БХ методички 2 курс / Metodichki / методы / биохимия крови

91

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците в норме: 300-

380 г/л.

Тромбоциты

(Plt – Platelets, кровяные пластинки)

Тромбоциты – мелкие безъядерные клетки, овальной или круглой формы, диаметром 2-4 мкм, являющиеся «осколками» цитоплазмы мегакариоцитов костного мозга. В норме в кровотоке тромбоциты имеют дисковидную форму. При активации они приобретают сферичность и образуют специальные выросты (псевдоподии). С помощью подобных выростов кровяные пластинки могут слипаться друг с другом или прилипать к поврежденной стенке сосуда. Стимуляторами активации тромбоцитов являются тромбин, адреналин, коллаген.

Продолжительность жизни тромбоцитов составляет 7-10 дней. Физиологические колебания количества тромбоцитов в крови в течение суток – примерно 10%. У женщин во время менструации количество тромбоцитов может уменьшиться на 25-50%.

Основная их роль – участие в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе, что определяется в основном следующими функциями этих клеток:

ангиотрофической (способностью поддерживать нормальную структуру и функции стенок микрососудов);

адгезивно-агрегационной (способностью образовывать в повреждённых сосудах первичную тромбоцитарную пробку);

способностью поддерживать спазм повреждённых сосудов;

участием в свертывании крови и влиянием на фибринолиз;

способностью переносить на своей мембране циркулирующие иммунные комплексы, факторы свертывания, антикоагулянты, биологически активные вещества.

(MPV – mean platelet volume)

Среднее значение объема измеренных тромбоцитов, измеряется в фемтолитрах (fl). Отмечается связь размера тромбоцитов с их функциональной активностью, содержанием в гранулах

92

тромбоцитов биологически активных веществ, склонностью клеток к адгезии (прилипанию к стенкам сосудов), изменениями объема тромбоцитов перед агрегацией (склеиванием друг с другом). По мере старения тромбоцитов их объем уменьшается.

Средний объём тромбоцита в норме: 7,6-10,8 фл.

Увеличение MPV:

Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура

Макроцитарная тромбоцитодистрофия Бернара-Сулье

Аномалия Мея-Хегглина

Постгеморрагические анемии.

Снижение MPV:

Сидром Вискотта-Олдрича.

Тромбокрит

(PDW – ширина распределения тромбоцитов по размеру)

Это объемная фракция тромбоцитов в цельной крови, выражаемая в процентах (соотношение объемов тромбоцитов и плазмы). Величина тромбокрита зависит от количества и размера тромбоцитов.

Величина тромбокрита в норме: 0,1-9,9%.

Лейкоциты

(WBC – White Blood Cells, белые кровяные клетки)

Лейкоциты – являются ядросодержащими клетками крови, образуются в костном мозге и лимфатических узлах. Количество лейкоцитов в крови зависит от скорости притока клеток костного мозга и скорости выхода их в ткани.

Они формируют в организме человека мощный кровяной и тканевый барьеры против микробной, вирусной и паразитарной (гельминтной) инфекций, поддерживают тканевой гомеостазис и регенерацию тканей. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в клеточном и гуморальном иммунитете, обмене гистамина, гепарина реализуются антимикробные, антитоксические, антителообразующие и другие важнейшие компоненты иммунологических реакций.

Количество лейкоцитов в крови зависит от внешних факторов: времени суток (максимум – в вечернее время), сезона, изменения климата и метеорологических условий, приёма лекарственных

93

препаратов, влияния диагностических процедур, физиологического состояния организма (возраста, пола, беременности, фазы менструального цикла, приёма пищи, воздействия тепла или холода, физических нагрузок); и от патологических изменений в организме. Для того чтобы убедиться в стойкости изменений числа лейкоцитов, необходимо выполнять повторные исследования.

Лейкоциты крови представлены гранулоцитами, в цитоплазме которых при окрашивании выявляется зернистость (нейтрофильные, эозинофильные и базофильные лейкоциты), и агранулоцитами, цитоплазма которых не содержит зернистости (лимфоциты и моноциты).

