Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Методы и технологии получения фармсубстанций растительного и минерального происхождения. Монография
.pdf
Ультразвуковая (УЗ) экстракция является недорогой, простой и эффективной альтернативой традиционным методам экстракции. Основные преимущества
использования ультразвука в твердофазной и жидкостной экстракции заключаются
в увеличении выхода продукта и скорости (L. Wang et al., 2006).
УЗ экстракция была использована для экстрагирования нутрицевтиков, таких,
как эфирные масла и жиры, из растений (S. Chemat et al., 2004; G. Cravotto et al.,
2004; H. Li et al., 2004; J.L. Luque-Garcia et al., 2003; A. Sharma et al., 2004), получения диетических добавок (T.J. Mason et al., 1996; R. Bruni et al., 2002; M. Melecchi et
al., 2002; S. Albu et al., 2004).
УЗ экстракция включает применение высокоинтенсивных высокочастотных звуковых волн и их взаимодействие с материалами. УЗ экстракция связана с ультразвуковыми эффектами акустических кавитаций. При ультразвуковом воздействии твёрдые и жидкие частицы вибрируют и ускоряются, и из-за этого растворённое вещество быстро диффундирует из твёрдой фазы в растворитель (M.G. Cares et al.,
2009). Процедура включает использование ультразвука с частотами от 20 до
2000 кГц, что увеличивает проницаемость клеточных стенок и производит кавитацию. Если интенсивность ультразвука увеличивается в жидкости, то она достигает
точки, в которой внутримолекулярные силы не способны удерживать молекулярную
структуру в целости, поэтому она разрушается и образуются пузырьки. Коллапс пузырьков может приводить к физическим, химическим и механическим воздействиям,
разрушению биологических мембран для облегчения высвобождения экстрагируемых соединений, повышения проникновения растворителя в клеточные материалы
и улучшения переноса массы (M.G. Cares et al., 2009; A.H. Metherel et al., 2009). Одним из недостатков этой процедуры является случайный, но известный вредный
эффект УЗ энергии (более 20 кГц) на активные компоненты лекарственных растений
путём образования свободных радикалов и, следовательно, нежелательных изменений в молекулах лекарственного средства (M.M. Cowan, 1999). Использование УЗ
позволяет увеличить выход продукта (L. Hui et al., 1994; A. Sharma et al., 2004; H. Li et
al., 2004). Ультразвук также может увеличить кинетику процесса экстракции и даже
улучшить качество экстрактов (G. Cravotto et al., 2004; E.C. Schinor et al., 2004). Использование ультразвука в качестве дополнения к обычной экстракции обеспечивает
не только качественное, но и более быстрое, экономичное экстрагирование БАВ
с использованием общедоступного оборудования (R. Bruni et al., 2002).
Микроволновая экстракция (МЭ) предлагает быструю доставку энергии
в общий объём растворителя и растительного сырья с последующим нагревом
растворителя и сырья, эффективно и равномерно, потому что вода из растительного сырья поглощает микроволновую энергию, разрушению клеток способствует
внутренний перегрев, что облегчает десорбцию химических веществ из сырья
и восстановление нутрицевтиков (B. Kaufmann et al., 2002). Микроволны обладают
электрическими и магнитными полями, перпендикулярными друг другу. Электрическое поле вызывает нагрев посредством двух одновременных механизмов, а именно
дипольного вращения и ионной проводимости. Дипольное вращение обусловлено
11

выравниванием электрического поля молекул, обладающих дипольным моментом,
как в растворителе, так и в твёрдом образце. Это колебание вызывает столкновения с окружающими молекулами, приводящими к высвобождению тепловой энергии в среду. При частоте 2,45 ГГц это явление происходит в 4,9 × 109 раз быстрее,
и, таким образом, нагрев происходит очень быстро. В отличие от классических методов проводящего нагрева микроволны одновременно нагревают весь образец
(B. Kaufmann et al., 2002).
Когда растительный материал погружен в прозрачный растворитель микроволн, теплота микроволнового излучения непосредственно достигает твёрдого вещества, не поглощаясь растворителем, что приводит к мгновенному нагреву остаточной влаги в твёрдом теле. Нагрев вызывает испарение влаги и создаёт высокое
давление пара, которое разрушает клеточную стенку подложки и высвобождает её
в растворитель. Растворителями, используемыми для большинства операций
с МЭ, являются те, которые обладают высокой диэлектрической постоянной и способностью сильно поглощать микроволновую энергию, однако селективность экстракции и способность среды взаимодействовать с микроволнами могут модулироваться с использованием смесей растворителей. Нередко используют бинарную
смесь растворителей, причём только один растворитель способен поглощать микроволны (V. Camel, 2001). Обычно считается, что полярные растворители лучше,
чем неполярные (Kothari et al., 2010).
