Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Методы и технологии получения фармсубстанций растительного и минерального происхождения. Монография

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
07.09.2026
Размер:
2 Мб
Скачать
☆
Ультразвуковая (УЗ) экстракция является недорогой, простой и эффектив­ной альтернативой традиционным методам экстракции. Основные преимущества использования ультразвука в твердофазной и жидкостной экстракции заключаются в увеличении выхода продукта и скорости (L. Wang et al., 2006).
УЗ экстракция была использована для экстрагирования нутрицевтиков, таких, как эфирные масла и жиры, из растений (S. Chemat et al., 2004; G. Cravotto et al., 2004; H. Li et al., 2004; J.L. Luque-Garcia et al., 2003; A. Sharma et al., 2004), получе­ния диетических добавок (T.J. Mason et al., 1996; R. Bruni et al., 2002; M. Melecchi et al., 2002; S. Albu et al., 2004).
УЗ экстракция включает применение высокоинтенсивных высокочастотных зву­ковых волн и их взаимодействие с материалами. УЗ экстракция связана с ультразву­ковыми эффектами акустических кавитаций. При ультразвуковом воздействии твёр­дые и жидкие частицы вибрируют и ускоряются, и из-за этого растворённое веще­ство быстро диффундирует из твёрдой фазы в растворитель (M.G. Cares et al.,
2009). Процедура включает использование ультразвука с частотами от 20 до 2000 кГц, что увеличивает проницаемость клеточных стенок и производит кавита­цию. Если интенсивность ультразвука увеличивается в жидкости, то она достигает точки, в которой внутримолекулярные силы не способны удерживать молекулярную структуру в целости, поэтому она разрушается и образуются пузырьки. Коллапс пу­зырьков может приводить к физическим, химическим и механическим воздействиям, разрушению биологических мембран для облегчения высвобождения экстрагируе­мых соединений, повышения проникновения растворителя в клеточные материалы и улучшения переноса массы (M.G. Cares et al., 2009; A.H. Metherel et al., 2009). Од­ним из недостатков этой процедуры является случайный, но известный вредный эффект УЗ энергии (более 20 кГц) на активные компоненты лекарственных растений путём образования свободных радикалов и, следовательно, нежелательных изме­нений в молекулах лекарственного средства (M.M. Cowan, 1999). Использование УЗ позволяет увеличить выход продукта (L. Hui et al., 1994; A. Sharma et al., 2004; H. Li et al., 2004). Ультразвук также может увеличить кинетику процесса экстракции и даже улучшить качество экстрактов (G. Cravotto et al., 2004; E.C. Schinor et al., 2004). Ис­пользование ультразвука в качестве дополнения к обычной экстракции обеспечивает не только качественное, но и более быстрое, экономичное экстрагирование БАВ с использованием общедоступного оборудования (R. Bruni et al., 2002).
Микроволновая экстракция (МЭ) предлагает быструю доставку энергии в общий объём растворителя и растительного сырья с последующим нагревом растворителя и сырья, эффективно и равномерно, потому что вода из растительно­го сырья поглощает микроволновую энергию, разрушению клеток способствует внутренний перегрев, что облегчает десорбцию химических веществ из сырья и восстановление нутрицевтиков (B. Kaufmann et al., 2002). Микроволны обладают электрическими и магнитными полями, перпендикулярными друг другу. Электриче­ское поле вызывает нагрев посредством двух одновременных механизмов, а именно дипольного вращения и ионной проводимости. Дипольное вращение обусловлено
11
выравниванием электрического поля молекул, обладающих дипольным моментом, как в растворителе, так и в твёрдом образце. Это колебание вызывает столкнове­ния с окружающими молекулами, приводящими к высвобождению тепловой энер­гии в среду. При частоте 2,45 ГГц это явление происходит в 4,9 × 109 раз быстрее, и, таким образом, нагрев происходит очень быстро. В отличие от классических ме­тодов проводящего нагрева микроволны одновременно нагревают весь образец (B. Kaufmann et al., 2002).
