Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Методы и технологии получения фармсубстанций растительного и минерального происхождения. Монография
.pdf
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
Д
ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО И МИНЕРАЛЬНОГО СЫРЬЯ
2.1. Обзор методов идентификации биологически активных веществ
ля выделения отдельных химических компонентов из растительного материала используют различные хроматографические методы. Хроматография позволяет проводить не только разделение и очистку компонен-
тов, но и их идентификацию для качественного и количественного анализа.
Хроматография является одним из методов разделения, определяемых как
дифференциальная миграция веществ из узкой начальной зоны. В качестве метода разделения хроматография имеет ряд преимуществ по сравнению с более старыми методиками, такими, как кристаллизация, экстракция растворителем и дистилляция.
Хроматографический метод впервые был предложен в 1903 году русским
учёным М.С. Цветом. Хроматография – это метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Неподвижная фаза – обычно твёрдое (пористое) вещество, сорбент. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу, иногда под давлением (Кирхнер, 1981).
Хроматография основана на дифференциальной миграции. Во всех хроматографических методах образец растворяют в подвижной фазе, которая может быть
жидкостью, газом или сверхкритической жидкостью. Подвижная и стационарная
фазы подбираются так, чтобы компоненты образца распределялись между фазами
в разной степени (Chavan, 2013). Компоненты анализируемой смеси (сорбаты)
вместе с подвижной фазой проходят через стационарную фазу. В зависимости от
силы взаимодействия с поверхностью сорбента (за счёт адсорбции или по какомулибо другому механизму) компоненты будут перемещаться через стационарную
фазу с разной скоростью (Рудаков и др., 2004). Компоненты с большим сродством
к неподвижной фазе передвигаются с меньшей скоростью, чем те, которые хорошо
растворимы в подвижной фазе. Растворённое вещество, проходя через стационарную фазу, разделяется на компоненты (Prasanna et al., 2017). Это основной
принцип работы любой хроматографической системы.
Одним из наиболее распространённых и простых типов хроматографии является бумажная. Как неподвижная фаза используется бумага. Под влиянием капиллярных сил растворитель вытягивается через бумагу и разделяет вещества (рис. 1).
Каплю анализируемого раствора помещают на хроматографическую бумагу и высушивают. Разделение анализируемой смеси происходит при прохождении растворителя через бумагу. Наиболее эффективно происходит разделение при насыщении
атмосферы камеры, где происходит хроматографирование, парами растворителя.
21
Рис. 1. Восходящая и нисходящая хроматография на бумаге
Бумажную хроматографию применяют в основном для определения гидрофильных веществ. При проведении разделения на импрегнированной бумаге метод можно использовать для разделения липофильных веществ. При получении
неудовлетворительных результатов разделения методом фракционного распределения даже с большим числом ступеней разделения применяют сочетание метода
бумажной хроматографии с методами, основанными на других принципах разделения (адсорбции, ионного обмена). Область применения бумажной хроматографии
можно расширить, применяя бумагу специальных сортов или импрегнируя обычную бумагу (Руководство по аналитической химии, 1975).
Ранее бумажную хроматографию применяли для изучения однородности антибиотиков (Ammann, Gotlieb, 1955). Как известно, продуценты очень часто образуют смеси антибиотиков, состоящие как из очень близких веществ (например, неомицинов В и С, пенициллинов, актиномицинов), так и из соединений, относящихся
к разным группам (например, описано одновременное образование актиномицинов
и полиеновых антибиотиков (Блинов, Хохлов, 1970).
В тонкослойной хроматографии (ТСХ) стационарная фаза представляет
собой тонкий слой твёрдого вещества, такого, как оксид алюминия или диоксид
кремния, нанесённый на инертное основание (стекло, алюминиевая фольга или
нерастворимый пластик). Разделяемую смесь наносят в виде капель на нижнюю
часть ТСХ пластины и высушивают. ТСХ пластина помещается в хроматографическую камеру, содержащую растворитель (подвижную фазу). Растворитель поднимается по пластине под действием капиллярных сил, жидкость заполняет промежутки между твёрдых частиц неподвижной фазы. ТСХ пластину извлекают из хроматографической камеры, когда фронт растворителя приближается к верхней части пластины.
