунизации. Зарисовать схему резус-иммунизации крови.

4. СВОЙСТВА ПЛАЗМЫ. мЕХАНИЗМЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

4.1. Анализ механизма свертывания крови

Свертывание крови относится к важнейшим защитным реакциям организма. Свертываясь, кровь образует сгустки, что ведет к прекращению кровотечения. Свертывание крови обусловлено функцией свертывающей системы, под которой понимают сложный биохимический и физиологический комплекс.

Для работы необходимы: донорская кровь, 7 пробирок (одна из них мерная), штатив, растворы гепарина (1:100), щавеливокислого натрия (5%), хлористого кальция (5%), пипетка для забора плазмы крови, металлическая “метелка” для дефибринирования крови, стакан с холодной водой и льдом, секундомер, центрифуга.

Проведение работы

1. Взять пробирки 1, 2, 3, 4, 5. Предварительно в пробирку 4 налить 1-2 капли гепарина (раствор 1:100), в пробирку 5 – 0,5 мл щавелевокислого натрия. Затем во все пробирки налить донорскую кровь в следующем объеме:

Пробирка 1 – 1 мл,

Пробирка 2 – 1 мл,

Пробирка 3 – 4 мл,

Пробирка 4 – 1 мл,

Пробирка 5 – 4 мл.

Заметить время взятия крови.

2. Пробирку 1 поместить в штатив, а пробирку 2 – в стакан с холодной водой. В обеих пробирках наблюдать скорость свертывания крови. Для этого каждую минуту с момента взятия крови наклонять пробирку. Как только образуется сгусток, кровь перестает вытекать из пробирки. Отметить разницу во времени свертывания крови в 1-ой и 2-ой пробирках.

3. Кровь в пробирке 3 сразу же после взятия взбалтывать «метелочкой» в течение 10-15 минут. Выпадающие нити фибрина наматываются на «метелочку» и кровь теряет способность свертываться. Под водопроводной водой отмыть нити фибрина от эритроцитов.

4. Содержимое пробирки 4 хорошо перемешать, через 15-20 минут наклонить пробирку и отметить отсутствие сгустка.

5. Содержимое пробирки 5 хорошо перемешать. Выждав 20 минут, половину крови из пробирки 5 отлить в пробирку 6 и добавить в нее 1 каплю 5% раствора CaCl₂. Отметить восстановление способности крови к свертыванию.

6. Пробирку 5 отдать лаборанту для центрифугирования. В процессе центрифугирования кровь в пробирке 5 разделится на плазму и форменные элементы. Осторожно специальной пипеткой перенести плазму в пробирку 7, прибавить к ней одну каплю 5% раствора CaCl₂. Отметить, что процесс свертывания крови протекает в плазме. Проследить время образования «белого» сгустка.

Оформление протокола. Начертить таблицу, заполнить ее по образцу, в графе 4 написать ожидаемый результат, в графе выводы – указать причину соответствующей реакции. Зарисовать схемы: сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза, таблицу антисвертывающей системы крови.

Таблица оформления протокола

№ пробирки	Количество крови	Воздействие	Изменение времени свертывания*	Выводы**
1	2	3	4	5
	1	
	1	холод
	4	дефибринирование
	1	гепарин
	4	щавелевокислый натрий
	2 мл из пробирки 5	CaCl2
	плазма из пробирки 5 после центрифугирования	CaCl2

Примечание: * - увеличилось, уменьшилось, осталось в норме;

** - графу 5 сделать самой широкой, чтобы вместить текст выводов

4.2. Определение времени свертывания крови по способу Масс и Магро

Метод основан на установлении скорости появления нитей или сгустка фибрина в исследуемой крови.

Для работы необходимы: кровь донора, часовое стекло, покрытое тонким слоем парафина, капилляр от гемометра Сали, вазелиновое масло.

Проведение работы. На покрытое парафином часовое стекло помещают каплю вазелинового масла. Из пальца капилляром, предварительно смоченным изнутри вазелиновым маслом, берут каплю крови и помещают ее в каплю вазелинового масла на стекле. Каждые 2 минуты кровь снова насасывают в капилляр, выдувая ее затем обратно на часовое стекло. С момента наступления свертывания насосать кровь становится невозможно. Замечают время от момента взятия крови до начала свертывания. В норме у человека при температуре воздуха 15 – 25^оС по этой методике оно равно 8 – 12 минутам.

Оформление протокола. Кратко опишите принцип метода определения времени свертывания крови по методу Масс и Магро.

Вывод. Укажите нормальную величину этого показателя.

4.3. Коагулография

Принцип: с помощью прибора электрокоагулографа регистрируются начало свертывания и изменения электрического сопротивления сгустка крови во времени. Метод позволяет определять образование, ретракцию и лизис сгустка крови.

Реактивы: 1. 3,8% раствор цитрата натрия;

2. раствор хлорида кальция (концентрация указывается в инструкции к прибору).

Оборудование: Коагулограф Н-334.

Материал для исследования: цельная нестабилизированная кровь (в этом случае реактивы не требуются), цитратная кровь, цитратная плазма.

Нормальные величины: устанавливаются эмпирически для каждого прибора.

Клиническое значение: с помощью электрокоагулографа (коагулографа) могут быть выявлены и количественно оценены хронометрическая и/или структурная гипокоагуляция (замедленное свертывание и /или образование сгустка с недостаточно высоким сопротивлением), хронометрическая и/или структурная гиперкоагуляция (ускоренное свертывание и /или образование сгустка с чрезмерно высоким сопротивлением), а также гипофибринолиз и гиперфибринолиз (замедленное или ускоренное уменьшение электрического сопротивления образовавшегося сгустка крови после достижения максимальных значений).

Проведение работы

1. Произвести включение прибора и подогревающей камеры термостата кнопкой ВКЛ.

2. Открыть крышку камеры термостата.

3. Взять подогретую в течение 10 мин ячейку и залить в нее кровь.

4. Закрыть крышку ячейки и установить ее в камеру, на качающийся держатель.

5. Закрыть камеру и нажать кнопку МОТОР на передней панели коагулографа.

6. Запись вести в течение 20-30 мин.