Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Методы и технологии получения фармсубстанций растительного и минерального происхождения. Монография
.pdf
Таблица 5
№ Время,
мин.
Область
%
Название аминокислоты
г/100 г белка
1
16,42
3,99 11,06
Аспарагиновая кислота
1,77 2 19,27
1
2,78 Треонин
0,44 3 20,87
2,64 7,33 Серин
1,17 4 24,42
4,15 11,51
Глутаминовая кислота
1,86 5 41,43
3,21 8,9 Глицин
1,42 6 43,55
2,42 8,7 Аланин
1,39 7 51,12
1,84 5,09 Валин
0,81 8 58,47
0,913
2,53 Изолейцин
0,4 9 59,87
2,24 6,21 Лейцин
0,99 10 63,78
0,6 1,67 Тирозин
0,27 11 65,93
0,52 1,45 Фенилаланин
0,23 12 68,25
0,77 2,14 Гистидин
0,34 13 70,53
1,37 3,8 Лизин
0,61 14 74,68
0,64 1,77 Аргинин
0,28
Содержание аминокислот в экстракте семян лотоса орехоносного
Рис. 2. Хроматограмма органических компонентов, полученных из лотоса орехоносного
Содержание нейтральных аминокислот было выше (6,85 г/100 г), чем кислых
(3,68 г/100 г) или основных (1,23 г/100 г). Глутаминовая кислота была самой распространённой. Общее содержание незаменимых аминокислот было 3,76 г/100 г, а
количество лейцина было самым высоким из незаменимых аминокислот.
Общее содержание фенолов в экстракте семян лотоса орехоносного составило 1,7 г/100 г, флавоноидов – 0,82 г/100 г.
Таким образом, химический состав семян лотоса орехоносного показал наличие аминокислот и жирных кислот, в том числе 4 ненасыщенных жирных кислот,
составляющих высокий процент среди общего количества. Кроме того, в экстракте
семян было обнаружено высокое содержание фенолов и флавоноидов.
31
2.5. Исследование первоначального состава экстрактов солодки голой,
Удаление
«
пятна
» вещества от старта
-----------------------------------------------------------
Удаление фронта растворителя от старта
Система
Соотношения
Этанол
– вода
90 : 10
Этанол
– вода
– уксусная кислота
90: 10 : 1
Гексан
– этанол
90 : 10
Гексан
– этанол
10 : 90
Гексан
– этилацетат
20 : 80
Этанол
– вода
– аммиак
90 : 10 : 1
Ацетон
1
Ацетон
– метанол
80 : 20
Изопропанол
1
Ацетонитрил
1
цмина песчаного и тысячелистника мелкоцветкового
методом тонкослойной хроматографии
Все экстракты и полученные в результате колоночной хроматографии фракции
первоначально анализировали с помощью метода тонкослойной хроматографии
(ТСХ). Аналитическую ТСХ проводили с использованием пластинок, покрытых силикагелем Macherey-Nage. Хроматографирование проводили восходящим методом.
В качестве подвижной фазы (системы элюирования) была выбрана смесь этилового
спирта, воды и аммиака в соотношении 90 : 10 : 1 соответственно (табл. 6). Для детектирования после хроматографирования применялась камера с кристаллическим
йодом. Характеристикой каждого вещества при ТСХ служит значение Rf:
Rf =
Различные соединения, находящиеся в смеси, поднимаются с разными скоростями в зависимости от их сродства к сорбенту (Кирхнер, 1981; Березкин и др.,
1994; Столяров и др., 2002; Cseke et al., 2006).
Таблица 6
Системы растворителей, изученные
при выборе подходящей системы элюирования
Результаты ТСХ представлены на рисунках с 3 по 9. Целью проведения ТСХ
было выявление количества выделенных компонентов в экстрактах исследуемых
растений.