Преимущества ТСХ над бумажной хроматографией в том, что её результаты
являются более воспроизводимыми и что разделение очень эффективно из-за гораздо меньшего размера частиц стационарной фазы.
22
ТСХ используют для проверки чистоты образца (Ferenczi-Fodoz et al., 2006),
идентификации органических соединений (Khalaf et al., 2012), разделения неорганических ионов (Srivastava et al., 1978; Ali Mohhamad et al., 2010), изучения биомолекул и ионов (Beate Fuchs et al., 2011; Supriti et al., 2012; Petruczynik, Ciesta, 2015).
Ионообменная хроматография – это задержание молекул веществ в неподвижной фазе, обусловленное их связыванием с поверхностью твёрдого гидрофильного материала сплошных или пористых гранул, находящихся в контакте
с подвижной фазой. В ионообменной хроматографии, в которой заряженные молекулы, такие, как белки, разделяются по величине их электрического заряда, применяются стационарные фазы с ионными группами, и механизм удерживания включает электростатическое притяжение противоположно заряженных ионов на поверхности сорбента. Здесь в качестве сорбентов особенно широко применяются
полимеры на основе акрилатных мономеров вследствие их устойчивости в широком интервале рН (от 1 до 13); для сравнения: силикагель устойчив при рН от 2 до
8 (Брун, 2003). Ионообменную хроматографию часто используют при очистке белков. Наряду с хроматографией гидрофобного взаимодействия ионообменная хроматография преимущественно используются в анализе белков, нуклеиновых кислот и других биологических макромолекул, когда важно сохранить трёхмерную
структуру и не допустить её разрушения в процессе разделения (Hearn, 2000).
Газовая хроматография – универсальный метод разделения смесей разнообразных веществ, испаряющихся без разложения. В этом методе в качестве подвижной фазы используется инертный газ, а стационарной фазой может быть
твёрдая или нелетучая жидкость, покрытая инертными поддерживающими частицами. Если в качестве неподвижной фазы применяют твёрдое вещество, метод
описывается как адсорбционная хроматография. Если неподвижная фаза является
жидкой, то хроматография называется газожидкостной разделяющей. Стационарная фаза находится в узкой колонке в термостате, в то время как газовая подвижная фаза проходит через колонку (Chavan et al., 2013). Разделяемая смесь многократно распределяется между газом-носителем (подвижной фазой) и нелетучей
неподвижной жидкой фазой, нанесённой на инертный материал (твёрдый носитель), которым заполнена колонка. Принцип разделения – неодинаковое сродство
органических веществ к летучей подвижной фазе и стационарной фазе в колонке.
Компоненты смеси селективно удерживаются неподвижной фазой, а затем выходят
из колонки и регистрируются детектором. Сигналы детектора записываются в виде
хроматограммы автоматическим потенциометром (самописцем) или же регистрируются на экране компьютера. Эффективность разделения смеси растёт с увеличением числа элементарных актов распределения веществ между подвижной и неподвижной фазами (Зеленин, 1996). В отличие от большинства других видов хроматографии подвижная фаза не взаимодействует с молекулами аналита, только
транспортирует аналит через неподвижную фазу (Chavan et al., 2013).
Газовая хроматография находит применение в нефтяной, металлургической,
химической, фармацевтической (Shyamala et al., 2013; Suleman et al., 2015),
23
пищевой (Lehotay and Hajslova, 2002; Al-Bukhaiti et al., 2017) и других отраслях промышленности. С повышением экологических требований к среде обитания, продуктам, лекарствам можно ожидать ещё более широкого внедрения газовой хроматографии в повседневную жизнь. Оправдано применение газовой хроматографии
в рутинном анализе, например, бензина или природного газа (Зеленин, 1996).
Газовая хроматография широко используется в приложениях, связанных
с анализом пищевых продуктов. Типичные применения относятся к количественному и/или качественному анализу пищевых продуктов, натуральных продуктов, пищевых добавок, ароматических компонентов, различных производных продуктов
и контаминантов, таких, как пестициды, фумиганты, загрязнители окружающей
среды, природные токсины, ветеринарные препараты и упаковочные материалы
(Lehotay and Hajslova, 2002). Особенные области применения газовой хроматографии в пищевой промышленности включают анализ углеводов и аминокислот
(Molnár-Perl, 2000), липидов и сопутствующих липофильных соединений (Lercker
and Rodriguez-Estrada, 2000; Marriott, 2001), вкусовых и ароматических веществ
(Pais and Knize, 2000; Wilkes et al., 2000).
