Преципитирующие диагностические сыворотки и технология их приготовления

Преципитирующие сыворотки предпочтительно готовят для диагностики сибирской язвы. Первыми для этих целей получили преципитирующую сыворотку Асколи и Валенти в 1910 году. Они иммунизировали внутривенным способом лошадей слабовирулентной культурой возбудителя сибирской язвы. В последующие годы методы получения качественных сывороток совершенствовались. В настоящее время в нашей стране преципитирующую сибиреязвенную сыворотку получают путем внутривенной иммунизации лошадей слабовирулентными штаммами 916-1, Ш-15, 94 и штаммом из матрикса второй вакцины Ценковского. Указанные штаммы выращиваются на гороховом агаре в течение 18—20 часов при 36—37° С. Культуры соответствующих штаммов смывают с поверхности горохового агара физиологическим раствором, тщательно шуттелируют, фильтруют и стандартизируют. Лошадей гипериммунизируют поочередным введением каждого из указанных штаммов внутривенно. Всего делают 16—17 инъекций антигена, увеличивая дозу с 5 до 70 мл. В период гипериммунизации делают контрольные исследования на накопление антител. По окончании гипериммунизации кровь от лошадей берут через 9—16 суток после последнего введения антигена из расчета 800 мл на 50 кг массы животного. Из крови получают сыворотку методом ее цитрирования с последующим сепарированием и дефибринизацией плазмы. Сыворотку консервируют 0,5%-м раствором фенола. Затем сыворотку выдерживают в специальных отстойниках в течение двух месяцев, после чего подвергают ее стерилизующей фильтрации, разливают во флаконы емкостью 50—100 см3, закрывают их резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. После этого препарат подвергается биологическому контролю.

Следует отметить, что совершенствование получения наиболее качественных преципитирующих сибиреязвенных сывороток продолжается, так, установлено, что в ряде случаев они обладают неспецифичными свойствами и дают положительные реакции преципитации с термостабильными антигенами из Вас. megaterium и Вас. anthracoides (Митин С. С., Кретинина А. И., Петрова Л. А., 1996).

Преципитирующие сибиреязвенные сыворотки применяют для проверки кожевенного сырья на сибирскую язву, а также при исследовании на сибирскую язву патологического материала, особенно из загнивших трупов.

Кроме сибиреязвенных преципитирующих сывороток, готовят и применяют преципитирующие диагностические сыворотки, используемые для диагностики бруцеллеза, других бактериальных и ряда вирусных заболеваний (ящура, бешенства, лейкоза, инфекционнойанемии). В этих случаях реакция преципитации ставится не в пр бирках, а в агаровом геле в специально выштампованных в не луночках.

Реакции преципитации используют в судебно-медицинской и ветеринарной экспертизе. Технологический принцип приготовления таких преципитирующих сывороток такой же как и преципитирующих сибиреязвенных сывороток. Но в качестве доноров чаще всего используют кроликов.

Антитоксические диагностические сыворотки \

Чаще всего антитоксические сыворотки готовят с целью диагностики клостридиозов: злокачественного отека, инфекционной энтеротоксемии, ботулизма и других заболеваний, возбудители кото-рых образуют сильные экзотоксины и имеют множество серологических типов. В качестве антигенов при получении таких сывороток используют анатоксины.

Технологическим примером получения таких сывороток является изготовление антитоксических сывороток Cl. perfringens типов А, В, С, D, Е и F.

В качестве продуцентов таких диагностических сывороток чаще используют валухов тонкорунных пород в возрасте двух лет. Антигенами являются очищенные и концентрированные анатоксины, полученные с помощью соответствующих типов Cl. perfringens. Для каждого типа указанного микроба используют отдельных продуцентов, которых содержат в отдельных боксах. Антигены овцам вводят подкожно в возрастающих дозах с принятым интервалом 4—6 суток между инъекциями. Гипериммунизацию животных прекращают после получения сывороток с активностью, предусмотренной инструкцией по ее изготовлению. Поэтому в процессе эксплуатации у продуцентов берут кровь и в ее сыворотке определяют титры антитоксинов. Активность каждого типа антитоксических сывороток устанавливают в реакции нейтрализации специфических токсинов при введении их смесей белым мышам или крысам и выражают ее количеством антитоксических единиц.

Получение антитоксических сывороток для диагностики других инфекционных заболеваний осуществляют по такой же схеме. Но в качестве продуцентов могут использоваться другие животные. Разумеется, что в схеме гипериммунизации животных в каждом случае имеются свои особенности.