Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Взаимодействие полей и излучений с биологическими объектами. Учебное пособие
.pdf
где R – расстояние между пластинами (мембранами), а В – постоянная Гамакера, имеющая порядок 10
-20
–10
-12
Дж. Помимо баланса сил электроста-
тического отталкивания и молекулярного притяжения, необходимо учитывать наличие на поверхности мембран слоя воды с измененными свойствами. Ориентация молекул в гидратных слоях создает дополнительные препятствия для установления контакта между близкорасположенными мембранами. Гидратные силы проявляются на расстояниях порядка 2-3 ангстрема и экспоненциально возрастают с уменьшением расстояния между
поверхностями.
Для межмембранных расстояний порядка 1-10 нм можно учитывать
только электростатическое отталкивание и вандерваальсовы силы притяжения. Результирующая сила взаимодействия мембран представлена на
рис. 3.1.
Рис. 3.1. Зависимость результирующей силы взаимодействия мембраны от расстояния между мембранами при различных плотностях поверхностного заряда (7;
7,6; 10)
Из рис. 3.1 видно, что на больших расстояниях и на очень малых рас-
стояниях преобладает притяжение. Однако если мембраны несут большой
поверхностный заряд, для их соединения потребуется преодолеть очень
значительную силу электростатического отталкивания. В случае умеренно-
61
го поверхностного заряда энергетический барьер слияния мембран оказывается преодолимым.
Одна из схем механизма слияния представлена на рис. 3.2. На первой
стадии происходит сближение мембран и уменьшается толщина водной
прослойки; затем в силу тепловых флуктуаций мембран преодолевается барьер, препятствующий соединению мембран, и образуется мембранная перегородка. В дальнейшем в перегородке в результате тепловых флуктуаций
возникает пора сравнительно большого радиуса, приводящая к разрыву
мембранной перегородки и полному слиянию клеток.
Рис. 3.2. Стадии слияния мембран: а – исходное состояние, б – сближение мем-
бран, в – образование бислойной перегородки, г – полное слияние
При исследовании слияния целых клеток установлено, что вероятность слияния возрастает в присутствии некоторых липидов (насыщенные
карбоновые кислоты с 10-14 углеродными атомами), индуцирующих коллоидно-осмотическое набухание клеток. Набухание, сопровождаемое слия-
нием, наблюдали также при прогреве эритроцитов до 50 С.
Процедура электрослияния обычно включает предварительную стадию приведения клеток в контакт. Такой контакт может быть достигнут путем воздействия на суспензию клеток переменного электрического поля: в
результате диэлектрофореза клетки выстраиваются в цепочки. Для приведения клеток в контакт используют также центрифугирование, сближение
62
культивируемых клеточных монослоев под давлением и другие методы.
После приведения клеток в контакт их обрабатывают коротким импульсом
электрического поля, которое вызывает образование пор и индукцию слияния. На следующей стадии происходят набухание клеток и увеличение сечения мембранной трубки, соединяющей клетки (рис. 3.3).
а б в г д
Рис. 3.3. Предполагаемый механизм слияния фосфолипидных мембран: а – плоскопараллельный контакт, б – образование перемычки между локальными вспучиваниями близкорасположенных (внутренних) монослоев, в – триламинарная
структура, г – образование сквозной поры в бислойной перегородке, д – образование трубки (полное слияние) [5]
Механизм электрослияния представляют следующим образом. Под
действием внешнего электрического поля в зоне контакта клеточных мембран происходит образование коаксиальных пор, через которые проходит
ток. Силовые линии электрического поля распределены таким образом, что
возникает давление, сближающее мембраны и замыкающее кромки пор.
При замыкании кромок пор контактных мембран образуется мембранная
трубка, соединяющая цитоплазму сливающихся клеток. Вызванное электропорацией набухание клеток вызывает натяжение мембран, благодаря которому происходят увеличение параметра межклеточной перемычки и полное перемешивание цитоплазмы клеток.
