Диагностические сыворотки для постановки реакций связывания комплемента

При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие антитела. При их определении в практике используются специфические диагностические сыворотки,содержащие такие антитела. Чаще они используются для определения типа вируса, вызвавшего то или другое заболевание. Показательным примером является приготовление специфических диагностических ящурных сывороток.Он вызывается одним из вариантов вируса ящура: А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3, Asia-1. Идентификацию штамма циркулирующего вируса ящура проводят с помощью реакции связывания комплемента (РСК). Специфическую типовую и вариантную сыворотки получают от морских свинок, которых заражают вирусосодержащей суспензией соответствующего типа, с добавлением к ней сапонина и спустя 30—40 суток дополнительно гипериммунизируют тем же материалом путем двух-четырех внутримышечных инъекций. Через 7—10 суток после последней инъекции морских свинок обескровливают и из крови готовят инактивированную сыворотку. Сыворотку проверяют в РСК на активность и специфичность. В качестве антигена для изготовления сывороток используют штаммы вируса ящура, адаптированные к организму новорожденных крольчат или к культурам клеток.

Моноклональные антитела и технологические приемы их получения

Антитела строго специфичны и способны выявить минимальные различия в химическом составе и пространственной конфигурации молекул. В результате сложной антигенной структуры многих микроорганизмов при иммунном ответе на них в организме образуются неоднородные антитела, то есть в сыворотке будут содержаться смесь антител. Последние продуцируются разными линиями В-лимфоцитов и направлены к различным детерминантам антигена. Если бы определенную линию лимфоцитов удалось выделить и культивировать вне организма, как культуры клеток, то полученный клон лимфоцитов продуцировал бы однородный тип антител — моноклональные антитела. В иммунологии такая идея возникла давно. Но, к сожалению, антителобразующие лимфоциты плохо растут в культуре и зачастую отмирают. В то же Время клетки злокачественной опухоли костного мозга, миеломы, обладая способностью к неограниченному росту, интенсивно продуцируют иммуноглобулины, идентичные между собой по структуре. То есть по сути это моноклональные антитела к неизвестному антигену.

Ученые давно стремились на основании гибридомной технологии получить такие клоны гибридных клеток, которые бы сочетали энергию размножения миолемных клеток с высокой продукцией антител- лимфоцитов, то есть, чтобы они постоянно продуцировали моклональные антитела.

Первые успехи в данном направлении были достигнуты англий¬скими учеными Келлером и Милстейном (1975). Они получили в результате слияния клеток миеломы РЗ и лимфоцитов из селезенки мышей, иммунизированной эритроцитами в присутствии полиэтиленгликоля, гибридные клетки, которые при культивировании в селективной среде продуцировали иммуноглобулины только к эритроцитам. Такие клетки-химеры или гибридомы, будучи полученными путем слияния антителобразующих лимфоцитов и опухолевых клеток, наследовали способность к неограниченному росту в культуре клеток и в то же время к продукции антител определенной специфичности (моноклональных антител).

Но следует иметь в виду, что после слияния клеток двух различных линий образуется клон, антитела, которые он образует, необязательно сразу будут моноклональными в иммунологическом смысле, так как в каждой клетке гибридного клона вначале присутствуют хромосомы обеих родительских клеток. Экспрессия этих хромосом ведет к продукции как селезеночных, так и миеломных иммуноглобулинов. Однако на ранних стадиях размножнеия гибридных клеток они быстро утрачивают часть хромосом. Важным при этом является выделить клоны клеток, потерявших хромосомы, присущие миеломе, но сохранившие хромосомы иммунных лимфоцитов. То есть выделяют те клоны клеток, которые синтезируют только тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов к заданному антигену.

После открытия Келлера и Милстейна, признанного одним из важнейших за период с 1970 по 1980 годы, в мире стали проводиться работы по получению моноклональных антител к различным по природе антигенам с помощью гибридомных клеток. Так, Л. П. Дьяконову с сотрудниками (1996) в течение 1982—1995 годов удалось получить (новые мутантные клетки СПЭВ ТК~ и ТР ГГФРТ- и осуществить их гибридизацию с лимфоцитами и другими не растущими в культуре ткани клетками (энтероцитами и др.). Получение культур клоновых клеток открывает широкую перспективу иммунологических исследований по получению вида и типоспецифических моноклональных антител к различным возбудителям заболеваний. При мечении моноклональных антител флуорохромами и ферментами появляется возможность широко использовать моноклональные антитела их при диагностике бактерийных, грибковых и вирусных заболеваний с применением РИФ и ИФА.