Лейкоцитарная формула – процентное соотношение разных видов лейкоцитов в крови (миелоцитов, метамиелоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов и моноцитов).

Количество лейкоцитов в норме: 4-8,8 *109/л.

II. ДИАГНОСТИКА СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА

В клинической практике исследование системы гемостаза выполняется в следующих целях:

диагностика нарушений в системе гемостаза

выяснение допустимости оперативного вмешательства при выявленных нарушениях в системе гемостаза

проведение контроля за лечением антикоагулянтами прямого и непрямого действия, а также тромболитической терапии

Наиболее точная и достоверная диагностика функционального состояния системы гемостаза и противосвёртывающей системы осуществляется автоматическими анализаторами - коагулометрами.

94

Выполняемые коагуляционные тесты: АПТВ/АЧТВ, каолиновое,

кефалиновое, АВР, протромбиновое (c автоматическим расчетом МНО/INR, NR, % по Квику), количественное определение факторов свертывания (VIII, IX и др.) и антикоагулянтов (в том числе антитромбина III, протеинов С и S), тромбиновое, анцистроновое,

95

лебетоксовое, уровень фибриногена по Клаусу, амидолитические, иммунологические и многие другие.

Три метода измерения в одном приборе:

КЛОТТИНГОВЫЕ ТЕСТЫ РТ, АРТТ, Fbg, TT, и др. ХРОМОГЕННЫЕ ТЕСТЫ AT-III, PLG, a2AP, PC и др. ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ FDP,

D-Dimer

Основные принципы методов используемые при работе коагулометров:

Клоттинговый: Метод детекции, основанный на светорассеивании;

Процентный тест, детекция конечной точки, кинетическое измерение

Анализатор осушествляет произвольный доступ одновременно по 5 выбранным параметрам с автоматическим построением калибровочных кривых и контрольных исследований, поддерживается формат в %Р или в INR. Пять позиций для срочных образцов дает возможность срочных исследований

Автоматическое предварительное разведение образцов (согласно протоколу), автоматическое разведение при превышении пределов измерений. Возможна постановка на борт анализатора до трех флаконов одного реагента, что удобно при больших объемах исследований

Интеллектуальные возможности программного обеспечения позволяют анализатору исследовать патологические образцы по специальному протоколу, согласно которому при определенных результатах анализаторы автоматически проводят уточняющие тесты

12 файлов для контроля качества полностью удовлетворяют требования лаборатории. Помимо стандартных методов по графикам L - J в анализаторах внедрен современный метод контроля качества, основаннный на правилах Westgard

Полностью автоматизированный протокол для мульти-

иидентификации ингибируюшей активности

96

 Все тесты программируются оператором, что обеспечивает гибкость и открытость анализатора, что соответствует современным лабораторным требованиям. Анализаторы могут работать с обычными пробирками или с вакутейнерами, могут также считывать штрих-коды, передовать или получать данные из внешней лабораторной сети

ГЕМОСТАЗ

Система гемостаза – совокупность функционально – морфологических и биохимических механизмов, обеспечивающих сохранение жидкого состояния крови, предупреждение и остановку кровотечений, а также целости кровеносных сосудов.

В свёртывании крови различают 2 звена: клеточный (сосудисто - тромбоцитарный) и плазменный (коагуляционный) гемостаз.

Под клеточным гемостазом понимают адгезию клеток, агрегацию клеток, а также высвобождение из форменных элементов веществ, активирующих плазменный гемостаз.

Плазменный (коагуляционный гемостаз) представляет каскад реакций, в которых участвуют факторы свёртывания крови, завершающийся процессом фибринообразования. Образовавшийся фибрин подвергается далее разрушению под действием плазмина.

В организме человека эти два звена связаны друг с другом.

СХЕМА ТРОМБОЦИТАРНОГО ГЕМОСТАЗА

97

Схема 2.