Движение клеток. Известны два типа движения клеток в электриче-
ских полях. Постоянное поле вызывает перемещение клеток, имеющих поверхностный заряд, – явление электрофореза. При воздействии на клеточные суспензии переменного неоднородного поля наблюдается движение
63
2
)Re(
2
1
EKF
2
)Im( EKF
c
клеток, называемое диэлектрофорезом. При диэлектрофорезе поверхностный заряд клеток не играет существенной роли; механизм движения состоит во взаимодействии наведенного дипольного момента с внешним полем.
Согласно теории [5], диэлектрофоретическая сила пропорциональна
действительной части безразмерного параметра К и градиенту квадрата
напряженности поля:
Вращающий момент пропорционален мнимой части параметра К и
квадрату напряженности вращающегося поля:
. (3.8)
Спектры диэлектрофореза и электровращения клеток представлены
на рис. 3.4.
. (3.7)
а б
Рис. 3.4. Типичные спектры диэлектрофореза (а) и электровращения (б) для
сферических частиц с однослойной оболочкой [5]
Различие направлений диэлектрофоретической силы на низких (килогерцы) и высоких (мегагерцы) частотах обусловлено различной ориентацией индуцированного дипольного момента по отношению к внешнему электрическому полю. Из курсов по электричеству известно, как ориентируются
дипольные моменты плохо проводящих диэлектрических частиц в проводящей среде и хорошо проводящих частиц, окруженных малопроводящей
64
средой. В случае воздействия низкочастотного поля мембрана представляет
собой хороший изолятор и ток идет в обход клетки по проводящей среде.
Индуцированные заряды усиливают напряженность поля внутри частицы.
Такое распределение индуцированных зарядов соответствует антипараллельной ориентации дипольного момента частицы относительно внешнего
поля.
При воздействии высокочастотного поля проводимость мембраны
высока; и так как электропроводность внутриклеточной среды выше электропроводности бессолевой внеклеточной среды, ток протекает преимущественно через клетку. В этих условиях распределение индуцированных зарядов на поверхности частиц соответствует параллельной ориентации дипольного момента по отношению к внешнему полю.
Критическая частота f1 (см. рис. 3.4), при которой происходит смена
направления диэлектрофоретического движения, соответствует условию
равенства электропроводности среды и клетки. При повышении частоты в
диапазоне десятков и сотен мегагерц диэлектрофоретическая сила уменьшается от максимального уровня F2 до нуля, а затем вновь меняет направление. Этот переход обусловлен дисперсией поляризации цитоплазмы, аналогично тому, как изменение силы от уровня F1 до F2 связано с дисперсией
поляризации мембран.
Зависимость скорости и направления вращения клеток от частоты
вращающегося поля определяется формулами (3.7), (3.8) и представлена на
рис. 3.4, б. Максимумы в спектре электровращения соответствуют критическим частотам f1 и f2 в спектре диэлектрофореза.
Деформация мембран. Явления диэлектрофореза и электровращения
клеток тесно связаны с действием на поверхность клетки сил, называемых
максвелловскими напряжениями. Величина и направление силы, действующей на клеточные мембраны в электрическом поле, определяются соотношением
65
n
E
EnET
2
][
2
0
cos][ EnnE
][ nE
n
E
T
2
2
][ nE
nEnEE
2
]][[
n
E
T
2
2
0
, (3.9)
где Т – сила, Е – напряженность поля, n – вектор нормали к поверхности,
– относительная диэлектрическая проницаемость диэлектрика, 0=8,8510
-12
Ф/м – абсолютная диэлектрическая проницаемость вакуума.