МЭ используется для экстрагирования нутрицевтиков по нескольким причинам: снижение времени экстракции, уменьшение расхода растворителей и увеличение выхода продукта. МЭ также сопоставима с другими современными методами
экстракции, такими, как сверхкритическая флюидная экстракция (СФЭ), в связи
с простотой процесса и низкой стоимостью (L. Wang et al., 2006). MЭ представляет
собой простой, экологически чистый и экономичный метод извлечения биологически активных соединений из различных растительных материалов (S. Hemwimon et
al., 2007). Применение MЭ для растительных материалов было впервые применено Ганцлером и сотрудниками в 1986 году (B. Kaufmann et al., 2002).
Тем не менее, по сравнению с СФЭ в случае с МЭ необходимы дополнительная фильтрация или центрифугирование для удаления твёрдого остатка. Кроме
того, эффективность микроволн может быть снижена, когда либо целевые соединения, либо растворители являются неполярными, или когда они изменчивы.
Хотя микроволновая экстракция органических соединений из природных объектов и дополнительная обработка при выщелачивании в металлургии широко исследованы (M. Tomaniova et al., 1998; S. Spar Eskilsson et al., 2000; M. Al-Harahsheh
et al., 2004; M. Barriada-Pereira et al., 2003), опубликовано мало результатов в области экстрагирования биологически активных веществ. Обзор публикаций по МЭ из
натуральных продуктов был сделан B. Kaufmann с соавторами (2002).
С помощью МЭ нутрицевтики могут быть экстрагированы из растительного
сырья более быстрым способом, чем обычной твердофазно-жидкостной экстракцией. 12-минутная МЭ позволяет извлечь 92,1 % артемизинина из полыни
12

однолетней Artemisia annua L., в то время как несколько часов экстракции аппаратом Сокслета позволяет получить около 60 % (J.Y. Hao и др., 2002). За 4–5 минут
МЭ (этанол – вода) извлекается больше глицирризиновой кислоты из корня солодки, чем при простой экстракции (этанол – вода) при комнатной температуре в течение 20–24 часов (X. Pan et al., 2000).
Сверхкритическая флюидная экстракция (СФЭ) – технологический процесс, заключающийся в переводе одного или нескольких компонентов твёрдой или
жидкой смеси в «сверхкритический газ» – флюид. Производится контактированием
смеси разделяемых компонентов с газообразным экстрагентом при температуре
и давлении выше критической точки. Наибольшее распространение в качестве экстрагентов получили СО2, этан, этилен, пропан, SF6 и др. (S.S. Handa et al., 2008).
СФЭ является потенциальной альтернативой традиционным методам экстракции с использованием органических растворителей для извлечения биологически активных компонентов из растений (W.K. Modey et al., 1996; Y.H. Choi et al.,
1997; J.R. Dean et al., 2000; E. Ellington et al., 2003; M. Hamburger et al., 2004;
C.D. Andras et al., 2005). Эта техника может быть использована для извлечения
растительных компонентов, особенно липидов (M.G. Bernardo-Gil et al., 2002),
эфирных масел (A. Berna et al., 2000; J.A.P. Coelho et al., 2003; B. Marongiu et al.,
2003) и ароматических соединений (L. Wang et al., 2006).
СФЭ может предотвратить окисление липидов. M.G. Bernardo-Gil с соавторами (2002) обнаружил, что свободные жирные кислоты, стерины, триглицериды
и токоферолы, содержащиеся в масле лесного ореха, извлекаются СФЭ так же, как
экстракцией гексаном. Тем не менее, СФЭ масла была более защищена от окисления неустойчивых полиненасыщенных жирных кислот, чем при экстракции гексаном. Масло, экстрагируемое сверхкритическим CO2, более чистое, чем при экстрагировании н-гексаном (R. Marr et al, 2000; A. Meireles et al, 2003).
При экстрагировании могут быть получены более высокий выход продукта
и эфирные масла более высокого качества, содержащие больше ароматических
соединений, чем полученные при обычной дистилляции (L. Wang et al., 2006).
