Вирусологическая диагностика гриппа
Материалом для исследования служит отделяемое из носоглотки, мазки-отпечатки со слизистой носа, кровь, аутопсийный материал.
Вирусспецифические антитела определяют в сыворотке крови больного.
Для специфической диагностики ОРВИ применяют методы: экспресс-метод, вирусологический, серологический.
Экспресс-метод
Метод экспресс-диагностики включает обнаружение вирусных антигенов в материале при помощи РИФ и ИФА или вирусной РНК при помощи ПЦР.
Вирусологический
Заражение культуры клеток (клетки эмбриона человека):
Индикация: реакция гемадсорбции (5–6 суток); ЦПД (12–14 суток, может не выявляться); ЦП, РГА.
Идентификация: РН гемадсорбции, РН ЦПД, РН ЦП, РТГА (подтип H и N); реакция торможения нейраминидазной активности; РСК (типовая принадлежность).
Заражение куриных эмбрионов:
Индикация: РГА (2–3 суток).
Идентификация: РТГА, РСК.
Серологический
При серологическом методе исследования ставят реакции с парными сыворотками, одна из которых получена вначале болезни, другая – через 7–14 дней. Наиболее часто используют РТГА, но также могут ставить РСК, а также РН ЦПД, РН ЦП. Диагностическим считается нарастание титра антител в четыре раза или выше.
Иммунитет
При гриппе напряженный и длительный, но высокоспецифический. Основную роль играют вируснейтрализующие сывороточные антитела (блокируют гемагглютинин и нейраминидазу), также участвуют sIgA. В ходе выздоровления важна роль клеточного иммунитета (NK-клетки, T‑киллеры), интерферонов.
Принципы профилактики
Специфическая
Прививки выполняют как минимум за месяц до начала эпидемического периода. Каждый год антигенный состав вакцин изменяется в соответствии с прогнозами ВОЗ относительно «вирусного состава» надвигающейся сезонной эпидемии. Ревакцинацию проводят ежегодно.
Применяют рекомендованные вакцины прежде всего лицам из группы высокого риска (дети, пожилые и люди с хроническими болезнями, медперсонал).
Разработаны живая аттенуированная, убитая, субвирионная и субъединичная вакцины. Как наименее реактогенную и токсигенную чаще применяют субъединичную вакцину, содержащую только гемагглютинин и нейраминидазу.
Неспецифическая
По санитарно-эпидемиологическим показателям проводят изоляцию больных, вводят карантин в детских учреждениях, рекомендуют ношение масок, тщательное мытье рук.
Принципы лечения
Противовирусные препараты.
Жаропонижающие препараты.
Интерфероны и их индукторы.
Антигистаминные препараты.
Витамины группы С.
13.2. Коронавирусы
Коронавирусы – семейство вирусов, поражающих респираторный тракт (от легких до тяжелых случаев) и пищеварительную систему, вызывающих целый ряд заболеваний у людей.
История открытия и изучения коронавирусов
1965 г. – D.Tyrell и MBynoe впервые выделили от больных.
1967 г. – R.McIntosh выделил штаммы коронавирусов в культуре трахеи.
2002 г – на юге Китая в провинции Гуангдонг коронавирус SARS-Cov (ТОРС) вызвал пандемию, охватившую 33 страны.
2012 г – на Ближнем Востоке зарегистрированы случаи новой инфекции, вызванные коронавирусом MERS-Cov.
2019 г – в г.Ухань (Китай) зарегистрированы вспышки пневмонии, вызванные новым типом коронавируса – 2019-nCoV.
2020 г – ВОЗ объявила COVID-19 глобальной пандемией, вызванной SARS-CoV-2.
2021 г – на основании геномных данных 2500 современных людей ученые доказали, что древняя форма коронавируса существовала более 20 тыс. лет назад на территории нынешней Восточной Азии.
Этиология
Два рода коронавирусов – Alfacoronavirusis и Betacoronavirusis – вызывают заболевание человека.
Тяжелую респираторную инфекцию у людей вызывают вирусы:
SARS-Cov (Severe acute respiratory syndrome coronavirus, или ТОРС-коронавирус, вызывающий тяжелый острый респираторный синдром).
