Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Иностранный язык (английский). Учебно-методическое пособие
.pdf
цвет. Кислая фосфатаза подобной реакции не дает. При учете ре-
А1
А2
Б1
Б2
зультатов реакции для более четкого проявления окраски фенолфталеина в колониях фосфатгюложительных микроорганизмов в
крышку чашки Петри вносят 5-6 капель 25% раствора аммиака
(NH4OH) и ставят на нее перевернутую (дном кверху) чашку с сибиреязвенным микробом на 10 мин. Под воздействием щелочных
паров аммиака розовый цвет фенолфталеина становится более интенсивным, и фосфатобразующие колонии приобретают малиновый
цвет с лиловым оттенком.
Рисунок 36 - Фосфатазная активность на дифференциально-
диагностических средах различного состава
(А1, А2 - хромогенный агар, содержащий p-NPP; Б1 – среда
для выделения и культивирования сибиреязвенного микроба; Б2разработанный аналог среды для выделения и культивирования сибиреязвенного микроба)
51
Проявление фосфатазной активности на дифференциально-
А
Б
Рисунок 38 – А – B. anthracis штамм 55-ВНИИВВиМ; Б – Bacillus
cereus var. mycoides штамм α-5 и Bacillus polymyxa штамм 313/04
диагностических средах различного состава. А1, А2 - хромогенный
агар, содержащий p-NPP; Б1 – среда для выделения и
культивирования сибиреязвенного микроба; Б2 - разработанный
аналог среды для выделения и культивирования сибиреязвенного
микроба.
Проявление ферментативной активности культур различ-
ных представителей рода Bacillus на MYP-агаре
Рисунок 37 – Взаимодействие фагов Fah-ВНИИВВиМ и R/D-
Ph-6 с культурами представителей рода Bacillus
52
Идентификация спор полевых изолятов B.anthracis с ис-
пользованием иммунохроматографических тестов
Иммунохроматографический тест B.anthracis предназначен
для экспресс-выявления и идентификации спор Bacillus anthracis
возбудителя сибирской язвы. Представляет собой пластиковую диагностическую панель (футляр) с лункой для добавления образца и
с окошком для считывания результатов. Специфической мишенью,
наличие которой в пробе выявляет данный тест, является споровый
антиген В. anthracis.
«ИХ тест B.anthracis» обеспечивает выявление и идентификацию спор В. anthracis в:
суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, вы-
ращенных на "голодном" агаре в течение 10 суток при 30-3 0С;
суспензиях, полученных из объектов внешней среды путем
специальной пробоподготовки.
«ИХ тест B.anthracis» обеспечивает видоспецифическое выявление спор В. anthracis в концентрации 108 спор/мл.
При использовании «ИХ тест В. anthracis» анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.
Идентификация спор В. anthracis. Приготовить взвесь спор.
Для этого, микробиологической петлей взять колонию с поверхности плотной питательной среды и суспендировать в ФБР по стандартному образцу мутности до концентрации не менее 10
8
спор/мл
(10 ед. ОСО 42-28-8511 эквивалентно 108 спор/мл).
Выявление спор В. anthracis в объектах внешней среды. На
данном этапе с целью концентрирования спор до детектируемого
уровня проводится пробоподготовка по соответствующим методическим рекомендациям соблюдением СП 1.3.1285-03 «Безопасность
работы с микроорганизмами I - II групп патогенности».
Анализ проводится в трех повторах.
1. Для этого извлекают необходимое количество упаковок из
холодильника и выдержать при комнатной температуре 15 минут;
2. Вскрывают ножницами пакет, извлекают ИХ тест, помеща-
ют в чашку Петри. Поверхность теста должна быть горизонтальной;
3. С помощью пипетки наносят в приемное окно теста 0.1 мл
подготовленного для испытаний материала;
4. После 3-х минутной экспозиции наносят 0,1 мл ФБР в при-
емное окно теста.
Учет результата проводится через 15-20 минут.
