Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Биохимия и биохимия мышечной деятельности. Практикум
.pdf
41
Работа 1. Качественная реакция на инсулин (биуретовая реакция)
(теоретическое ознакомление).
Реактивы:
1) инсулин в ампулах (можно использовать в разведении 1:100);
2) едкий натрий, 10 %-ный раствор;
3) сульфат меди, 1 %-ный раствор.
Опыт. В пробирку налить 5–6 капель раствора инсулина, добавить
1 мл раствора едкого натрия и 2 капли сульфата меди. Содержимое пробирок
перемешать, наблюдать появление сине-фиолетового окрашивания.
Результат опыта занести в табл. 1.13 и дать объяснение.
Работа 2. Качественная реакция на инсулин (реакция Фоля) (теоретическое ознакомление).
Реактивы:
1) инсулин в ампулах (можно использовать в разведении 1:100);
2) едкий натрий, 30 %-ный раствор;
3) ацетат свинца, 5 %-ный раствор.
Опыт. В пробирку налить 5–6 капель инсулина, 5 капель раствора едкого
натрия. Добавить 1 каплю раствора ацетата свинца. Пробирку на спиртовке кипятить 2–3 мин. Наблюдать появление черного или бурого осадка.
Результаты опыта занести в табл. 1.13 и дать объяснение.
Работа 3. Качественная реакция на адреналин (теоретическое ознакомление).
Реактивы:
1) адреналин в ампулах (можно использовать в разведении 1:100);
2) хлорное железо, 1 %-ный раствор;
3) едкий натрий, 10 %-ный раствор.
Опыт. В пробирку налить 2–3 капли адреналина, прибавить 1 каплю рас-
твора хлорного железа; появляется зеленое окрашивание. После добавления
1 капли раствора едкого натрия окрашивание становится вишнево-красным.
Результат опыта занести в табл. 1.13 и дать объяснение.
Работа 4. Обнаружение 17-кетостероидов в моче.
Реактивы:
1) моча (свежая);
2) м-динитробензол, 2 %-ный спиртовой раствор;
3) гидроксид натрия, 8 моль/л спиртовой раствор.
42
Опыт. Собрать мочу. В пробирку внести 20 капель мочи и 30 капель рас-
твора м-динитробензола. Раствор м-динитробензола добавить аккуратно и мед-
ленно, чтобы он стекал по стенке пробирки. Пробирку не встряхивать. Затем по
стенке пробирки добавить 6 капель раствора гидроксида натрия. Наблюдать появление в верхнем слое жидкости розово-фиолетового окрашивания.
Обнаружение 17-кетостероидов основано на их взаимодействии с м-динитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации розовофиолетового цвета.
В норме у здоровых мужчин экскреция (17-кетостероидов) составляет
44,48 ± 2,27 мкмоль/сутки (12,83 ± 0,8 мг/сутки), у здоровых женщин —
36,78 ± 2,38 мкмоль/сутки (10,61 ± 0,66 мг/сутки). Коэффициент пересчета в единицы СИ (мкмоль/сутки) равен 3,464.
Результат опыта занести в табл. 1.13 и дать объяснение.
Таблица 1.13
Схема определения гормонов в биологических материалах
№
пробы
Название
реакции
Используемый
материал
Окрашивание
Что
определяем
1
Биуретовая
Инсулин
2 Фоля
Инсулин
3
Реакция на адреналин
Адреналин
4
Реакция на 17-кетостероиды
Моча
Контрольные вопросы
1. Дайте определение понятиям «гормон», «рилизинг-фактор».
2. Назовите важнейшие гормоны белковой природы, гормоны, производ-
ные аминокислот, стероидные гормоны.
3. Объясните механизм действия гормонов.
4. Почему с открытием нейрогормонов гипоталамуса (кто получил Но-
белевскую премию за это?) ведущая роль гормонов гипофиза отошла на второй план?
5. Какие гормоны действуют на дистанции, в местах их образования, на
уровне ДНК?
43
6. Какие гормоны относятся к катаболическим, а какие к анаболическим?
В чем различие механизма их действия?
7. Перечислите гормоны, вырабатываемые щитовидной, паращитовидной
железами и надпочечниками.
8. Где вырабатываются женские гормоны у мужчин? С чем связано облы-
сение на голове у мужчин, тогда как у женщин облысение на голове практически
не встречается?
9. Где вырабатываются мужские гормоны у женщин? С чем связана «вири-
лизация» у женщин (появление усов, осипший голос)?
10. Как называются «гормоны удовольствия», «радости» и «обнимашек»?