MERS-Cov (Middle East respiratory syndrome coronavirus, или БВРС-коронавирус, вызывающий Ближневосточный респираторный синдром).
SARS-CoV-2 штаммы Delta и Omicron (табл. 13.3).
Таблица 13.3
Современная классификация коронавирусов
Отряд/ Семейство/ Подсемейство |
Род |
Подрод |
Линия |
Вирусы |
Nidovirales/ Coronaviridae/ Coronavirinae |
Alfacoronavirusis |
Duvinacovirus |
|
HCoV-229E |
Setracovirus |
|
HCoV |
||
Betacoronavirusis |
Embecovirus |
A |
HCoV |
|
A |
HCoV |
|||
Sarbecovirus |
B |
SARS-Cov |
||
B |
SARS-Cov-2 |
|||
Merbecovirus |
C |
MERS-CoV |
||
Gammacoronavirusis Deltacoronavirusis |
||||
Строение коронавируса SARS-Cov-2
Тип: сложный, симметрия спиральная.
Форма: сферическая в виде венца.
Размеры: 80–160 нм.
Геном: однонитевая линейная +РНК.
Антигенная структура: большое количество сероваров, протективный антиген – сигнальный гликопротеин S.
Репродукция: типичная для +РНК-вирусов, весь цикл проходит в цитоплазме.
Культивирование и атомарная модель коронавируса SARS-CoV-2 представлены на рисунке 13.3.
Устойчивость:
сохраняет жизнеспособность
при комнатной tº на пластиковых поверхностях – до 72 часов;
в фекалиях – более 2 суток, при повышении pH последних (например, при диарее) − до 4 суток;
при -70°С в высушенном виде – в течение нескольких лет.
Чувствительность:
инактивируется
при нагревании до 56°С – через 15–30 минут;
дезинфектантами.
А |
Б |
Рис. 13.3. Коронавирус SARS-CoV-2
культивирование на клеточной линии Vero E6 и атомарная модель вируса
А – фотография клеток, зараженных вирусами (оранжевые), при электронно-сканирующей микроскопии; Б – атомарная модель коронавируса
(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)
Эпидемиология
Коронавирусная инфекция – зооантропоноз или антропоноз. Пути передачи: от животных к человеку – пищевой (при употреблении морепродуктов) или через укус (летучие мыши); от человека к человеку – воздушно-капельный, контактный, фекально-оральный. Резервуар в природных очагах – некоторые виды летучих мышей, от которых вирус передался пальмовым циветтам, виверрам (Paguma larvata), енотовидным собакам (Nyctereutes procyonoides), а потом – людям. Летальность для человека – около 10%. Альфа- и бета-коронавирусы способны инфицировать млекопитающих, гамма- и дельта-коронавирусы – птиц и млекопитающих. Семь видов коронавирусов заражают людей и вызывают респираторные заболевания.
Патогенез
Проникновение вируса вызывает диффузное повреждение альвеоцитов, повышение проницаемости клеточных мембран и усиленный транспорт жидкости, богатой альбумином и фибрином, в интерстициальную ткань легкого и просвет альвеол с последующим развитием интерстициального и альвеолярного отека.
Клиника
Инкубационный период – 4 дня, повышение температуры тела, кашель (сухой или с небольшим количеством мокроты), одышка, утомляемость, гипоксемия, ощущение заложенности в грудной клетке. Могут отмечаться боль в горле, насморк, снижение обоняния и вкуса, признаки конъюнктивита.
Специфическая диагностика
Необходимо дифференцировать новую коронавирусную инфекцию с гриппом, острыми респираторными вирусными инфекциями, вызываемыми риновирусами, аденовирусами, РС-вирусом, метапневмовирусами человека, MERS-CoV, вирусом парагриппа, вирусными гастроэнтеритами, бактериальными возбудителями респираторных инфекций, туберкулезом.