Процентное применение СФЭ для экстракции БАВ из растительного сырья
в промышленных масштабах остаётся небольшим из-за липофильного характера
сверхкритического CO2. Кроме того, многие активные вещества растений (фенольные соединения, алкалоиды и гликозиды) плохо растворимы в CO2 и, следовательно, не извлекаемы методом СФЭ (M. Hamburger et al., 2004).
Основными параметрами, влияющими на качество экстракта, являются:
часть растения, используемая в качестве исходного материала;
растворитель, используемый для экстракции;
процедура извлечения.
Влияние экстрагированного растительного фитокомпонента зависит от характера растительного материала, его происхождения, степени обработки, содержания влаги, размера частиц.
13

Различия в методах экстракции, которые будут влиять на количество и вторичный метаболитный состав экстракта, зависят от типа и времени добычи, температуры,
природы и концентрации растворителя, полярности, растительного материала.
Натуральные компоненты на основе растений могут быть получены из любой
части растения – коры, листьев, цветов, корней, фруктов, семян и т.д., – т.к. все части растения содержат активные компоненты.
Успешное определение биологически активных соединений из растительного
материала в значительной степени зависит от типа используемого растворителя
в процедуре экстракции.
Свойства хорошего растворителя при экстракции растений:
низкая токсичность;
лёгкость испарения при низкой температуре;
продвижение быстрой физиологической абсорбции экстракта;
консервативное действие;
неспособность вызывать сложность или диссоциации экстракта.
Факторами, влияющими на выбор растворителя, являются:
количество экстрагируемых фитохимикатов;
темп добычи;
разнообразие экстрагированных соединений;
разнообразие экстрагированных ингибирующих соединений;
простота последующей обработки экстрактов;
токсичность растворителя в процессе биоанализа;
потенциальная опасность для здоровья экстрагентов.
На выбор растворителя влияет то, что предназначено для извлечения. Поскольку конечный продукт будет содержать следы остаточного растворителя, растворитель должен быть нетоксичным и не должен вмешиваться с биоанализом.
Выбор также будет зависеть от соединений, подлежащих экстракции. Изменение
методов извлечения обычно зависит от длины периода экстракции, используемого
растворителя и его pH, температуры, размера частиц растительных тканей, соотношения растворителя к образцу.
Основной принцип состоит в том, чтобы измельчить растительный материал (сухой или влажный) в более тонкий, что увеличивает площадь поверхности для извлечения, тем самым увеличивая её скорость. В более ранних исследованиях сообщалось, что идеальное соотношение растворителя к сухому весу – 10 : 1 (по объёму).
Растворителями, используемыми для экстракции активного компонента, являются: вода, этанол, метанол, хлороформ, эфир и ацетон. Водная обработка растительного сырья при определённых условиях позволяет переходить в раствор таким соединениям, как пектины, моно-, ди- и трисахариды, таниды, циклические
спирты, органические кислоты и некоторые минеральные соединения. При использовании органических растворителей в раствор попадают воски, смолы, масла,
фенолы, терпены, олифатические и ароматические углеводы, стерины и другие
соединения (табл. 1).
14

Таблица 1
Вода
Этанол
Метанол
Хлороформ
Эфир
Ацетон
Антоцианы
Таннины
Антоцианы
Терпеноиды
Алкалоиды
Фенол
Растворители, используемые для экстракции активного компонента
Крахмал
Таннины
Сапонины
Терпеноиды
Полипептиды
Лектины
Полифенолы
Полиацетилены
Флавоноиды
Терпеноиды
Стерины
Алкалоиды
Терпеноиды
Сапонины
Таннины
Ксантоксилины
Лактоны
Флавоны
Феноны
Полифенолы
Флавоноиды
Терпеноиды
Кумарины
Жирные
кислоты
Флавоноиды
Обычно считается, что смесь водно-спиртовых растворителей (смесь спирта
и воды в различных пропорциях) даёт высокий выход экстракции, что обусловлено
их расширенным диапазоном полярности.
В качестве растворителя распространено использование растительных масел
с получением разнообразных масляных экстрактов, применяемых в косметических
и фармацевтических препаратах (А.Н. Шиков и др., 2004).
При интенсификации процесса экстракции можно воздействовать на растительное сырьё несколькими способами: физическим (в электромагнитном и ультразвуковом полях), механическим, термодинамическим, гидравлическим, в турбулентном потоке экстрагента и др.