В случае воздействия на клетку низкочастотного поля силовые линии
обходят клетку, т.е. поле направлено тангенциально к поверхности. По
определению векторного произведения
, где – угол между
вектором поля и радиус-вектором n. Так как векторы E и n взаимно перпендикулярны, произведение векторов
равно нулю. Поэтому
. (3.10)
Из (3.10) видно, что на клетку в области экватора действует направленное
внутрь давление, которое заставляет клетку вытягиваться вдоль силовых
линий поля.
В случае воздействия высокочастотного поля силовые линии прохо-
дят через клетку, т.е. поле направлено перпендикулярно к мембране на обоих концах клетки, обращенных к электродам. При совпадении направлений
векторов поля и нормали к поверхности произведение
равно Еn и
. Поэтому
. (3.11)
Из (3.11) видно, что высокочастотное поле создает усилие, которое
растягивает концы клеток в направлении к электродам. Деформация клеток
в переменных электрических полях наблюдается экспериментально и содержит информацию о вязкоупругих характеристиках клетки. Помимо обратимых деформаций, исчезающих после выключения поля, обнаружены и
необратимые изменения клеточной морфологии, обусловленные воздействием переменных полей. Показано, что наложение электрического поля
приводит к формированию у фибробластов отростков, которые по своей
66
морфологии сходны с отростками, формирующимися в физиологических
условиях, например при распластывании клеток на субстрате.
Силы, действующие на клеточные мембраны в электрическом поле,
играют важную роль в сближении мембран при электроиндуцированном
слиянии клеток. Согласно одной из гипотез, электрослияние начинается со
стадии образования соосных пор в контактных мембранах сближенных клеток. В области образования соосных пор линии поля располагаются тангенциально к поверхности мембраны и создают силу, которая заставляет сближаться участки мембраны вблизи поры. В результате действия этих сил повышается вероятность смыкания кромок пор. После образования сквозной
поры поле, направленное тангенциально к кромке поры, стремится растянуть пору, что приводит к полному слиянию клеток [5].
Электротрансфекция. Под электротрансфекцией и электротрансформацией понимают введение в клетки чужеродной ДНК. Для проникновения
через мембрану ДНК важное значение имеют два фактора: образование в
мембране пор под действием поля (электропорация) и наличие у молекулы
ДНК заряда, обеспечивающего электрофоретическое движение ДНК в момент приложения импульса. Электрообработка клеток в присутствии ДНК
приводит к более сильному повышению мембранной проницаемости, по
сравнению с аналогичной обработкой без ДНК. На основании этих данных
выдвинуто предположение о том, что взаимодействие ДНК с мембраной
при электропорации приводит к повышению эффективного диаметра пор
или увеличению их времени жизни.
Электроактивация белков. В качестве примера электроактивации
мембранных ферментов можно назвать активацию Na, K-ATФазы в эритроцитах человека при действии переменного поля с амплитудой 20 В/см и частотой 1 кГц. Существенно, что электрические поля такой слабой напряженности не оказывают повреждающего действия на функции клеток и их
морфологию. Слабые поля низкой частоты (60 В/см, 10 Гц) оказывают также стимулирующее влияние на синтез АТФ митохондриальной АТФазой.
67
Предполагают, что электроактивация обусловлена влиянием поля на конформацию белков. Теоретический анализ модели облегченного мембранного транспорта с участием переносчика (модель с четырьмя состояниями
транспортной системы) указывает на взаимодействие транспортной системы с переменным полем. В результате такого взаимодействия энергия поля
может использоваться транспортной системой и преобразовываться в энергию химической связи АТФ.
Слабые постоянные поля могут вызывать движение свободных клеток
(электрофорез), а также вызывать латеральное перемещение заряженных
рецепторов по поверхности клеточной мембраны у иммобилизованных клеток. Явление электрофореза мембранных рецепторов используется как инструмент для изучения подвижности белков в плазматической мембране.