Материал для исследования: биологический материал из носоглотки и/или ротоглотки (мазок). Дополнительным материалом исследования могут быть промывные воды бронхов (бронхоальвеолярный лаваж), эндо- или трахеальный, назофарингеальный аспират, мокрота, биопсийный или аутопсийный материал легких, сыворотка, цельная кровь, моча, фекалии.
Методы специфической диагностики коронавирусной инфекции – экспресс-метод, серологический (основной).
Экспресс-метод
Для экспресс-диагностики коронавирусной инфекции используют реакцию иммунофлюоресценции для обнаружения Аг в клетках эпителия верхних дыхательных путей и полимеразную цепную реакцию для обнаружения РНК вируса.
Серологический
Исследование парных сывороток в РТГА. РСК, РН.
Иммунитет
После перенесенной коронавирусной инфекции развивается непродолжительный гуморальный иммунитет (возможна реинфекция).
Принципы профилактики
Специфическая (вакцины от COVID-19, применяемые у взрослых старше 18 лет):
Гам-КОВИД-Вак, торговая марка «Спутник V», разработанная ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России и ФГБУ «48-й ЦНИИ» Минобороны России. Препарат состоит из двух компонентов: рекомбинантный аденовирусный вектор на основе аденовируса человека 26 серотипа, несущий ген S-белка SARS-CoV-2 (компонент I) и рекомбинантный аденовирусный вектор на основе аденовируса человека 5 серотипа, несущий ген S-белка SARS-CoV-2 (компонент II).
«ЭпиВакКорона», разработанная ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора; Вакцина на основе пептидных антигенов («ЭпиВакКорона» и ЭпиВакКоронаН» применяется в возрасте 18–60 лет) представляет собой химически синтезированные пептидные антигены S‑белка вируса SARS-CoV-2, конъюгированные с белком-носителем и адсорбированные на алюминий-содержащем адъюванте (алюминия гидроксиде).
Инактивированная вакцина («КовиВак») разработана в Центре им. М. Чумакова. Представляет собой очищенную концентрированную суспензию коронавируса SARS-CoV-2 (штамм «AYDAR-1», полученный путем репродукции в перевиваемой культуре клеток Vero, и инактивированный бета-пропиолактоном). Вакцину «КовиВак» применяют для профилактики COVID-19 у взрослых в возрасте 18–60 лет.
Вакцина «Спутник Лайт» представляет собой рекомбинантный аденовирусный вектор на основе аденовируса человека 26 серотипа, несущий ген S-белка SARS-CoV-2.
Неспецифическая
Изоляция больных, карантин в детских учреждениях, ношение масок, тщательные мытье рук.
Принципы лечения
Иммунотерапия
В лечении коронавирусной инфекции используют иммунотерапию с применением плазмы от уже перенесших заболевание лиц.
Этиотропная терапия
Без поражения нижних дыхытельных путей
Интерферон-альфа по 3000 МЕ 5–6 р/д интраназально 5 дней.
С поражением нижних дыхательных путей
Интерферон-альфа по 3000 МЕ 5–6 р/д интраназально 5 дней.
Рибавирин 2000 мг – нагрузочная доза; 4 дня по 1200 мг каждые 8 часов; 4–6 дней по 600 мг каждые 8 часов.
Лопинавир/ритонавир (калетра) (400 мг лопинавирина/100 мг ритонавира) вводят в виде суспензии (5 мл) каждые 12 часа в течение 14 дней через назогастральный зонд.
Интерферон IFN-β1b назначают в дозе 0,25 мг/мл (8 мл МЕ) п/к в течение 14 дней (всего 7 инъекций).
Раннее (12–48 часов) назначение антивирусных препаратов (Арбидол или Ингавирин) плюс ИФН (гриппферон или виферон); индукторы ИФН.
Патогенетическая терапия
Применение муколитических и бронхолитические препаратов.
5–10% пациентов нуждаются в лечении в палате интенсивной терапии.
Симптоматическая терапия
Нестероидные противовоспалительные препараты.
Комбинированные препараты (состав: парацетамол, агонисты α1‑адренорецепторов – псевдоэфедрин, фенилпропаноламин или фенилэфрин, хлорфенирамин, аскорбиновая кислота).