Газовая хроматография может использоваться для прямого разделения
и анализа газообразных образцов, жидких растворов и летучих твёрдых веществ.
Если анализируемый образец является нелетучим, могут быть использованы методы дериватизации или пиролиза (Grob and Barry, 2004). Газовая хроматография
была незаменимым аналитическим методом при определении жирных кислот в селекции масличных растений, биосинтезе и метаболизме человека, а также для характеризации сложных смесей геометрических изомеров в сочетании с другими
хроматографическими и спектрометрическими методами идентификации
(Seppanen-Laakso et al., 2002). Метод газовой хроматографии используется как более точная и быстрая техника изучения вариации и наследования жирных кислот
в масличных культурах, таких, как рапс (Harvey and Downey, 1964), льняное семя
(Yermanos and Knowles, 1962) и сафлор (Knowles and Hill, 1964).
Основной успех применения газовой хроматографии в фармацевтическом количественном анализе в первую очередь объясняется очень высокой эффективностью разделительной мощности, во-вторых, предельной чувствительностью обнаружения даже очень малых количеств отделённых соединений и, наконец, достоверностью и точностью данных количественного анализа очень сложных смесей.
Газохроматографический анализ также легко автоматизируется от введения пробы
до разделения.
Из-за указанных основных преимуществ, короткого времени анализа и надёжных результатов газовая хроматография используется для контроля качества
в фармацевтической промышленности. Фармацевтический анализ обычно включает два этапа: разделение представляющего интерес соединения и количественное
определение соединений. Чем лучше разделение, тем легче будет количественное
определение. Газохроматографические детекторы имеют разную чувствительность
к каждому соединению. Чтобы определить количественные количества различных
24
соединений при разделении, детектор должен быть откалиброван с использованием стандартов. Стандартные растворы образца вводят и регистрируют реакцию
детектора. Сравнение стандартного времени и времени удерживания образцов
позволяет провести качественный анализ образца. Сравнение площади пиков
стандартов с показателем образца позволяет провести количественный анализ.
В связи с этим газовая хроматография широко используется в качестве рутинной
аналитической методики в фармацевтическом количественном анализе, который
в основном используется для определения органических летучих примесей и уровня никотина во время составления лекарственных препаратов (Application of Gas
Chromatography…, 2018).
Жидкая хроматография схожа с газовой хроматографией, но подвижная фаза – жидкость. Стационарная фаза обычно является инертным твёрдым веществом
или жидкостью, удерживаемой на инертном твёрдом веществе. Подвижная фаза перемещается через колонку принудительно с помощью насоса высокого давления.
Исследуемый образец проходит через колонку, элюируется подвижной фазой. Данный метод применим к термически нестойким соединениям, таким, как аминокислоты, белки, нуклеиновые кислоты, углеводороды, антибиотики, стероиды, наркотики,
неорганические и органические вещества (Chavan et al., 2013).
В настоящее время высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
занимает ведущие позиции среди других методов хроматографии как по объёму
выпускаемой аппаратуры (более 40000 хроматографов в год на сумму более
2 млрд долл.), так и по числу публикаций (5–6 тыс. публикаций в год) (Яшин, Яшина, 2003).
ВЭЖХ широко используется в фармацевтической промышленности для точных анализов химических компонентов и препаратов различной природы. Систематическое расширение масштабов от аналитического к препаративному процессу
и дальнейшему наращиванию в промышленных масштабах может быть использовано в медицине и индустрии ароматерапии (ароматических растений) для выделения и очистки фитомолекул в терапевтических и коммерческих интересах (Gupta
et al., 2008).
ВЭЖХ превосходит обычную жидкостную хроматографию и в настоящее время обеспечивает такие функции, как:
1) высокая разрешающая способность;
2) быстрое разделение;
3) качественное и количественное измерение и выделение;
4) автоматизация аналитических процедур и передачи данных (Handa et al.,
2008).