На рисунке 3 показаны результаты проведённой ТСХ 50%-ных этанольных
и водных экстрактов соцветий H. arenarium и A. micrantha, корней Gl. glabra. Как
видно, из этанольного экстракта соцветий H. arenarium данной системой элюирования была выделена одна группа веществ так же, как из водного экстракта. Из этанольного экстракта соцветий A. micrantha выбранная элюирующая система выделила две группы веществ, а из водного – одну. Из этанольного и водного экстрактов
32
корней Gl. glabra были выделены две разные по составу группы веществ (имеющие
разные показатели Rf = 0,05; Rf = 0, 7 – этанольный экстракт и Rf = 0,78 и 0,69 –
для водного экстракта).
Rf
0,82
0,8
0,79
0,78
0,77
0,76
0,71
0,69
0,12
0,05
1 2 3 4 5 6
Рис. 3. ТСХ экстрактов исследуемых растений: 1 – 50%-ный этанольный экстракт соцветий
H. arenarium; 2 – 50%-ный этанольный экстракт соцветий A. micrantha;
3 – 50%-ный этанольный экстракт корней Gl. glabra; 4 – водный экстракт соцветий H. arenarium;
5 – водный экстракт соцветий A. micrantha; 6 – водный экстракт корней Gl. Glabra;
Rf – Ratio of fronts (от англ. rate – соотношение, fronts – фронт)
На рисунке 4 показаны результаты ТСХ фракций водного экстракта соцветий
H. arenarium. Методом колоночной хроматографии было получено шесть фракций,
пять из которых содержали одну группу химических компонентов (Rf = 0,77) и одна –
две группы, причём одну отличную по показателю Rf (и по расположению «пятна»
вещества).
Rf
0,77
0,72
1 2 3 4 5 6
Рис. 4. ТСХ фракций водного экстракта соцветий Helichrysum arenarium
33
Результаты ТСХ фракций 50%-ного этанольного экстракта соцветий H. arenarium (рис. 5) показали, что из восьми выделенных методом колоночной хромато-
графии фракций только 4-я, 5-я и 6-я содержат группы веществ, выделяемых данной элюирующей системой (этанол : вода : аммиак 90 : 10 : 1). В 5-ой фракции были обнаружены две группы веществ. Все выделенные компоненты приблизительно
относятся к разным веществам, т.к. имеют разное расположение и показатели Rf.
Причём из водного и этанольного экстракта соцветий H. arenarium были выделены
разные соединения, что следует из сравнения расположения «пятен» веществ на
пластинке и показателей Rf.
Rf
0,22
0,14
0,12
0,1
1 2 3 4 5 6 7 8
Рис. 5. ТСХ фракций 50%-ного этанольного экстракта соцветий Helichrysum arenarium
Выбранной элюирующей системой в шести фракциях 50%-ного этанольного
экстракта соцветий A. micrantha вещества были выделены из первых пяти фракций
(рис. 6). В 1-ой фракции обнаружено пять разных компонентов, во 2-ой – четыре,
в 3-ей – четыре, в 4-ой – три, в 5-ой – одно вещество. Причём в 1-ой, 2-ой и 3-ей
фракциях два вещества имеют одинаковое положение и идентичны также по показателю Rf, которые равны 0,89 и 0,87.
Из рисунка 7 видно, что с помощью выбранной элюирующей системы из полученных методом колоночной хроматографии десяти фракций 50%-ного этанольного экстракта корней Gl. glabra было выделены несколько веществ, относящихся
к разным группам. В 1-ой, 2-ой и 3-ей фракциях содержались две группы веществ
(Rf = 0,8 и Rf = 0,87), в 4-ой фракции – одна отличная по положению пятна группа
веществ, в 5-ой и 6-ой – одно вещество (Rf = 0,61 и 0,63), в 7-ой – одно отличное по
показателю Rf соединение, в 9-ой – две группы веществ и в 10-ой – три соединения, причём два из них идентичны компонентам 1-ой, 2-ой и 3-ей фракций
(Rf = 0,87 и Rf = 0,8).