Выбор метода выделения активных компонентов с наилучшим выходом
и максимальной чистотой из природных источников в основном зависит от природы
соединений и сырья, которое будет обрабатываться (V. Kothari et al., 2009).
Параметры для выбора подходящего метода экстрагирования:
1) перед выполнением экстракции необходимо выполнить проверку подлинности материала, который будет подвергаться экстрагированию. Любые посторонние вещества должны быть полностью устранены;
2) использовать правильную часть растения и в целях контроля качества регистрировать возраст растения и время, время года и место сбора;
3) условия, используемые для сушки растительного материала, во многом зависят от характера его химических составляющих. Обычно предпочтительным является воздушный поток горячего или холодного воздуха для сушки. Если для экстракции необходимо использовать сырой препарат с высоким содержанием влаги,
следует включить соответствующие поправки на вес;
4) следует определить методы измельчения и избегать, насколько это возможно, методов, которые выделяют тепло;
5) порошковый растительный материал следует пропускать через подходящие сита для получения требуемых частиц однородного размера;
6) характер составляющих:
а) если терапевтическое значение лежит в неполярных составляющих, может
использоваться неполярный растворитель;
15

б) если составляющие термолабильны, холодная мацерация и перколяция
являются предпочтительными. Для термостабильных компонентов подходят экстракция Сокслета (если используются неводные растворители) и отвар (если вода
является растворителем);
c) подходящие меры предосторожности должны приниматься при работе
с компонентами, которые ухудшаются во время нахождения в органических растворителях, например, флавоноидами и фенилпропоидами;
д) в случае горячей экстракции следует избегать превышения требуемой температуры;
е) стандартизация времени извлечения важна, поскольку:
недостаточное время означает неполное извлечение;
если время экстракции больше, нежелательные компоненты также могут
быть извлечены;
ж) количество экстракций, необходимых для полного извлечения, так же важно, как и продолжительность каждой экстракции;
7) следует указывать и контролировать качество воды или растворителя;
8) процедуры концентрирования и сушки должны обеспечивать безопасность
и стабильность активного составляющего. Широко используются сушка при пониженном давлении, лиофилизация.
1.2. Получение экстрактов из разных частей растений
и изучение их состава
1.2.1. Получение экстрактов из разных частей лотоса орехоносного
В качестве сырья для выделения компонентов с психотропными, гиполипидемическими, иммунотропными и антиоксидантными свойствами был выбран лотос
орехоносный Nelumbo nucifera (Н.А. Ломтева, 2016).
Водно-спиртовой экстракт семян лотоса орехоносного был приготовлен согласно протоколу WHO CG-04. Этот способ экстрагирования использовался для
получения экстракта с гиполипидемическими и антиоксидантными свойствами. Для
этого 500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния и подвергали спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате
Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе. В итоге получали около 5 % вязкого смолообразного вещества. Раствор экстракта семян лотоса орехоносного (0,5%-ный) был приготовлен на физиологическом растворе.
Способом экстрагирования психотропных, иммунотропных и антиоксидантных
компонентов растений была экстракция 60%-ным раствором этилового спирта
в дистиллированной воде. После приготовления соответствующего раствора этилового спирта эти растворы применялись для экстракции биологически активных
веществ семян, листьев, лепестков и коробочек лотоса орехоносного. Семена,
коробочки, лепестки и листья лотоса орехоносного отдельно измельчали до порошкообразного состояния. 20 г каждого порошка помещали в 500 мл 60%-ного
16

этанола на 3 часа при 60 °С в термостате. Спиртовые экстракты фильтровали, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе при 60 °С. Растворы экстрактов
вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда для исследования психотропных, иммунотропных и антиоксидантных свойств.
1.2.2. Экстракция фенольных соединений из семян лотоса орехоносного
Семена лотоса орехоносного измельчают в порошок. Растительный порошок
подкисляют соляной кислотой (рН от 1,5 до 3,6) и экстрагируют в течение 1,5 часов
н-гексаном в соотношении 10 : 1 в орбитальном шейкере при температуре окружающей среды для удаления жира. Экстракт фильтруют с использованием GF/F
фильтровальной бумаги через воронку Бюхнера и удаляют фильтрат, содержащий
липиды. Остаток реэкстрагируют непрерывно или «шагами», используя разные
растворители в разных пропорциях – от 3 : 1 до 12 : 1. Время экстрагирования
в орбитальном шейкере – от 30 минут до 24 часов. Новый экстракт также фильтруют с использованием GF/F фильтровальной бумаги через воронку Бюхнера, и получают готовый фильтрат. Объединённые фильтраты выпаривают досуха на роторном испарителе, а остаток растворяют в метаноле и выдерживают при -20 ºС
для последующего анализа.
