14. Спорообразование у бактерий: стадии, локализация спор, их химический состав. Примеры патогенных спорообразующих бактерий.
Спорообразование
Спора – покоящаяся форма бактерий. Образуются при неблагоприятных условиях (высушивание, недостаток питательных веществ, изменение температуры среды и др.). Образование спор способствует сохранению вида. При образовании споры метаболическая активность клетки снижается, и она покрывается плотной многослойной оболочкой. Высокая устойчивость спор обусловлена толщиной и особым химическим составом оболочки, низким содержанием в ней воды, высоким содержанием солей кальция. Спорообразование происходит в течение 18-20 ч; при попадании микроорганизма в благоприятные условия спора в течение 4-5 ч прорастает в вегетативную форму.
Спорообразующие аэробные бактерии называются бациллами, а анаэробные – клостридиями.
П
роцесс
спорообразования (споруляция)
1.Начинается с формирования спорогенной зоны внутри бактериальной клетки и представляет собой уплотненный участок цитоплазмы с расположенным в нем нуклеоидом
2.Затем происходит образование предспоры путем изолирования спорогенной зоны от остальной части с помощью ЦПМ
3.Между внутренними и наружными слоями последней образуется кортекс, состоящий из особого пептидогликана. В дальнейшем внешняя сторона мембраны покрывается плотной оболочкой, в состав которой входят белки, липиды и другие соединения. Затем вегетативная часть клетки отмирает и спора может сохраняться во внешней среде в течение длительного времени.
В благоприятных условиях споры прорастают, проходя через стадии:
1. Активации (набухание) – готовность к прорастанию, связанное с увеличением в споре количества воды
2. Инициация (активация ферментов, участвующих в энергетическом и пластическом метаболизме) –происходит выделение в среду экссудата прорастания, содержащего дипиколинат кальция, прорастание длится несколько минут.
3
.
Вырастание
(разрушение плотных оболочек споры) -
характеризуется быстрым ростом,
разрушением оболочки и выходом проростка.
Варианты расположения спор:
15. Атипичные формы бактерий: протопласты, сферобласты, л-формы, фильтрующиеся формы. Условия их образования, биологические особенности.
Атипичные бактерии - это бактерии, которые не окрашиваются по Граму, а скорее остаются бесцветными: они не являются ни грамположительными, ни грамотрицательными. К ним относятся Chlamydiaceae , Legionella и Mycoplasmataceae (включая микоплазмы и уреаплазмы ); Rickettsiaceae также часто считается нетипичным. Спирохеты также считаются атипичными бактериями.
16. Сложные дифференциальные методы окраски бактерий. Метод Грама, Пример Г+ и Г- бактерий.
Сложные методы окраски - в них последовательно применяется несколько красителей.
Метод Грама - был предложен в 1884 г. датским ученым Х. Грамом. Основан на способности некоторых форм бактерий образовывать в клетке прочное соединение основных красителей – генцианвиолета и йода, которое не обесцвечивается при последующей обработке спиртом, в результате чего эти бактерии сохраняют сине-фиолетовую окраску и называются грамположительными Грам(+). Другие бактерии не обладают свойством удерживать окраску и при работе спиртом обесцвечиваются, приобретая красную окраску Грам(–).
Окраска по способу Грама в модификации Синева
1. На зафиксированный мазок положить полоску фил. бумаги, пропитанной 1% спиртовым р-ром кристаллвиолета
2. Налить на бумагу 2-3 капли воды и оставить на 2 минуты
3. Снять бумажку и налить раствор Люголя на 1 минуту
4. Обесцветить 950 спиртом на 15-20 секунд
5. Смыть водой
6. Дополнительно красить разведенным фуксином 1 минуту
7. Смыть водой, высушить и микроскопировать
Грам(+) микробы окрашиваются в фиолетовый цвет. Грам(-) микробы - в красный цвет, исключение (гонококк и менингококк Грам (-). Палочковидные спорообразующие бактерии Грам (+), не образующие споры Грам (-). Извитые бактерии Грам (-).
Порядок окраски по Граму: а – окраска генциановым фиолетовым;
б– окраска раствором Люголя; в – обесцвечивание спиртом; г – окраска фуксином.