В настоящее время ВЭЖХ широко используется для выделения и анализа
различных групп БАВ, выделенных из растительного сырья (Шелеметьева и др.,
2009; Куркина, 2011; Dinana et al., 2001; Vitalini et al., 2011).
Методы ВЭЖХ в качестве официальных методов вошли в фармакопеи разных стран, в ЕРА (агентство США по анализу загрязнений окружающей среды),
25
в ГОСТы и рекомендации по анализу многих вредных соединений. При контроле
загрязнений окружающей среды методами ВЭЖХ определяют нефтепродукты
в поверхностных и питьевых водах; пестициды (особенно нелетучие гербициды на
основе фенилмочевины, феноксиуксусных кислот, карбаматы, триазины и др.)
в воде, почве, пище и фураже; фталаты в воде; ароматические амины и полиядерные ароматические соединения в пище и воде; фенол, хлорфенол и нитрофенолы
в питьевой воде; нитрозамины в пище; тяжёлые металлы (в виде комплексов) в воде, почве и пище; микотоксины (афлатоксины, зеараленон и др.) в пище и кормах
и многие другие загрязнители (Яшин, 2003).
Флэш-хроматография (препаративная хроматография низкого давления) является быстрой (скоростной) формой препаративной колоночной хроматографии,
которая использует колонки, через которые растворитель подаётся с высокой скоростью. Этот метод также используется для выделения разных групп биологически
активных компонентов растений (Алебастров и др., 2001; Иванова и др., 2004;
Munkombwe et al., 2003).
2.2. Химические методы изучения водно-спиртовых экстрактов
лотоса орехоносного
В полученных водно-спиртовых экстрактах лотоса орехоносного определяли
общее содержание флавоноидов методом ТСХ с хроматоденситометрией.
Приготовление растворов стандартных образцов. 1 мг стандартного
образца кверцетина растворяли в 5 мл метанола в пикнометре вместимостью 10
мл. Объём пикнометра доводили до метки метанолом и тщательно перемешивали.
Полученный раствор содержит 100 мг/л (Level 1) кверцетина. Из этого раствора готовили стандартные растворы в метаноле с концентрациями 25 мг/л (Level 4); 50
мг/л (Level 3) и 75 мг/л (Level 2). Растворы устойчивы в течение суток.
Подготовка проб. Полученные растворы экстрактов лотоса орехоносного
с осадком были разделены на две фракции: 1 – жидкая (G); 2 – осадок: из осадка
провели экстракцию флавоноидов метанолом в течение 30 минут, центрифугировали 2 минуты при 16000 об./мин., и полученные метанольные экстракты использовали для анализа (MeOH).
Подготовка хроматографической камеры и приготовление элюента.
Хроматографическую камеру обкладывали по внутренним стенкам фильтровальной бумагой таким образом, чтобы нижняя часть бумаги касалась дна камеры.
10 мл муравьиной кислоты и 10 мл воды помещали в мерный цилиндр на
250 мл с притёртой пробкой, тщательно перемешивали и затем добавляли 50 мл
этилацетата и 30 мл бутанола, вновь тщательно перемешивали. Элюент вносили
в хроматографическую камеру, смачивая при этом фильтровальную бумагу. Уровень подвижной фазы на дне камеры должен быть не менее 1 мм и не более 5 мм.
Насыщение камеры – 1 час при 20 °С.
26
Подготовка хроматографических пластинок. Пластинки перед работой
промывали метанолом (восходящий метод) до верхнего края, высушивали и активировали при 120 °С в течение 20 минут в сушильном шкафу.
Нанесение стандартных образцов и проб на хроматографическую
пластинку. Для нанесения образцов используют автосамплер CAMAG ATS4.
Промытую и активированную пластинку помещали на столик автосамплера. Виалы
со стандартными растворами и образцами помещали в штатив автосамплера.
Расстояние от линии нанесения до нижнего края пластинки – 15 мм. Расстояние от точки нанесения до краёв пластинки – 15 мм. Общее количество образцов
на одной пластинке размером 10 × 15 см (включая стандарты) – до 24 штук. Наносимый объём стандартных образцов и исследуемых проб – 4 мкл. Нанесение осуществляется полосой шириной 4 мм.