I. Соудисто-тромбоцитарный (первичный) гемостаз

Соудисто-тромбоцитарный (первичный) гемостаз нарушают:

1.изменения сосудистой стенки (дистрофические, иммуноаллергические и др. капилляропатии)

2.тромбоцитопении

3.тромбоцитопатии (сочетание тромбоцитопатий и капилляропатий)

Сосудистый компонент гемостаза Показатели: проба щипка и проба жгута

Тромбоцитарный компонент гемостаза Показатели, характеризующие тромбоцитарный компонент гемостаза:

1.Определение длительности кровотечения по Дуке – характеризуетэластичность кровеносных сосудов, отражает функциональное состояние тромбоцитов (способность к адгезии и агрегации). Практическое значение имеет удлинение времени кровотечения.

2.Подсчёт количества тромбоцитов (150-400)

3.Тромбоцитарная формула

4.Определение агрегации тромбоцитов с АДФ

5.Определение агрегации тромбоцитов с коллагеном

6.Определение агрегации тромбоцитов с адреналином

7.Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином (определение активности фактора Виллебранда)

Определение агрегации тромбоцитов с различными индукторами агрегации играет важную рольв дифференциальной диагностике трмбоцитопатий.

АДФ, адреналин и тромбин – даже в низких концентрациях вызывают агрегацию кровяных пластинок без участия

98

тромбоцитарных факторов, не провоцируя при этом активацию тромбоцитов и реакцию высвобожденеия!

А в высоких концентрациях эти вещества запускают активацию и дегрануляцию тромбоцитов, при этом тромбоксан т тромбоцитарные факторы вторично усиливают агрегацию кровяных пластинок, вызывая вторую волну агрегации. При дефектах реакции высвобождения (например при уремии) не бывает второй волны агрегации в ответ на эти стимулы. При миелопролиферативных заболеваниях отсутствует агрегация в ответ на введение адреналина.

Определение агрегации тромбоцитов с АДФ АДФ выступает вкачестве проагреганта. Тест возможен в 2-х вариантах:

1)Использование АДФ в концентрации 1*10 –5 М- для достижения одноволновой агрегации

2)Использование АДФ в концентрации 1*10 –7 М- для достижения двухволновой агрегации

Показателем является разница между оптической плотностью плазмы до начала агрегации и после достижения максимальной агрегации (характеризует интенсивность агрегации), а также оценивается скорость агрегации по уменьшению оптической плотности плазмы за 1-ю минуту агрегации.

Результаты: в виде агрегатограммы – одноволновая, 2-х волновая;; полная, неполная;обратимая, необратимая.

Агрегация тромбоцитов с коллагеном в плазме

Коллаген вызывает отсроченную агрегацию (достаточно выраженная латентная фаза) через гликопротеин Iаактивация фосфолипазы С.

Агрегация тромбоцитов с ристомицином в плазме

Антибиотик ристомицин (и его аналог ристоцетин) вызывают агрегацию через гликопротеин Ib, (который in vivo выступает как рецептор адгезии, а не агрегации), при обязательном участии фактора фон Виллебранда. При этом не происходит первичной метаболической активации кровяных пластинок. Ристомициновый тест важен для диагностики болезни фон Виллебранда.

II. Плазменные факторы свёртывания.

99

В свертывающую систему входят около 15 веществ (факторов) свертывания, содержащихся в плазме. По своей природе они относятся к белкам — протеазам и неферментным белкам. Неотъемлемым фактором свертывания являются ионы кальция и 3-й тромбоцитарный фактор.

Факторы свертывания крови вырабатываются организмом в неактивном состоянии. Если факторы из неактивных (проферментов) становятся активными ферментами, к их обозначению добавляется буква “а” (например, Х — неактивная форма фактора свертывания X, Ха—его активная форма). Если активным действием начинает обладать один из фрагментов фактора, к нему тоже добавляется буква “а”.

Международная номенклатура факторов свертывания крови Таблица 9.

Витамин"К"-зависимые факторы: II, VII, IX, X.

Чувствительные к тромбину факторы: I, V, VIII, XIII.

Факторы контакта : XII, XI, BM-кининоген, прекалликреин.

Факторы-сериновые протеазы: XII,XI,X,IX, X, VII, II, Плазмин

Схема 3.