Когда растительный материал погружен в прозрачный растворитель микро­волн, теплота микроволнового излучения непосредственно достигает твёрдого ве­щества, не поглощаясь растворителем, что приводит к мгновенному нагреву оста­точной влаги в твёрдом теле. Нагрев вызывает испарение влаги и создаёт высокое давление пара, которое разрушает клеточную стенку подложки и высвобождает её в растворитель. Растворителями, используемыми для большинства операций с МЭ, являются те, которые обладают высокой диэлектрической постоянной и спо­собностью сильно поглощать микроволновую энергию, однако селективность экс­тракции и способность среды взаимодействовать с микроволнами могут модулиро­ваться с использованием смесей растворителей. Нередко используют бинарную смесь растворителей, причём только один растворитель способен поглощать мик­роволны (V. Camel, 2001). Обычно считается, что полярные растворители лучше, чем неполярные (Kothari et al., 2010).
МЭ используется для экстрагирования нутрицевтиков по нескольким причи­нам: снижение времени экстракции, уменьшение расхода растворителей и увели­чение выхода продукта. МЭ также сопоставима с другими современными методами экстракции, такими, как сверхкритическая флюидная экстракция (СФЭ), в связи с простотой процесса и низкой стоимостью (L. Wang et al., 2006). MЭ представляет собой простой, экологически чистый и экономичный метод извлечения биологиче­ски активных соединений из различных растительных материалов (S. Hemwimon et al., 2007). Применение MЭ для растительных материалов было впервые примене­но Ганцлером и сотрудниками в 1986 году (B. Kaufmann et al., 2002).
Тем не менее, по сравнению с СФЭ в случае с МЭ необходимы дополнитель­ная фильтрация или центрифугирование для удаления твёрдого остатка. Кроме того, эффективность микроволн может быть снижена, когда либо целевые соеди­нения, либо растворители являются неполярными, или когда они изменчивы.
Хотя микроволновая экстракция органических соединений из природных объ­ектов и дополнительная обработка при выщелачивании в металлургии широко ис­следованы (M. Tomaniova et al., 1998; S. Spar Eskilsson et al., 2000; M. Al-Harahsheh et al., 2004; M. Barriada-Pereira et al., 2003), опубликовано мало результатов в обла­сти экстрагирования биологически активных веществ. Обзор публикаций по МЭ из натуральных продуктов был сделан B. Kaufmann с соавторами (2002).
С помощью МЭ нутрицевтики могут быть экстрагированы из растительного сырья более быстрым способом, чем обычной твердофазно-жидкостной экстрак­цией. 12-минутная МЭ позволяет извлечь 92,1 % артемизинина из полыни
12
однолетней Artemisia annua L., в то время как несколько часов экстракции аппара­том Сокслета позволяет получить около 60 % (J.Y. Hao и др., 2002). За 4–5 минут МЭ (этанол – вода) извлекается больше глицирризиновой кислоты из корня солод­ки, чем при простой экстракции (этанол – вода) при комнатной температуре в тече­ние 20–24 часов (X. Pan et al., 2000).
Сверхкритическая флюидная экстракция (СФЭ) – технологический про­цесс, заключающийся в переводе одного или нескольких компонентов твёрдой или жидкой смеси в «сверхкритический газ» – флюид. Производится контактированием смеси разделяемых компонентов с газообразным экстрагентом при температуре и давлении выше критической точки. Наибольшее распространение в качестве экс­трагентов получили СО2, этан, этилен, пропан, SF6 и др. (S.S. Handa et al., 2008).
СФЭ является потенциальной альтернативой традиционным методам экс­тракции с использованием органических растворителей для извлечения биологи­чески активных компонентов из растений (W.K. Modey et al., 1996; Y.H. Choi et al., 1997; J.R. Dean et al., 2000; E. Ellington et al., 2003; M. Hamburger et al., 2004; C.D. Andras et al., 2005). Эта техника может быть использована для извлечения растительных компонентов, особенно липидов (M.G. Bernardo-Gil et al., 2002), эфирных масел (A. Berna et al., 2000; J.A.P. Coelho et al., 2003; B. Marongiu et al.,
2003) и ароматических соединений (L. Wang et al., 2006).
СФЭ может предотвратить окисление липидов. M.G. Bernardo-Gil с соавтора­ми (2002) обнаружил, что свободные жирные кислоты, стерины, триглицериды и токоферолы, содержащиеся в масле лесного ореха, извлекаются СФЭ так же, как экстракцией гексаном. Тем не менее, СФЭ масла была более защищена от окисле­ния неустойчивых полиненасыщенных жирных кислот, чем при экстракции гекса­ном. Масло, экстрагируемое сверхкритическим CO2, более чистое, чем при экстра­гировании н-гексаном (R. Marr et al, 2000; A. Meireles et al, 2003).