Где они вырабатываются? Какие факторы помогают их образованию?
11. Перечислите гормоны, вырабатываемые в желудочно-кишечном тракте
(всего их 16). Где и из чего образуются простагландины?
12. В чем заключается заслуга канадского ученого Ганса Селье в изучении
гормонов?
13. Сколько ученых, раскрывших строение, механизм действия и примене-
ние гормонов с лечебной целью, было удостоено Нобелевской премии?
14. К какой группе гормонов относится инсулин, адреналин? На какие об-
менные процессы они влияют?
15. Что вы обнаружили, проделав опыт?
Литература
1. Березов, Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коров-
кин. — 3-е изд., перераб. и доп. — Москва : Медицина, 2004. — С. 248–297;
357–359; 403–404; 534–544.
2. Биохимия : учебник для институтов физической культуры / под редак-
цией Н.Н. Яковлева. — 2-е изд., испр. и доп. — Москва : Физкультура и спорт,
1974. — С. 196–201; 281–294.
3. Биохимия : учебник для институтов физической культуры / под редак-
цией В.В. Меньшикова, Н.И. Волкова. — Москва : Физкультура и спорт,
1986. — С. 115–123; 246–257.
4. Биохимия мышечной деятельности : учебник для студентов физического
воспитания и спорта / Н.И. Волков, Э.Н. Несен, А.А. Осипенко, С.Н. Корсун. —
Киев : Олимпийская литература, 2000. — С. 63–73; 148–149; 160–168; 203–205;
481–485.
44
5. Николаев, А.Я. Биологическая химия : учебник для студентов медвузов
и врачей всех специальностей / А.Я. Николаев. — 3-е изд., перераб. и доп. —
Москва : Медицинское информационное агентство, 2004. — С. 387–431.
6. Яковлев, Н.Н. Биохимия спорта : учебник для студентов института фи-
зической культуры / Н.Н. Яковлев. — Москва : Физкультура и спорт, 1974. —
С. 77–104; 191–205.
ТЕМА 10. ОБМЕН УГЛЕВОДОВ
Теоретические вопросы:
1. Переваривание углеводов в желудочно-кишечном тракте.
2. Всасывание продуктов гидролиза углеводов.
3. Гликолиз.
4. Аэробное окисление углеводов.
5. Синтез и распад гликогена. Глюконеогенез.
6. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы.
7. Пластическая функция углеводов.
Лабораторная работа 1.
Ферментативный гидролиз крахмала
Методика и порядок выполнения работы
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, бюретки, воронки, стакан-
чики, колбы, спиртовки, фильтровальная бумага, термостат, водяная баня, мерные пипетки вместимостью 1–2 мл.
Реактивы:
1) слюна, водный раствор. Ополоснуть рот водой, выплюнуть. Снова
набрать в рот немного воды, подержать 2 мин, выпустить в бумажный фильтр.
Фильтрат использовать для работы;
2) йод, 1 %-ный раствор в 2 %-ном растворе йодида калия;
3) едкий натрий, 10 %-ный раствор;
4) сульфат меди, 5 %-ный раствор.
Опыт. В 2 пробирки налить по 10 капель раствора крахмала. В первую
пробирку добавить 5 капель воды (контроль), во вторую — 5 капель раствора
слюны (опыт). Содержимое пробирок перемешать, поставить в термостат или
водяную баню на 15 мин при температуре 37 °С.
45
Из контрольной пробирки отобрать в 2 пробирки по 4 капли содержимого.
В одну из них добавить 1 каплю раствора йода. В другую — 4 капли раствора
едкого натрия и 1 каплю раствора сульфата меди. Нагреть до кипения на спиртовке. Наблюдать за изменением окрашивания в обеих пробирках.
С содержимым опытной пробирки проделать те же реакции и сравнить полученные окрашивания с контрольной пробой.
Результаты опытной и контрольной проб занести в табл. 1.14 и дать объяснение.
Лабораторная работа 2. Количественное определение
амилазной активности слюны по Вольгемуту
Методика и порядок выполнения работы
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, бюретки, воронки, стакан-
чики, колбы, спиртовки, фильтровальная бумага, термостат, водяная баня, мерные пипетки вместимостью 1–2 мл.
Реактивы:
1) крахмал, 0,1 %-ный раствор;
2) йод, 1 %-ный раствор в 2 %-ном растворе йодида калия;
3) слюна, водный раствор в разведении 1:10;
4) дистиллированная вода.
Оформление протокола лабораторного занятия см. в прил. 13 и 14.