53
Таблица - Интерпретации результатов
Положительный
результат
Наличие видимых глазом красных линий в
зоне "С" и "Т"
Отрицательный
результат
Наличие красной линии только в зоне "С"
Тест не работает
Отсутствие красной линии в зоне "С" даже
при наличии красной линии в зоне "Т"
Тест не работает
Отсутствие красной линии в зоне "С" и в
зоне "Т"
А
Б
Рисунок 39 - А- ИХ-тест B. anthracis; Б- Тест-полоска B.
anthracis.
54
Вопросы для самопроверки
1. Какова устойчивость спор сибирской язвы в окружающей
среде?
2. Какие вы знаете формы этого заболевания?
3. К какой группе микроорганизмов относится сибирская язва?
4. В чем заключаются особенности возбудителя сибирской яз-
вы?
5. Какой материал забирается для лабораторного исследова-
ния?
55
Глава 3. Выявление возбудителя во внешней среде
Учитывая особенности возбудителя и его способность длительно сохраняться во внешней среде, выявление его в почве, воде
и других объектах следует придавать особое значение. Для этой
цели предложено большое количество разнообразных способов и
методов. Среди них выделяют сигнальные и заключительные.
К сигнальным методам Э.Н. Шляхов относит люминесцентносерологические исследования и тесты на капсулообразование. На
основании их можно судить о наличии возбудителя в исследуемом
объекте. Однако бактериологические исследования и выделение
возбудителя необходимо проводить, чтобы выделить культуру и
иметь точные диагностические доказательства.
К.Ф. Бусыгин (1961) сообщил, что ему удалось разработать
методику обнаружения возбудителя в воде при концентрации спор
5000 -10000 в 1 мл. По К.Ф. Бусыгину, метод иммунофлуоресцен-
ции является значительно более чувствительным, чем пробирочная
реакция преципитации.
При проведении бактериологических исследований на присутствие возбудителя сибирской язвы в пробах почвы или воды прежде всего приходится встречаться с отсутствием элективных сред,
приспособленных только для роста возбудителя сибирской язвы.
Обычно применяют мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный
агар, агар Хоттингера или другие среды. На всех этих питательных
средах хорошо растет и другая микрофлора, в том числе различные
сапрофитные спорообразующие бациллы.
Исследования почвы
На основании имеющихся эпизоотологических данных отбирают участки почвы, подлежащие бактериологическим исследованиям. Чаще всего это бывают участки скотомогильника, где захоронены трупы животных, павших от сибирской язвы.
Исследуемую почвенную территорию следует разделить на
участки размером не более 16м2. Мы обычно отбираем участок
размером 8 - 10м2, из которого почвенным буром отбираем пробы
по 20 - 30 г каждая. Из одного участка отбирается пять буров - четыре по углам участка и один в центре.
При определении поверхностного загрязнения достаточно
пробы почвы отбирать на глубину 10 - 20 см. При этом из каждого
участка будет взято десять проб. Однако для более полной характеристики участка следует установить степень и поверхностного, и
56
глубинного загрязнения. С этой целью пробы следует отбирать через каждые 20 см до глубины 2 м (55 проб). Отобранные пробы
почвы необходимо тщательно перемешать и освободить от посторонних примесей. Затем из каждой пробы делают навеску 10 - 15 г,
помещают в колбу и заливают 50 - 60 мл дистиллированной воды.
Можно применить шуттелирование этих проб в течение 20-30 мин
или центрифугирование 5 - 10 мин.
Перед центрифугированием надосадочную жидкость прогре-
вают в водяной бане при температуре 65 - 70° в течение 20 мин, а из
осадка делают посевы в чашки Петри на МПА. Подогрев имеет
большое значение, так как при этом удается освободиться от нестойких, не образующих спор различных микроорганизмов.
Официальные методические указания рекомендуют надоса-
дочную жидкость по 0,2 мл высевать на 2% МПА в 3 - 4 бактериологические чашки и оставлять их закрытыми на 10 - 15 мин для
подсушивания. Затем из каждой чашки дробно засевать новые 2-3
чашки с МПА. Засеянные чашки помещают в термостат на 24 ч при
температуре 37°. После этого характерные для возбудителя сибирской язвы колонии пересевают на дифференциальнодиагностические среды.