При экстрагировании могут быть получены более высокий выход продукта и эфирные масла более высокого качества, содержащие больше ароматических соединений, чем полученные при обычной дистилляции (L. Wang et al., 2006).
Процентное применение СФЭ для экстракции БАВ из растительного сырья в промышленных масштабах остаётся небольшим из-за липофильного характера сверхкритического CO2. Кроме того, многие активные вещества растений (феноль­ные соединения, алкалоиды и гликозиды) плохо растворимы в CO2 и, следова­тельно, не извлекаемы методом СФЭ (M. Hamburger et al., 2004).
Основными параметрами, влияющими на качество экстракта, являются:
часть растения, используемая в качестве исходного материала;
растворитель, используемый для экстракции;
процедура извлечения.
Влияние экстрагированного растительного фитокомпонента зависит от харак­тера растительного материала, его происхождения, степени обработки, содержа­ния влаги, размера частиц.
13
Различия в методах экстракции, которые будут влиять на количество и вторич­ный метаболитный состав экстракта, зависят от типа и времени добычи, температуры, природы и концентрации растворителя, полярности, растительного материала.
Натуральные компоненты на основе растений могут быть получены из любой части растения – коры, листьев, цветов, корней, фруктов, семян и т.д., – т.к. все ча­сти растения содержат активные компоненты.
Успешное определение биологически активных соединений из растительного материала в значительной степени зависит от типа используемого растворителя в процедуре экстракции.
Свойства хорошего растворителя при экстракции растений:
низкая токсичность;
лёгкость испарения при низкой температуре;
продвижение быстрой физиологической абсорбции экстракта;
консервативное действие;
неспособность вызывать сложность или диссоциации экстракта.
Факторами, влияющими на выбор растворителя, являются:
количество экстрагируемых фитохимикатов;
темп добычи;
разнообразие экстрагированных соединений;
разнообразие экстрагированных ингибирующих соединений;
простота последующей обработки экстрактов;
токсичность растворителя в процессе биоанализа;
потенциальная опасность для здоровья экстрагентов.
На выбор растворителя влияет то, что предназначено для извлечения. По­скольку конечный продукт будет содержать следы остаточного растворителя, рас­творитель должен быть нетоксичным и не должен вмешиваться с биоанализом. Выбор также будет зависеть от соединений, подлежащих экстракции. Изменение методов извлечения обычно зависит от длины периода экстракции, используемого растворителя и его pH, температуры, размера частиц растительных тканей, соот­ношения растворителя к образцу.
Основной принцип состоит в том, чтобы измельчить растительный материал (су­хой или влажный) в более тонкий, что увеличивает площадь поверхности для извле­чения, тем самым увеличивая её скорость. В более ранних исследованиях сообща­лось, что идеальное соотношение растворителя к сухому весу – 10 : 1 (по объёму).
Растворителями, используемыми для экстракции активного компонента, яв­ляются: вода, этанол, метанол, хлороформ, эфир и ацетон. Водная обработка рас­тительного сырья при определённых условиях позволяет переходить в раствор та­ким соединениям, как пектины, моно-, ди- и трисахариды, таниды, циклические спирты, органические кислоты и некоторые минеральные соединения. При исполь­зовании органических растворителей в раствор попадают воски, смолы, масла, фенолы, терпены, олифатические и ароматические углеводы, стерины и другие соединения (табл. 1).
14
Таблица 1
Вода
Этанол
Метанол
Хлороформ
Эфир
Ацетон
Антоцианы
Таннины
Антоцианы
Терпеноиды
Алкалоиды
Фенол
Растворители, используемые для экстракции активного компонента
Крахмал Таннины
Сапонины
Терпеноиды
Полипептиды
Лектины
Полифенолы
Полиацетилены
Флавоноиды
Терпеноиды
Стерины
Алкалоиды
Терпеноиды
Сапонины
Таннины
Ксантоксилины
Лактоны
Флавоны
Феноны
Полифенолы
Флавоноиды
Терпеноиды
Кумарины
Жирные кислоты
Флавоноиды
Обычно считается, что смесь водно-спиртовых растворителей (смесь спирта и воды в различных пропорциях) даёт высокий выход экстракции, что обусловлено их расширенным диапазоном полярности.
В качестве растворителя распространено использование растительных масел с получением разнообразных масляных экстрактов, применяемых в косметических и фармацевтических препаратах (А.Н. Шиков и др., 2004).