Опыт. Работать с водным раствором слюны. В 8 пронумерованных про-
бирок налить по 1 мл дистиллированной воды. В первую пробирку добавить
1 мл раствора слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое пробирки перемешать
несколько раз. Набрать из первой пробирки пипеткой 1 мл раствора и перенести
во вторую пробирку, из второй — в третью и так до 8-й пробирки. Из 8-й пробирки 1 мл смеси вылить. Во все пробирки прилить по 1 мл воды и по 2 мл раствора крахмала. Содержимое пробирок встряхнуть и хорошо перемешать.
Поместить в термостат или водяную баню на 30 мин при температуре
37 °С. Пробирки вынуть из термостата, охладить под водопроводной водой; во
все пробирки добавить по 1 капле раствора йода. Следить за изменением окраски
в пробирках. Отметить пробирку, имеющую желтоватый цвет, где произошел
полный гидролиз крахмала. В тех пробирках, где наблюдается окрашивание растворов от розового, красно-фиолетового до красно-бурого цвета, в растворе присутствуют декстрины. Пробирки синего цвета указывают на наличие в растворе
негидролизированного крахмала.
46
Результат опыта занести в табл. 1.15 и 1.16 и дать объяснение.
Провести расчет полученных данных. Рассчитывают количество слюны
в последней пробирке с желтоватой окраской. Если раствор слюны был в разведении в 160 раз, составляют пропорцию и находят амилокластическую силу
слюны.
Расчет проводят по формуле:
X = 2 мл × 1 / (1 / 160) = 320 мл 0,1 %-ного раствора крахмала,
где 1:160 мл раствора слюны расщепило 2 мл 0,1 %-ного раствора крахмала,
1 мл раствора слюны расщепил X мл 0,1 %-ного раствора крахмала. Следовательно, амилазная активность слюны равна 320 мл.
Таблица 1.14
Ферментативный гидролиз крахмала амилазой слюны
№
пробирки
Субстрат
Фермент
Окрашивание
Реакция
Троммера
Реакция
с йодом
1
Крахмал
Вода (контроль)
2
Крахмал
Амилаза (опыт)
Таблица 1.15
Порядок определения амилазной активности слюны
по Вольгемуту
№ пробир
ки
Количество воды,
мл
Количество слюны,
мл
Разведение слюны,
ед.
Количество воды,
мл
Количество
крахмала, мл
Время, мин
Окрашивание
с йодом
Амилокластическая
сила слюны, ед.
1 1 1
20 1 2
30
2 1 1
40 1 2
30
47
№ пробир
ки
Количество воды,
мл
Количество слюны,
мл
Разведение слюны,
ед.
Количество воды,
мл
Количество
крахмала, мл
Время, мин
Окрашивание
с йодом
Амилокластическая
сила слюны, ед.
3 1 1
80 1 2
30
4 1 1
160 1 2
30
5 1 1
320 1 2
30
6 1 1
640 1 2
30 7 1 1 1 280
1 2 30
8 1 1
2 560
1 2 30
Таблица 1.16
Количественное определение амилазной активности слюны
по Вольгемуту
№ проб
ы
ФИО
студента
Факультет
Курс
Группа
Пол
Возраст
Специализация
Квалификация
Покой
Амилокластическая
сила слюны,
мл
1
2
3
4
5
Нормальные значения
160–320
Контрольные вопросы
1. Перечислите ферменты желудочно-кишечного тракта, участвующие
в переваривании углеводов.
2. Укажите пути расщепления глюкозы в организме.
48
3. Посмотрите на реакции гликолиза и процессы глюконеогенеза.
4. Укажите пути использования лактата.
5. Почему аэробный гликолиз более выгоден для организма по сравнению
с анаэробным гликолизом? Укажите выход энергии ATP и конечные продукты.
6. Почему ацетил-СоА считается универсальным химическим веществом?
7. За открытие какого цикла биохимик Ханс Кребс был удостоен Нобелев-
ской премии? В каком году?
8. Где протекает лимонный цикл X. Кребса: в ядре, цитоплазме, митохон-
дриях?
9. Назовите конечные продукты и выход энергии АТР при аэробном окис-
лении глюкозы. Какой вклад внес Фриц Липман в изучение этого процесса?
10. Опишите особенности пентозного пути.
11. Какие водорастворимые витамины участвуют в обмене углеводов
(прил. 15)?
12. Опишите изменения, происходящие в проделанных опытах.
Литература
1. Березов, Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коров-
кин. — 3-е изд., перераб. и доп. — Москва : Медицина, 2004. — С. 319–362.