Взаимодействие клеточных мембран. В обычных физиологических
условиях слияние клеточных мембран является важным биологическим
процессом, лежащим в основе таких явлений, как экзоцитоз гормонов,
ферментов, нейротрансмедиаторов, а также образование гигантских клеток
в воспалительных процессах, внедрение вирусов, обладающих оболочкой, в
клетки хозяев (вирус СПИД). Рассмотренные выше механизмы действия
электрических полей на бислойные мембраны и клетки дают представление
о физико-химических факторах, влияющих на взаимодействие клеточных
мембран, которые приводят к их слиянию. Однако конкретные молекулярные механизмы этого биологического явления намного сложнее. Основная
особенность их заключается в активном участии специальных мембранных
белков в процессе слияния [5].
3.2. Классификация композиционных физико-химических сред
(живых организмов) по характеру электропроводности
Полный ток I в сложной среде, состоящей из проводников и диэлектриков (примером такой среды является организм человека или животного),
складывается из тока проводимости Iпр и тока смещения Iсм:
68
смпр
III
j
пр
j
см
j
t
jjj
смпр
0
m
пp
j
m
см
j
t
j
см
0
Соответственно и плотность полного тока
сумму плотностей тока проводимости
где – удельная электропроводность;
. (3.12)
представляет собой
и тока смещения
:
, (3.13)
– напряженность электрического
поля; – относительная диэлектрическая проницаемость; 0 – вакуумная
постоянная; t – время.
Согласно (3.13) плотность тока проводимости является функцией аб-
солютной величины напряженности электрического поля
, а плотность
тока смещения – функцией скорости изменения этого вектора, т.е. частоты
колебаний поля f. Поэтому в объекте, помещенном в постоянное поле, существует только ток проводимости, и его величина тем больше, чем больше
напряженность поля. Плотность тока смещения в постоянном поле равна
нулю.
Если на сложную физико-химическую среду воздействует перемен-
ное электромагнитное поле, то в ней возникают одновременно и ток проводимости, и ток смещения. Частота внешнего поля не влияет на величину тока проводимости, однако с ростом частоты происходит увеличение тока
смещения (согласно (3.13)).
По соотношению амплитудных значений плотностей токов проводи-
мости
и смещения
физико-химические среды (объекты) подразде-
ляются на проводники и диэлектрики [15]. Отметим, что такой подход к
классификации материалов по электрическим свойствам является нетрадиционным для физики и технического материаловедения.
Поскольку
, а напряженность поля изменяется по пери-
одическому закону
69
t
m
sin
t
t
m
cos
mm
см
j
0
0
0
m
m
m
см
пp
j
j
смпр
jj
смпр
jj
, (3.14)
где – круговая частота (=2f), то
. (3.15)
Амплитудное значение плотности тока смещения
, (3.16)
следовательно, отношение
К проводящим относятся среды (объекты), у которых
диэлектрическим – у которых
<100. В качестве критерия проводя-
. (3.17)
>100, к
щих свойств реальной среды автор [5] указывает величину тангенса угла
диэлектрических потерь:
tg<<1 для диэлектрика
tg>>1 для проводника, (3.18)
где tg = /(0), что по сути совпадает с (3.17). Из (3.17), (3.18) следует,
что только в идеальном диэлектрике (=0) нет потерь; в реальной среде потери энергии зависят от отношения /(0).
Важно иметь в виду, что одно и то же вещество (среда), помещенное в
электромагнитное поле разной частоты, может обладать свойствами либо
проводника, либо диэлектрика.
Например, типичному проводнику – меди ( = 5,8107 Смм-1;
0 10 пФм-1) проводниковые свойства присущи в электромагнитных по-
лях частотой менее 1016 Гц, тогда как при более высоких частотах (напри-
мер, в области спектра, соответствующей жесткому рентгеновскому излучению) медь проявляет свойства диэлектрика.
При воздействии электромагнитного излучения на организм человека
ток смещения начинает преобладать над током проводимости на ультразвуковых частотах, превышающих 30 МГц. Поэтому при проведении уль-
70
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]