34
Rf
0,89
0,87
0,77
0,75
0,71
0,64
0,62
0,6
0,57
0, 54
0,02
1 2 3 4 5 6
Рис. 6. ТСХ фракций 50%-ного этанольного экстракта соцветий Achillea micrantha
Рис. 7. ТСХ фракций (неподвижная фаза в колоночной хроматографии – XAD 1600)
Rf
0,9
0,88
0,87
0,8
0,78
0,69
0,63
0,61
0,56
50% -ного этанольного экстракта корней Glycyrrhiza glabra
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Из водного экстракта корней Gl. glabra было выделено 11 фракций, в которых
методом ТСХ было выделено несколько групп веществ (рис. 8). Из 1-ой, 2-ой, 3-ей
и 4-ой фракций выбранной элюирующей системой были выделены три соединения,
причём из всех четырёх фракций выделено по два одинаковых вещества (Rf = 0,85
и Rf = 0,4). В 1-ой, 2-ой и 3-ей фракциях была обнаружена еще одна группа идентичных веществ (Rf = 0,65). 5-ая, 6-ая, 7-ая и 8-ая фракции содержали две группы
идентичных компонентов (Rf = 0,47 и Rf = 0,36). В 5-ой, 6-ой и 7-ой фракциях также
обнаружено по одной группе разных по показателю Rf (по положению «пятен») соединений. 9-ая, 10-ая и 11-ая фракции содержали две группы веществ (Rf = 0,52
и Rf = 0,43). В 9-ой и 10-ой фракциях также обнаружено по одному идентичному
компоненту (Rf = 0,35). В одиннадцатой фракции содержалась еще одна группа
35
веществ с показателем Rf = 0,85, идентичная группе, обнаруженной в 1-ой, 2-ой,
3-ей и 4-ой фракциях.
Метод ТСХ показал, что во фракциях водных и 50%-ных этанольных экстрактов корня солодки голой методом колоночной хроматографии элюирующей системой этанол : вода : аммиак 90 : 10 : 1 были выделены примерно одинаковые группы веществ. В этом случае можно говорить, скорее, о количественных отличиях по
содержащимся в экстрактах веществам, чем о качественных.
Rf
0,89
0,85
0,83
0,76
0,65
0,52
0,47
0,43
0,4
0,36
0,35
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Рис. 8. ТСХ фракций (неподвижная фаза в колоночной хроматографии – XAD 1600)
водного экстракта корней Glycyrrhiza glabra
В двадцати двух фракциях 50%-ного этанольного экстракта корней Gl. glabra,
выделенных колоночной хроматографией, где в качестве неподвижной фазы использовали силикагель, методом ТСХ были выделены следующие вещества, «пятна» которых обнаружены на пластинках (рис. 9).
Rf
0,9
0,89
0,85
0,84
0,72
0,66
0,64
0,32
0,31
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Рис. 9. ТСХ фракций (неподвижная фаза в колоночной хроматографии – силикагель)
этанольного экстракта корней Glycyrrhiza glabra
36
В 1-ой фракции обнаружено одно вещество, отличное от других. Во 2-ой, 3-ей
и 4-ой фракциях выделены идентичные компоненты с Rf = 0,89. Также во 2-ой
фракции выделено ещё одно вещество. Из 3-ей и 4-ой фракций также выделили
идентичную группу веществ (Rf = 0,64). 6-ая, 7-ая и 8-ая фракции содержат одну
группу веществ (Rf = 0,9), а в 10-ой, 11-ой и в 12-ой фракциях обнаружено две
группы соединений с Rf = 0,89 и Rf = 0,66. 15-ая и 16-ая фракции также содержали
две идентичные группы компонентов (Rf = 0,85 и Rf = 0,72), причём в 17-ой и 18-ой
фракциях тоже были обнаружены вещества с Rf = 0,72. 19-ая и 20-ая фракции содержат один и тот же компонент (Rf = 0,32), как и 21-ая и 22-ая фракции (Rf = 0,84).