Пластинку помещали в предварительно насыщенную хроматографическую
камеру и элюировали, длина пробега составляла 4,5 см. Пластинку высушивали
в течение 5–10 минут при комнатной температуре (вытяжной шкаф), а затем в сушильном шкафу при температуре 85 30 °С в течение 5 минут. Затем пластинки
оставляли для созревания на 6–12 часов при комнатной температуре в тёмном месте.
Количественная обработка хроматограммы. Для количественной обработки использовали сканирующий денситометр CAMAG TLC Scanner 3 при длине
волны 410 нм и размером щели 2,00 × 0,2 мм. Приём данных и количественную обработку полученных результатов проводили на компьютере с использованием программы WinCATS (построение калибровки по площадям и расчёт количества кверцетина в пробах).
Концентрацию кверцетина в анализируемых образцах рассчитывали по формуле:
С
где С
– концентрация кверцетина в образце, мг/ в таблетке; С% – концентрация
мг/таб
кверцетина в образце, %; С
мг/таб
= С
тсх
С% = С
(mg/l) х Р х V(ml) х mт (mg) х 0,001 / mн (mg)
(mg/l) х Р х V(ml) х 0,1 / mн (mg),
тсх
– концентрация кверцетина в образце, рассчитанная
тсх
по калибровке ТСХ, mg/l; P – коэффициент разбавления (используется только
в случае разбавления экстракта); V – объём метанола, в котором проводилась
экстракция образца, ml; mт – масса таблетки, mg; mн – масса навески образца для
экстракции, mg; 0,001 – коэффициент пересчёта l в ml; 0,1 – коэффициент пересчёта на %.
Содержание влаги в растительном сырье является одним из числовых показателей, характеризующих его доброкачественность. Превышение этого показателя приводит к снижению качества при хранении. Метод определения влажности
основан на определении потери в массе за счёт гигроскопической влаги и летучих
веществ при высушивании сырья до абсолютно сухого состояния.
Влагу определяли в листьях, коробочках, семенах и лепестках лотоса орехоносного по стандартной методике (ГОСТ 24027.2-80), основанной на нагревании
навески растительного сырья в сушильном шкафу при температуре 100–105 °С
27
до постоянной массы. Постоянная масса считается достигнутой, если разница
между двумя последующими взвешиваниями после 30 минут высушивания и
30 минут охлаждения в эксикаторе с безводным хлористым кальцием не превышает 0,01 г. Первое взвешивание семян и коробочек проводили через 3 часа, листьев,
лепестков – через 2 часа. Проводили два параллельных определения. Процентное
содержание влаги в сырье (Х) вычисляли по формуле:
Х = (m – m1) ∙ 100/m,
где m – масса навески сырья до высушивания, m1 – масса навески сырья после высушивания, г.
За окончательный результат испытаний принимали среднее арифметическое
результатов двух параллельных определений.
Метод определения содержания золы (ГОСТ 24027.2-80) основан на определении несгораемого остатка неорганических веществ после сжигания и прокаливания сырья. Зола общая представляет собой сумму минеральных веществ, свойственных растению, и посторонних минеральных примесей. Для определения золы
общей аналитическую пробу сырья измельчали и просеивали сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. В предварительно прокалённый до постоянной массы
фарфоровый тигель брали навеску 1–3 г. Сырьё в тигле обугливали на электроплитке. При этом на неё помещали асбестовую сетку. После полного обугливания
сырья тигель переносили в муфельную печь для сжигания угля и полного прокаливания остатка (температура муфельной печи – 550–650 °С). Прокаливание вели
до постоянной массы. По окончании прокаливания тигель охлаждали в течение
2 часов в эксикаторе и взвешивали. Проводили два параллельных определения.
Содержание общей золы (Х1) в процента в абсолютно сухом сырье вычисляли
по формуле:
Х1=m1 100 100/m2 (100-w),
где m1 – масса золы в г, m2 – масса сырья в г, w – потеря в массе при высушивании
сырья в %.
За окончательный результат испытаний принимали среднее арифметическое
результатов двух параллельных определений, вычисленных до сотых долей процента для сырья с содержанием золы не более 5 % и до десятых долей процента –
для сырья с содержанием золы более 5 %.
