8.9. Требования преаналитического этапа исследования белков

• Общие требования к взятию крови

• При взятии пробы крови должны быть приняты во внимание такие факторы, как положение тела и суточные колебания аналитов.

• Положение тела существенно влияет на ренин, повышение активности фермента наблюдается при перемещении из положения лежа в положение стоя.

• Пик содержания кортизола наблюдается между 4 часами ночи и 6 часами утра. Такие гормоны, как соматотропный, лютеинизирующий и фолликулостимулирующий высвобождаются порциями, и поэтому несколько проб крови, взятых в близкие временные интервалы должны быть оценены по значению медианы.

• Многие гормоны, например, инсулин, проинсулин и С-пептид могут быть стабилизированы только помещением контейнера с образцом на лед немедленно после взятия крови. Такие образцы должны быть быстро подвергнуты центрифугированию, предпочтительно в центрифуге с охлаждением при 4° С, и сыворотка должна храниться замороженной до исследования. Перед исследованием замороженные образцы конечно должны быть полностью разморожены.

• Также очень важно предотвратить возникновение гемолиза, поскольку при этом снижаются значения и инсулина, и проинсулина.

• Проведение обработки крови сразу после ее после свертывания и замораживание сыворотки при -70° С позволяет сохранить длительную стабильность таких аналитов, как гастрин, пепсиноген-1 и инсулин.

• Большинство аналитов, исследуемых с помощью иммунохимических методов, может определяться в сыворотке и/или гепаринизированной плазме.

• Взятие крови с использованием ЭДТА и последующее быстрое замораживание плазмы признано адекватным способом сохранения нестабильных гормонов белковой природы: зндорфина, вазоактивного интестинального пептида, вещества P и панкреатического пептида.

• В связи с ингибирующим влиянием на металпопротеиназы ЭДТА плазма рекомендуется также для исследований АКТГ, паратиреоидного гормона и глюкагона.

• В некоторых случаях использование только одного ЭДТА не достаточно для стабилизации аналита. Так, даже когда кровь собирается с ЭДТА, плазма быстро отделяется и хранится в идеальных условиях, происходит активация комплемента. Однако, добавление к ЭДТА синтетического ингибитора протеазы нафамостат мезилата значительно улучшает стабильность компонентов комплемента.

8.10. Транспорт и депонирование железа в организме. Соотношение между трансферрином и ожсс, определение ферритина и трансферрина

• Основным местом всасывания железа является тонкий кишечник. Железо в пище содержится в основном в форме Fе⁺³, но лучше всасывается в двухвалентной форме Fе⁺². Под воздействием соляной кислоты желудочного сока железо высвобождается из пищи и превращается из Fе⁺³в Fе⁺².

• В энтероцитах содержатся трансферрин и ферритин, которые регулируют в них абсорбцию железа. Между трансферрином и ферритином существует динамическое равновесие по связыванию железа. Трансферрин связывает железо и переносит его к мембранному переносчику.

• Железо в сосудистом русле соединяется с трансферрином - гликопротеидом, синтезируемым в печени. В физиологических условиях и при дефиците железа только трансферрин важен как железотранспортирующий белок; с гаптоглобином и гемопексином транспортируется исключительно гем.

• Неспецифическое связывание железа с другими транспортными белками, в частности альбумином, наблюдается при перегрузке железом при высоком уровне насыщения трансферрина.

• Биологическая функция трансферрина заключается в его способности легко образовывать диссоциирующие комплексы с железом, что обеспечивает создание нетоксического пула железа в кровотоке, который доступен и позволяет распределять и депонировать железо в организме.

• Металлосвязывающий участок молекулы трансферрина не является строго специфичным для железа. Трансферрин может связывать также хром, медь, магний, цинк, кобальт, однако сродство этих металлов ниже, чем железа.

• Основным источником сывороточного пула железа (трансферрин-связанного железа) является поступление его из ретикулоэндотелиальной системы (РЭС - печень, селезенка), где происходит распад старых эритроцитов и утилизация освобождающегося железа. Небольшое количество железа поступает в плазму при абсорбции его в тонком кишечнике.

• В норме только треть трансферрина насыщена железом.

Депонирование

• Основными формами депонированного железа являются ферритин и гемосидерин, которые связывают "избыточное" железо и откладываются, практически, во всех тканях организма, но особенно интенсивно в печени, селезенке, мышцах, костном мозге.

• Ферритин - комплекс, состоящий из гидрата закиси Fе⁺³и белка апоферритина. Железо высвобождается из ферритина в двухвалентной форме. Ферритин локализуется преимущественно внутриклеточно, где играет важную роль в кратковременном и длительном депонировании железа, регуляции клеточного метаболизма и детоксикации избытка железа. Предполагается, что основными источниками сывороточного ферритина являются моноциты крови, макрофаги печени (клетки Купфера) и селезенки.

• Ферритин, циркулирующий в крови, практически не участвует в депонировании железа, однако концентрация ферритина в сыворотке в физиологических условиях прямо коррелирует с количеством депонированного железа в организме. При дефиците железа, которое не сопровождается другими заболеваниями, так же, как при первичной или вторичной перегрузке железом, показатели ферритина в сыворотке дают достаточно точное представление о количестве железа в организме. Поэтому в клинической диагностике ферритин должен использоваться в первую очередь как параметр, оценивающий депонированное железо.

• Гемосидерин по структуре мало отличается от ферритина. Это ферритин в макрофаге в аморфном состоянии.

• После того как макрофаг поглощает молекулы железа, например, после фагоцитоза старых эритроцитов, немедленно начинается синтез апоферритина, который накапливается в цитоплазме, связывает железо, образуя ферритин.

• Макрофаг насыщается железом в течение 4 ч, после чего в условиях перегрузки железом в цитоплазме молекулы ферритина агрегируют в мембранно-связанные частицы, известные как сидеросомы. В сидеросомах молекулы ферритина кристаллизуются, формируется гемосидерин.

• Гемосидерин "упакован" в лизосомах и включает комплекс, состоящий из ферритина, окисленных остатков ли-пидов и других компонентов. Гранулы гемосидерина представляют собой внутриклеточные отложения железа, которые выявляются при окраске цитологических и гистологических препаратов по Перлсу. В отличие от ферритина гемосидерин не растворим в воде, поэтому железо гемосидерина с трудом подлежит мобилизации и практически не используется организмом.