Исследуемой надосадочной жидкостью в дозе 0,5 мл заражают
двух белых мышей подкожно в область паха и наблюдают за ними
десять суток. Павших мышей вскрывают, из органов делают посевы
на питательные среды.
Дальнейшие исследования проводят по методикам, применяемым для идентификации возбудителя. С этой целью производят
посевы на МПА и МПБ, отбор и микроскопию подозрительных колоний, исследуют на подвижность, споро - и капсулообразование,
гемолитическую активность, рост в жидкой желточной среде, реакцию «жемчужного ожерелья», чувствительность культур к сибиреязвенному бактериофагу.
Исследования воды
Для исследования берут не менее 1 л воды. Исследуемую воду
делят на две равные части, по 500 мл, одну из которых прогревают
при температуре 65 - 70° в течение 15 - 20 мин (рисунок 40).
57
Рисунок 40 – Исследование воды на наличие возбудителя си-
бирской язвы
Прогретую воду можно непосредственно высевать на МПА,
МПБ, среду Хоттингера. Непрогретую порцию воды используют
для концентрации микроорганизмов. Ее раздельно пропускают через четыре мембранных фильтра № 3. Конценрированный на
фильтрах материал засевают на питательные среды, используют
для люминесцентно-серологического анализа и для биологической
пробы на белых мышах.
Близки к изложенным методические приемы применяют при
использовании шерсти, щетины, фуража.
Пробы тщательно измельчают в МПБ, дают время для отстаи-
вания, а отстоявшуюся жидкость прогревают 20 мин в водяной бане
при температуре 65 - 70° и производят посевы в чашку Петри. Кроме того, для концентрации спор отстоявшуюся жидкость центрифугируют в течение 15-20 мин и из полученного осадка делают посевы на МПА.
Дифференциальная диагностика
При проведении дифференциального диагноза определенную
помощь может оказать клиническая диагностика. При этом необходимо прежде всего по клиническим признакам отдифференцировать эмфизематозный карбункул крупного рогатого скота, газовые
58
отеки, острые формы пастереллеза, брадзот и энтеротоксемию овец
(рисунок 41).
Эмфизематозный карбункул и газовые отеки от сибиреязвенного карбункула дифференцировать сравнительно несложно,
так как при газовых отеках образовавшийся карбункул при прощупывании дает ясно выраженную крепитацию, а при перкуссии выявляют тимпанический звук.
Рисунок 41 – Дифференциальная диагностика
Высокая температура тела при ЭМКАРе регистрируется лишь
в первые 4 - 8 ч заболевания, затем она снижается почти до нормы.
У животных, больных сибирской язвой, снижение температуры тела наблюдается только в агональном состоянии.
Так же, как и при сибирской язве, отечные инфильтраты возникают при заболевании злокачественным отеком, но они крепитируют и связаны с ранением или возникают после тяжелых родов,
сопровождающихся обширными травмами. Температура тела повышается до 40 - 41°.
Клинически весьма сложна дифференциальная диагностика
сибирской язвы и пастереллеза крупного рогатого скота. Дело в
том, что лихорадка, появление воспалительных инфильтратов в
подкожной клетчатке и быстрое течение болезни со смертельным
59
исходом свойственны как острому течению пастереллеза, так и сибирской язве (рисунок 42).
Рисунок 42 – Дифференциальная диагностика сибирской язвы
Очень сложно по клиническим признакам дифференцировать
сибирскую язву, брадзот и энтеротоксемию овец, поскольку в
клиническом проявлении этих болезней больше общих черт, чем
различий.
Безотечная форма сибирской язвы по клиническим признакам
и течению бывает весьма подобна тейлериозу. При клиникоэпизоотологической дифференциации этих болезней следует учесть
неблагополучие местности по сибирской язве или тейлериозу, а
также наличие клещей-переносчиков. Важнейшим отличительным
клиническим признаком является то, что при тейлериозе в 3 - 4 раза
увеличиваются поверхностные лимфатические узлы предлопаточной области.
Большое значение для дифференциального диагноза имеет
микроскопия крови больного животного: при тейлериозе в эритроцитах обнаруживаются паразиты.
60
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]