При интенсификации процесса экстракции можно воздействовать на расти­тельное сырьё несколькими способами: физическим (в электромагнитном и ультра­звуковом полях), механическим, термодинамическим, гидравлическим, в турбу­лентном потоке экстрагента и др.
Выбор метода выделения активных компонентов с наилучшим выходом и максимальной чистотой из природных источников в основном зависит от природы соединений и сырья, которое будет обрабатываться (V. Kothari et al., 2009).
Параметры для выбора подходящего метода экстрагирования:
1) перед выполнением экстракции необходимо выполнить проверку подлин­ности материала, который будет подвергаться экстрагированию. Любые посторон­ние вещества должны быть полностью устранены;
2) использовать правильную часть растения и в целях контроля качества ре­гистрировать возраст растения и время, время года и место сбора;
3) условия, используемые для сушки растительного материала, во многом за­висят от характера его химических составляющих. Обычно предпочтительным яв­ляется воздушный поток горячего или холодного воздуха для сушки. Если для экс­тракции необходимо использовать сырой препарат с высоким содержанием влаги, следует включить соответствующие поправки на вес;
4) следует определить методы измельчения и избегать, насколько это воз­можно, методов, которые выделяют тепло;
5) порошковый растительный материал следует пропускать через подходя­щие сита для получения требуемых частиц однородного размера;
6) характер составляющих:
а) если терапевтическое значение лежит в неполярных составляющих, может
использоваться неполярный растворитель;
15
б) если составляющие термолабильны, холодная мацерация и перколяция являются предпочтительными. Для термостабильных компонентов подходят экс­тракция Сокслета (если используются неводные растворители) и отвар (если вода является растворителем);
c) подходящие меры предосторожности должны приниматься при работе с компонентами, которые ухудшаются во время нахождения в органических рас­творителях, например, флавоноидами и фенилпропоидами;
д) в случае горячей экстракции следует избегать превышения требуемой тем­пературы;
е) стандартизация времени извлечения важна, поскольку:
недостаточное время означает неполное извлечение;
если время экстракции больше, нежелательные компоненты также могут
быть извлечены;
ж) количество экстракций, необходимых для полного извлечения, так же важ­но, как и продолжительность каждой экстракции;
7) следует указывать и контролировать качество воды или растворителя;
8) процедуры концентрирования и сушки должны обеспечивать безопасность и стабильность активного составляющего. Широко используются сушка при пони­женном давлении, лиофилизация.
1.2. Получение экстрактов из разных частей растений и изучение их состава
1.2.1. Получение экстрактов из разных частей лотоса орехоносного
В качестве сырья для выделения компонентов с психотропными, гиполипиде­мическими, иммунотропными и антиоксидантными свойствами был выбран лотос орехоносный Nelumbo nucifera (Н.А. Ломтева, 2016).
Водно-спиртовой экстракт семян лотоса орехоносного был приготовлен со­гласно протоколу WHO CG-04. Этот способ экстрагирования использовался для получения экстракта с гиполипидемическими и антиоксидантными свойствами. Для этого 500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния и под­вергали спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе. В итоге получали око­ло 5 % вязкого смолообразного вещества. Раствор экстракта семян лотоса орехо­носного (0,5%-ный) был приготовлен на физиологическом растворе.
Способом экстрагирования психотропных, иммунотропных и антиоксидантных компонентов растений была экстракция 60%-ным раствором этилового спирта в дистиллированной воде. После приготовления соответствующего раствора эти­лового спирта эти растворы применялись для экстракции биологически активных веществ семян, листьев, лепестков и коробочек лотоса орехоносного. Семена, коробочки, лепестки и листья лотоса орехоносного отдельно измельчали до по­рошкообразного состояния. 20 г каждого порошка помещали в 500 мл 60%-ного
16
этанола на 3 часа при 60 °С в термостате. Спиртовые экстракты фильтровали, за­тем отгоняли спирт в ротационном испарителе при 60 °С. Растворы экстрактов вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда для исследования психо­тропных, иммунотропных и антиоксидантных свойств.