Общее содержание фенола в экстракте семян лотоса орехоносного
определяют фотоколориметрически, в соответствии с модификацией метода (Т.
Gutfinger, 1981). Добавляют метанольный раствор растительных экстрактов (0,1–
0,3 мл), 20 мл дистиллированной воды и 0,625 мл реагента Фолина – Чокалтеу,
через 3 минуты добавляют 2,5 мл насыщенного раствора Na2CO3. Всё смешивают
и разбавляют дистиллированной водой до 25 мл. Через час измеряют оптическую
плотность образца при 725 нм. Общие флавоноиды извлекают следующим
образом. 5 г образца гомогенизируют с 40 мл 75 % метанола и тбутилгидрохиноном. Добавляют 10 мл 6N соляной кислоты, тщательно
перемешивают и кипятят при температуре 90ºС в течение 2 часов. После
охлаждения супернатант фильтруют через бумажный фильтр и переносят в колбу с
метанолом. Экстракт хранят в жидком азоте при -80ºС для дальнейшего анализа.
Флавоноиды можно косвенно определить по общим фенольным
соединениям. Определение общего содержания фенольных соединений,
измеряемых как эквивалент галловой кислоты с помощью реагентов Фолина и
Чекалтеу. 1 мл образца (разбавляют до 25-50 % от исходной концентрации
метанола), 0,5 мл реагента Фолина-Чекалтеу (2N) и 3 мл NaCO (200 мг/мл)
смешивают. Реакционную смесь встряхивают 15 минут при комнатной температуре
и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при 725 нм.
1.2.3. Экстракция жирных кислот
Экстракцию жирных кислот проводили методом метанольно-хлороформной
экстракции липидов. Связавшиеся нелипидные фракции отмывают три раза от
липидного экстракта смесью СН3ОН:Н2О (1:1). Липиды в хлороформе высушивают
17

над безводным сульфатом натрия, затем растворитель удаляют путем нагревания
при 60ºС в вакууме.
Липидные образцы омыливают в течение ночи уксуснокислым КОН (20 %) при
комнатной температуре. Жирные кислоты освобождают от калия подкислением соляной кислотой (5N) с последующей экстракцией эфиром. Эфирный экстракт промывают три раза дистиллированной водой, затем сушат над безводным сульфатом
натрия, фильтруют (A.J. Vogel, 1975).
Жирные кислоты, полученные из липидных образцов, и стандартные жирные
кислоты растворяют в небольшом количестве безводного метанола и добавляют
небольшими порциями раствор эфирного диазометана, пока не прекратится выделение газа. Бледно-жёлтый цвет смеси указывает на избыточность диазометана.
Реакционную смесь оставляют на 10 минут и выпаривают эфир под струёй азота
при комнатной температуре. Две капли бидистилированного раствора хлороформа
добавляют для растворения жирных кислот метиловым эфиром. Жирные кислоты
определяют газо-жидкостной хроматографией (Фараг и др., 1981).
1.2.4. Экстракция биологически активных веществ
с антибактериальными свойствами
В качестве сырья для выделения компонентов с антибактериальными свойствами были выбраны корни солодки голой Glycyrrrhiza glabra L., соцветия цмина
песчаного Helichrysum arenarium L. и тысячелистника мелкоцветкового Achillea
micrantha Willd. (Астафьева, 2013).
Растения были собраны на территории Астраханского региона: корни
Gl. glabra – в Приволжском районе, соцветия A. micrantha и H. arenarium – на территории Наримановского района.
Одним из способов экстрагирования антибактериальных компонентов растений была экстракция 50%-ным раствором этилового спирта в дистиллированной
воде. После приготовления соответствующего раствора этилового спирта эти растворы применялись для экстракции биологически активных веществ соцветий цмина песчаного и тысячелистника мелкоцветкового, корней солодки голой. Экстракцию раствором 50%-ного этилового спирта проводили в соотношениях 1 : 5 и 1 : 10.