2. Биохимия : учебник / Е.С. Северин, Т.П. Алейникова, Л.В. Авдеева
[и др.] ; под редакцией Е.С. Северина. — 4-е изд., испр. — Москва : ГЭОТАРМедиа, 2005. — С. 297–369.
3. Биохимия : учебник для институтов физической культуры / под редак-
цией Н.Н. Яковлева. — 2-е изд., испр. и доп. — Москва : Физкультура и спорт,
1974. — С. 142–161.
4. Биохимия : учебник для институтов физической культуры / под редак-
цией В.В. Меньшикова, Н.И. Волкова. — Москва : Физкультура и спорт,
1986. — С. 185–207.
5. Биохимия мышечной деятельности : учебник для студентов физического
воспитания и спорта / Н.И. Волков, Э.Н. Несен, А.А. Осипенко, С.Н. Корсун. —
Киев : Олимпийская литература, 2000. — С. 163–178.
6. Николаев, А.Я. Биологическая химия : учебник для студентов медвузов
и врачей всех специальностей / А.Я. Николаев. — 3-е изд., перераб. и доп. —
Москва : Медицинское информационное агентство, 2004. — С. 236–241;
248–286.
49
ТЕМА 11. ОБМЕН ЛИПИДОВ
Теоретические вопросы:
1. Превращение липидов в процессе пищеварения.
2. Обмен триацилглицеролов.
3. β-окисление жирных кислот.
4. Образование кетоновых тел.
5. Обмен фосфолипидов.
6. Холестерол (холестерин).
Лабораторная работа 1.
Обнаружение продуктов обмена липидов
Методика и порядок выполнения работы
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, бюретки, воронки, стакан-
чики, колбы, спиртовки, фильтровальная бумага, водяная баня, чашки Петри,
мерные пипетки вместимостью 1–2 мл.
Работа 1. Растворение жиров.
Реактивы:
1) растительное масло;
2) бензин;
3) этиловый спирт 96 %-ный.
Опыт. В две пробирки внести по 3 капли растительного масла. Добавить
по 10 капель: в первую — бензина, во вторую — этилового спирта. Пробирки
встряхнуть, наблюдать растворение жира в первой пробирке.
Результат опыта занести в табл. 1.17 и дать объяснение.
Работа 2. Эмульгирование жиров.
Реактивы:
1) растительное масло;
2) яичный белок, 1 %-ный раствор;
3) едкий калий, 10 %-ный раствор;
4) бикарбонат натрия, 10 %-ный раствор;
5) дистиллированная вода;
6) мыло, 1 %-ный раствор.
50
Опыт. В 5 пробирок налить по 2 капли растительного масла и по 3 кап-
ли дистиллированной воды. Затем добавить по 4 капли: в первую пробирку —
раствора белка, во вторую — гидроокиси калия, в третью — бикарбоната натрия,
в четвертую — мыльного раствора; пятая пробирка служит контролем. Все пробирки тщательно встряхнуть и оставить при комнатной температуре на 5 мин.
По истечении времени наблюдать сохранение эмульсии во всех пробирках,
кроме пятой, где происходит расслоение жира и воды.
Результат опыта занести в табл. 1.17 и дать объяснение.
Работа 3. Проба Герхарда (определение ацетоуксусной кислоты).
Реактивы:
1) моча (свежая);
2) хлорное железо, 10 %-ный раствор.
Опыт. Собрать мочу. Для реакции взять 10 мл мочи и прибавить 10 ка-
пель раствора хлорного железа. Образовавшийся осадок ферритфосфатов отфильтровать, так как осадок мешает ходу определения, и к прозрачному фильтру
прибавить еще несколько капель хлорного железа. При положительном результате, т. е. в присутствии ацетоуксусной кислоты, жидкость приобретает краснофиолетовое и темно-красное окрашивание. Реакция основана на взаимодействии
ацетоуксусной кислоты с полуторахлористым железом.
Результат опыта занести в табл. 1.18 и дать объяснение.
Лабораторная работа 2.
Обнаружение желчных пигментов
Методика и порядок выполнения работы
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, бюретки, воронки, стакан-
чики, колбы, спиртовки, фильтровальная бумага, водяная баня, чашки Петри,
мерные пипетки вместимостью 1–2 мл.
Работа 1. Проба Гмелина (на желчные пигменты).
Реактивы:
1) моча (свежая);
2) концентрированная азотная кислота.
Опыт. В узкую пробирку налить концентрированной азотной кислоты
(осторожно!), по стенке пробирки наслоить мочу. На границе жидкостей
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]