1.2.2. Экстракция фенольных соединений из семян лотоса орехоносного
Семена лотоса орехоносного измельчают в порошок. Растительный порошок подкисляют соляной кислотой (рН от 1,5 до 3,6) и экстрагируют в течение 1,5 часов н-гексаном в соотношении 10 : 1 в орбитальном шейкере при температуре окружа­ющей среды для удаления жира. Экстракт фильтруют с использованием GF/F фильтровальной бумаги через воронку Бюхнера и удаляют фильтрат, содержащий липиды. Остаток реэкстрагируют непрерывно или «шагами», используя разные растворители в разных пропорциях – от 3 : 1 до 12 : 1. Время экстрагирования в орбитальном шейкере – от 30 минут до 24 часов. Новый экстракт также фильтру­ют с использованием GF/F фильтровальной бумаги через воронку Бюхнера, и по­лучают готовый фильтрат. Объединённые фильтраты выпаривают досуха на ро­торном испарителе, а остаток растворяют в метаноле и выдерживают при -20 ºС для последующего анализа.
Общее содержание фенола в экстракте семян лотоса орехоносного определяют фотоколориметрически, в соответствии с модификацией метода (Т. Gutfinger, 1981). Добавляют метанольный раствор растительных экстрактов (0,1– 0,3 мл), 20 мл дистиллированной воды и 0,625 мл реагента Фолина – Чокалтеу, через 3 минуты добавляют 2,5 мл насыщенного раствора Na2CO3. Всё смешивают и разбавляют дистиллированной водой до 25 мл. Через час измеряют оптическую плотность образца при 725 нм. Общие флавоноиды извлекают следующим образом. 5 г образца гомогенизируют с 40 мл 75 % метанола и т­бутилгидрохиноном. Добавляют 10 мл 6N соляной кислоты, тщательно перемешивают и кипятят при температуре 90ºС в течение 2 часов. После охлаждения супернатант фильтруют через бумажный фильтр и переносят в колбу с метанолом. Экстракт хранят в жидком азоте при -80ºС для дальнейшего анализа.
Флавоноиды можно косвенно определить по общим фенольным соединениям. Определение общего содержания фенольных соединений, измеряемых как эквивалент галловой кислоты с помощью реагентов Фолина и Чекалтеу. 1 мл образца (разбавляют до 25-50 % от исходной концентрации метанола), 0,5 мл реагента Фолина-Чекалтеу (2N) и 3 мл NaCO (200 мг/мл) смешивают. Реакционную смесь встряхивают 15 минут при комнатной температуре и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при 725 нм.
1.2.3. Экстракция жирных кислот
Экстракцию жирных кислот проводили методом метанольно-хлороформной экстракции липидов. Связавшиеся нелипидные фракции отмывают три раза от липидного экстракта смесью СН3ОН:Н2О (1:1). Липиды в хлороформе высушивают
17
над безводным сульфатом натрия, затем растворитель удаляют путем нагревания при 60ºС в вакууме.
Липидные образцы омыливают в течение ночи уксуснокислым КОН (20 %) при комнатной температуре. Жирные кислоты освобождают от калия подкислением со­ляной кислотой (5N) с последующей экстракцией эфиром. Эфирный экстракт про­мывают три раза дистиллированной водой, затем сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют (A.J. Vogel, 1975).
Жирные кислоты, полученные из липидных образцов, и стандартные жирные кислоты растворяют в небольшом количестве безводного метанола и добавляют небольшими порциями раствор эфирного диазометана, пока не прекратится выде­ление газа. Бледно-жёлтый цвет смеси указывает на избыточность диазометана. Реакционную смесь оставляют на 10 минут и выпаривают эфир под струёй азота при комнатной температуре. Две капли бидистилированного раствора хлороформа добавляют для растворения жирных кислот метиловым эфиром. Жирные кислоты определяют газо-жидкостной хроматографией (Фараг и др., 1981).
1.2.4. Экстракция биологически активных веществ с антибактериальными свойствами
В качестве сырья для выделения компонентов с антибактериальными свой­ствами были выбраны корни солодки голой Glycyrrrhiza glabra L., соцветия цмина песчаного Helichrysum arenarium L. и тысячелистника мелкоцветкового Achillea micrantha Willd. (Астафьева, 2013).
Растения были собраны на территории Астраханского региона: корни Gl. glabra – в Приволжском районе, соцветия A. micrantha и H. arenarium – на терри­тории Наримановского района.
Одним из способов экстрагирования антибактериальных компонентов расте­ний была экстракция 50%-ным раствором этилового спирта в дистиллированной воде. После приготовления соответствующего раствора этилового спирта эти рас­творы применялись для экстракции биологически активных веществ соцветий цми­на песчаного и тысячелистника мелкоцветкового, корней солодки голой. Экстрак­цию раствором 50%-ного этилового спирта проводили в соотношениях 1 : 5 и 1 : 10. 20 г сырья заливали 100 мл раствора, или 10 г сырья заливали 100 мл раствора, после чего смесь тщательно перемешивали, помещали в склянки из тёмного стек­ла и экстрагировали в течение 7–10 дней при постоянном перемешивании. В неко­торых опытах экстрагирование проводили в течение двух недель.