20 г сырья заливали 100 мл раствора, или 10 г сырья заливали 100 мл раствора,
после чего смесь тщательно перемешивали, помещали в склянки из тёмного стекла и экстрагировали в течение 7–10 дней при постоянном перемешивании. В некоторых опытах экстрагирование проводили в течение двух недель.
После окончания экстракции экстракты фильтровали с экстрагируемыми компонентами от растительного сырья (отжима). Экстракты помещали во флаконы под
ватными пробками и в сухо-воздушном стерилизаторе нагревали 3-кратно при температуре 85 0С для полного испарения остатков спирта.
Также проводили экстракцию корней солодки голой такими экстрагентами, как
этиловый спирт 96 %, этилацетат и диэтилкарбонат. 30 г измельчённых корней заливали 150 мл раствором соответствующего элюента. Сверху колбы с растительным
18

сырьём и растворителем устанавливали обратный холодильник, соединённый
с одной стороны с краном подачи воды, с другой – замкнутый на себя. Колбы помещались на водяной бане при постоянном перемешивании на магнитной мешалке
на 48 часов. Затем полученный экстракт фильтровали через бумажный фильтр.
Водный экстракт из растительного сырья готовили по следующей методике:
5 г сырья заливали 200 мл холодной дистиллированной воды, нагревали до температуры 90 °С и настаивали при поддержании данной температуры в течение
60 минут. После этого экстракт фильтровали через марлевый фильтр, а затем –
через бумажный фильтр.
1.2.5. Экстракция биологически активных веществ
с антиоксидантными свойствами
Как сырьё для получения антиоксидантных компонентов были выбраны соцветия бархатцев распростёртых Tagetes patula L. T. patula относится к группе так
называемых пряно-ароматических или пряно-вкусовых растений. Входящие в их
состав эфирные масла и другие биологически активные вещества улучшают полезные качества продуктов питания, возбуждают деятельность вкусовых и пищеварительных органов, усиливают усвояемость пищевых продуктов. Также отмечают их консервирующие, антисептические и бактерицидные свойства (Пряноароматические и пряно-вкусовые растения, 1989).
Растения собирали на территории Астраханского региона (п. Начало) в августе 2014 года. Извлечения из соцветий бархатцев получали методом экстрагирования двумя растворителями: 70%-ным раствором этанола и дистиллированной водой (Попко и др., 2015).
Вода как самый полярный растворитель извлекает, как правило, большее количество всех имеющихся полярных веществ, этиловый спирт же обладает избирательным элюирующим действием в отношении веществ фенольной природы.
Для приготовления 70%-ного этанольного экстракта из соцветий бархатцев
T. patula 10 г измельчённого растительного сырья помещали в колбу вместимостью
200 мл, добавляли 150 мл 70%-ного этанола и пятикратно кипятили в течение часа
(Папаяни и др., 2012). Извлечение фильтровали через несколько слоёв марли, затем – через бумажный фильтр.
С целью получения 70%-ного этанольного экстракта из соцветий T. patula 10 г
измельчённого растительного сырья помещали в ёмкость из тёмного стекла объёмом 200 мл, добавляли 150 мл 70%-ного этанола и оставляли при периодическом
перемешивании на трое суток (Yasukawa, Kasahara, 2013). Извлечение фильтровали через несколько слоёв марли, затем – через бумажный фильтр.
Для получения водного экстракта из соцветий T. patula 10 г измельчённого
растительного сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, добавляли 200 мл
дистиллированной воды и кипятили в течение 30 минут (Reena et al., 2012). Извлечение фильтровали через несколько слоёв марли, затем – через бумажный
фильтр.
19

Для приготовления водного экстракта из соцветий T. patula 10 г измельчённого растительного сырья помещали в ёмкость из тёмного стекла объёмом 200 мл,
добавляли 150 мл дистиллированной воды и оставляли при периодическом перемешивании на трое суток (J. Reena et al., 2012). Извлечение фильтровали через
несколько слоев марли, затем – через бумажный фильтр.
После фильтрации экстракты были помещены в специальные ёмкости из
тёмного стекла, чтобы избежать разрушающего действия солнечного излучения на
флавоноиды (Папаяни, 2012).
Все полученные экстракты высушивали в сушильном шкафу ШС-80-01 СПУ
при температуре 80 °С с целью получения сухих экстрактов паслёна чёрного. Для
исследования их состава и свойств сухие экстракты разводились стерильной водой
в разных концентрациях.
20
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