Сравнивая результаты ТСХ для фракций 50%-ного этанольного экстракта корней
Gl. glabra, выделенных колоночной хроматографией, где в качестве неподвижной
фазы использовали силикагель, и фракций 50%-ного этанольного экстракта корней
Gl. glabra, выделенных колоночной хроматографией, где в качестве неподвижной
фазы использовали XAD 1600 (рис. 7, 9), можно сказать, что выделены примерно
одинаковые группы веществ (имеются количественные отличия), но во втором случае, выделены вещества (Rf = 0,31 и Rf = 0,32), отсутствующие на ТСХхроматограмме фракций, выделенных колоночной хроматографией с использованием в качестве сорбента XAD 1600.
2.6. Исследование антибактериальных компонентов соцветий
цмина песчаного и тысячелистника мелкоцветкового
методом газовой хроматографии / масс-спектрофотометрии
Этанольные (50 %) экстракты соцветий тысячелистника мелкоцветкового и
цмина песчаного исследовали методом газовой хроматографии-массспектрофотометрии (ГХ/МС) (Herbert et al., 2003) на хроматографе-массспектрометре Shimadzu GC/MS (модели QP-5050А, Shimadzu, Япония). Использовали колонку типа DBI, 30 м; 0,53 мм (идентификатор) и 1,5 мкм толщину плёнки
(J&W,США). В качестве подвижной фазы использовали газ-носитель – гелий. Использовали следующий режим программирования температуры: температура колонки составляла 50 °С (удерживается 1 мин.), затем градиентный подъём температуры 10 °С/мин. до 100 °С (удерживается 1 мин.), затем градиентный подъём
температуры со скоростью 5 °С/мин. до 250 °С, (удерживается 5 мин.), затем градиентный подъём со скоростью 5 °С/мин. до 270 °С (удерживается 2 мин.) и градиентный подъём со скоростью 3,5 °С/мин. до 280 °С (удерживается 1 мин.). Температура детектора и инжектора 250 и 280 °С соответственно. Вводимый объём пробы – 2 мкл с расходом 20 мл/мин.
Методом газовой хроматографии-масс-спектрофотометрии (ГХ/МС) в этанольном (50%-ном) экстракте соцветий тысячелистника мелкоцветкового было
определено 19 соединений (табл. 7, 8).
37
Состав 50%-ного этанольного экстракта соцветий
Содержание от общего объ
ё
ма
α-пинен
939 2,46 β-пинен
982 2,1 Камфен
945 0,5 Сабинен
974 0,1 Лимонен
1029
1,3 1,8-цинеол
1043
8,47 γ-терпинен
1179
4,9 Линалоол
1097
0,56 Ментенол
1132
2,93 Камфора
1156
10,62
Борнеол
1169
1,37 Терпинеол
1174
1,53 Пиперитон
1224
34,15
Борнилацетат
1237
1,32 Карвон
1242
24,93
β-
ситостерол
0,7 Стигмастерол
0,24 Бутилфталат
1,37 Стеариновая кислота
0,45
Наименование
Химическая
тысячелистника мелкоцветкового
Таблица 7
Наименование компонента Время удержания
экстракта, %
Основные компоненты 50%-ного этанольного экстракта соцветий
тысячелистника мелкоцветкового (метод ГХ/МС)
компонента
формула
α-пинен С10Н16
β-пинен С10Н16
Структурная формула Тип
Бициклический
монотерпен
Бициклический
монотерпен
Таблица 8
38
Продолжение таблицы 8
Камфен С10Н16
Сабинен С10Н16
Лимонен С10Н16
Бициклический
монотерпен
Бициклический
монотерпен
Монотерпен
1,8-цинеол С10Н18О
γ-терпинен С10Н16
Линалоол С10Н18О
Моноциклический
терпен
Терпен
Терпеновый спирт
39
Продолжение таблицы 8
Ментенол С10Н17ОН
Камфора С10Н16О
Борнеол С10Н18О
Терпеновый спирт
Терпеновый спирт
Терпеновый спирт
Терпинеол С10Н18О
Пиперитон С10Н16О
Борнилацетат С12Н20О2
Терпеновый спирт
Терпеноид, кетон
Терпеноид, сложный
эфир
40
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]