После окончания экстракции экстракты фильтровали с экстрагируемыми ком­понентами от растительного сырья (отжима). Экстракты помещали во флаконы под ватными пробками и в сухо-воздушном стерилизаторе нагревали 3-кратно при тем­пературе 85 0С для полного испарения остатков спирта.
Также проводили экстракцию корней солодки голой такими экстрагентами, как этиловый спирт 96 %, этилацетат и диэтилкарбонат. 30 г измельчённых корней за­ливали 150 мл раствором соответствующего элюента. Сверху колбы с растительным
18
сырьём и растворителем устанавливали обратный холодильник, соединённый с одной стороны с краном подачи воды, с другой – замкнутый на себя. Колбы по­мещались на водяной бане при постоянном перемешивании на магнитной мешалке на 48 часов. Затем полученный экстракт фильтровали через бумажный фильтр.
Водный экстракт из растительного сырья готовили по следующей методике: 5 г сырья заливали 200 мл холодной дистиллированной воды, нагревали до темпе­ратуры 90 °С и настаивали при поддержании данной температуры в течение 60 минут. После этого экстракт фильтровали через марлевый фильтр, а затем – через бумажный фильтр.
1.2.5. Экстракция биологически активных веществ с антиоксидантными свойствами
Как сырьё для получения антиоксидантных компонентов были выбраны со­цветия бархатцев распростёртых Tagetes patula L. T. patula относится к группе так называемых пряно-ароматических или пряно-вкусовых растений. Входящие в их состав эфирные масла и другие биологически активные вещества улучшают по­лезные качества продуктов питания, возбуждают деятельность вкусовых и пище­варительных органов, усиливают усвояемость пищевых продуктов. Также отмеча­ют их консервирующие, антисептические и бактерицидные свойства (Пряно­ароматические и пряно-вкусовые растения, 1989).
Растения собирали на территории Астраханского региона (п. Начало) в авгу­сте 2014 года. Извлечения из соцветий бархатцев получали методом экстрагирова­ния двумя растворителями: 70%-ным раствором этанола и дистиллированной во­дой (Попко и др., 2015).
Вода как самый полярный растворитель извлекает, как правило, большее ко­личество всех имеющихся полярных веществ, этиловый спирт же обладает изби­рательным элюирующим действием в отношении веществ фенольной природы.
Для приготовления 70%-ного этанольного экстракта из соцветий бархатцев T. patula 10 г измельчённого растительного сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, добавляли 150 мл 70%-ного этанола и пятикратно кипятили в течение часа (Папаяни и др., 2012). Извлечение фильтровали через несколько слоёв марли, за­тем – через бумажный фильтр.
С целью получения 70%-ного этанольного экстракта из соцветий T. patula 10 г измельчённого растительного сырья помещали в ёмкость из тёмного стекла объё­мом 200 мл, добавляли 150 мл 70%-ного этанола и оставляли при периодическом перемешивании на трое суток (Yasukawa, Kasahara, 2013). Извлечение фильтрова­ли через несколько слоёв марли, затем – через бумажный фильтр.
Для получения водного экстракта из соцветий T. patula 10 г измельчённого растительного сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, добавляли 200 мл дистиллированной воды и кипятили в течение 30 минут (Reena et al., 2012). Извле­чение фильтровали через несколько слоёв марли, затем – через бумажный фильтр.
19
Для приготовления водного экстракта из соцветий T. patula 10 г измельчённо­го растительного сырья помещали в ёмкость из тёмного стекла объёмом 200 мл, добавляли 150 мл дистиллированной воды и оставляли при периодическом пере­мешивании на трое суток (J. Reena et al., 2012). Извлечение фильтровали через несколько слоев марли, затем – через бумажный фильтр.
После фильтрации экстракты были помещены в специальные ёмкости из тёмного стекла, чтобы избежать разрушающего действия солнечного излучения на флавоноиды (Папаяни, 2012).
Все полученные экстракты высушивали в сушильном шкафу ШС-80-01 СПУ при температуре 80 °С с целью получения сухих экстрактов паслёна чёрного. Для исследования их состава и свойств сухие экстракты разводились стерильной водой в разных концентрациях.
20
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]