В экстракте семян лотоса орехоносного также определяли содержание фенола, флавоноидов, жирных кислот, аминокислот. Общее содержание фракции фенольных соединений экстракта семян лотоса орехоносного определяли фотоколориметрически, в соответствии с модификацией метода (Gutfinger, 1981). Флавоноиды определяли по общим фенольным соединениям, измеряемым как эквивалент
галловой кислоты с помощью реагентов Фолина и Чокалтеу. Жирные кислоты лотоса орехоносного экстрагировали и разделяли методом газожидкостной хроматографии (Фараг и др., 1981).
28
2.3. Результаты анализа содержания флавоноидов
в экстрактах лотоса орехоносного
Полученные растворы с осадком были разделены на две фракции: 1 – жидкая
(G); 2 – осадок: из осадка провели экстракцию флавоноидов метанолом в течение
30 минут, центрифугированием 2 минуты при 16000 об./мин., и полученные метанольные экстракты использовали для анализа (MeOH).
Анализ флавоноидов показал, что экстракты, полученные из разных частей
растений, отличались по концентрации рутина и кверцетина (табл. 2).
Таблица 2
Концентрации кверцетина и рутина в экстрактах, мг/л
Концентрацию флавоноидов изучали в двух фракциях: в жидкой фазе и в осадке МеОН. В жидкой фазе небольшая концентрация рутина была характерна для экстракта из лепестков, далее экстракты расположились в следующем порядке: листья –
29
коробочки. В жидкой фазе экстракта семян лотоса орехоносного рутина не было.
Листья
Коробочки
Семена
Лепестки
Влажность, %
6,47 9,12 7,41 10,73
Общая зола, %
12,56
5,25 4,8 10,93
Время
,
C 12:0 Додекановая кислота (лауриновая)
6,93 35,26
C
14:0 Тетрадекановая
кислота (миристиновая)
11,54
11,37
C
16:0 Гексадекановая кислота (пальмитиновая)
12,33
10,1 C 16:1 цис-9-гексадеценовая кислота (пальмитолеиновая)
13,28
0,84 C 18:0 Октадекановая кислота (стеариновая)
15,61
1,99 C 18:1 цис-9-октадеценовая кислота
(олеиновая)
16,09
4,25 C 18:2 (n-6)
цис,цис
-
9,12-октадекадиеновая кислота (линолевая)
17,07
12,76
C
18:2 транс, транс
-
9,12-октадекадиеновая кислота
(linolelaidic
) 17,21
18,01
цис, цис, цис
-
9,12,15
-
октадекатриеновая кислота
C 18:3 (
n-6) цис, цис, цис
-
6,9,12
-
октадекатриеновая кислота (
γ-линоленовая)
18,72
0,59 C 20:0 Эйкозановая кислота (арахиновая)
21,59
1,82 C 20:1 цис-11-эйкозеновая кислота (гондоиновая)
23,83
1,67
Концентрация кверцетина в жидкой фазе была примерно одинаковой в экстрактах
коробочек, листьев и лепестков лотоса орехоносного, тогда как в экстракте семян
концентрация кверцетина была несколько ниже.
В осадке МеОН рутин был обнаружен только в экстракте лепестков. Содержание кверцетина было максимальным в экстракте листьев лотоса орехоносного,
а затем несколько снижалось в экстрактах лепестков, коробочек и семян.
В результате анализа влажности и золы общей были установлены следующие нормы числовых показателей: влажность – не более 14 %; зола общая – не
более 13 % (табл. 3).
Таблица 3
Результаты определения влажности и золы общей
в экстрактах лотоса орехоносного
Таким образом, химический анализ показал, что самое большое содержание
флавоноидов рутина и кверцетина было характерно для экстракта лепестков лотоса орехоносного.
2.4. Химический состав экстракта семян лотоса орехоносного
Химический состав экстракта семян лотоса орехоносного показал следующее.
Были обнаружены 12 жирных кислот, в том числе 4 полиненасыщенные жирные
кислоты, процент которых составляет 32 (рис. 2, табл. 4). Из анализа экстракта семян лотоса орехоносного получены четырнадцать аминокислот, содержание которых представлено в таблице 5.
Таблица 4
Содержание жирных кислот в экстракте семян лотоса орехоносного
Формула Название
C 18:3 (n-3)
(α-линоленовая)
мин.
18,29 1,28
30
%
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]