Вирусологический метод диагностики вич инфекции

Важным звеном в решении проблемы ВИЧ-инфекции является ранняя диагностика заболевания. Своевременная диагностика инфекции, несомненно, требует комплексного подхода, предполагающего использование методов эпидемиологического анализа, клинических критериев и лабораторных тестов.

Современная специфическая диагностика ВИЧ-инфекции основывается на методах выявления противовирусных Ат, вирусных Аг и генного материала.

Материал для исследования – кровь.

Для специфической диагностики ВИЧ применяют методы: экспресс-метод, молекулярно-генетический, вирусологический, серологический.

Экспресс-метод

Основным при проведении массового скринингового обследования населения является иммуноферментный анализ. В соответствии с рекомендациями ВОЗ, применяемые в настоящее время иммуноферментные тест системы должны обладать высокой чувствительностью (>99%) и специфичностью (>95%). Несмотря на высокие показатели достоверности получаемых результатов, тем не менее, следует учитывать, что при выполнении ИФА возможны как ложноотрицательные, так и ложноположительные ответы. Получение отрицательного ответа у больного ВИЧ-инфекцией, как правило, обусловлено его обследованием либо на ранних этапах заболевания (первые недели или месяцы), когда антитела в сыворотке крови еще не детектируются, либо в терминальную стадию болезни, когда организм уже не в состоянии синтезировать противовирусные антитела из-за резкого истощения иммунной системы. Ложноположительные реакции встречаются в 0,02–0,5% случаев и возможны у больных с хроническими заболеваниями аутоиммунного генеза, злокачественными новообразованиями, у беременных, у лиц после введения препаратов иммуноглобулина, вакцинации. Причинами ложноположительных реакций может быть наличие у пациентов антител к ревматоидному фактору, молекулам главного комплекса гистосовместимости, вирусу Эпштейна‑Барр.

При ургентных состояниях для исследований цельной и капиллярной крови применяют экспресс-тесты последнего поколения (латекс-агглютинация, ИФА на полимерных мембранах (тест-полоски), иммунологический фильтрационный анализ, иммунохроматография).

Молекулярно-генетический

Для выявления в биологических жидкостях организма человека нуклеиновых кислот ВИЧ (РНК и ДНК) предпочтение отдается ПЦР, ОТ-ПЦР и другим молекулярным тестам (ПЦР в реальном времени, «разветвления ДНК», лигазной цепной реакции). Внедрение метода полимеразной цепной реакции существенно обогатило лабораторную диагностику ВИЧ-инфекции. Полимеразная цепная реакция обладает высокой чувствительностью и позволяет выявлять сотни, десятки и даже единичные копии вириона в 1 мл биологической жидкости. Использование ОТ-ПЦР имеет важное значение в диагностике ВИЧ-инфекции в «серонегативные» периоды, когда ИФА может показать отсутствие антител. Необходимо отметить, что в качестве образцов для исследования методом ОТ-ПЦР могут быть использованы как свежеполученные биологические жидкости и ткани, так и замороженные, высушенные или фиксированные материалы.

ПЦР используют для диагностики инфицированности новорожденного от ВИЧ-инфицированной матери (исследуют образцы крови ребенка и матери).

Кроме того, использование количественной ПЦР для определения концентрации вируса в плазме крови («вирусной нагрузки»), наряду с установлением уровня CD4+ лимфоцитов, является крайне важным и обязательным при регулярном обследовании больного с целью выявления признаков прогрессирования заболевания и своевременного назначения антиретровирусной терапии, а также, для оценки ее эффективности.

Молекулярно-генетический метод позволяет анализировать наличие мутаций в геноме и определять резистентность вируса к антиретровирусным препаратам.

Вирусологический

Следует отметить, что метод выделения ВИЧ в КК в связи с дороговизной, трудоемкостью и длительностью выполнения в практическом здравоохранении не используется (применяется только в научных исследованиях).

Наибольшее применение в настоящее время получили методы детекции специфических к ВИЧ антител, а также ДНК и РНК вируса.

Серологический

Из методов, предназначенных для выявления противовирусных антител, к наиболее практически важным относят ИФА, иммуноблоттинг, иммунохроматографический тест.

Иммуноблоттинг используют в качестве экспертного метода после выполнения иммуноферментного анализа для подтверждения инфицированности ВИЧ. Данный метод позволяет выявлять специфические антитела к отдельным белкам вируса.

Использование иммунохроматографического теста для выявления антител к ВИЧ имеет ряд преимуществ, которые очень важны в клинической практике. Так как вышеуказанный тест относится к методам экспресс-диагностики, его использование позволяет получать результат уже спустя 20–30 минут после забора крови у пациента. Кроме того, учет реакции проводят визуально, что не требует специального дорогостоящего лабораторного оборудования и специально обученного лабораторного персонала. Иммунохроматографический тест незаменим в качестве предварительной диагностики ВИЧ-инфекции при необходимости получения быстрого и достаточно качественного результата исследования. В частности, данный экспресс-тест используется в акушерской практике при обследовании поступающих в родильное отделение беременных с неизвестным ВИЧ-статусом.

Принципы профилактики

Неспецифическая

Все выявленные ВИЧ-инфицированные лица подлежат диспансерному наблюдению, основными принципами которого являются добровольность, конфиденциальность и доступность медицинской помощи. Диспансеризация предполагает пожизненное наблюдение за больными и означает проведение комплекса лечебно-профилактических, социально-психологических и гигиенических мероприятий. Лечебно‑профилактические мероприятия включают динамичное клиническое наблюдение больных и проведение им с определенной частотой клинико-лабораторных и других дополнительных исследований, ключевую роль среди которых имеет определение уровня CD4+ лимфоцитов и вирусной нагрузки.

Специфическая

Основной целью диспансерного наблюдения является раннее выявление признаков прогрессирования заболевания для своевременного назначения антиретровирусной этиотропной терапии, а также профилактика и лечение оппортунистических инфекций, других патологических процессов у ВИЧ‑инфицированного больного.

Принципы лечения

Этиотропная анти-ВИЧ терапия предполагает использование антиретровирусных препаратов. К настоящему времени в клинической практике используют пять классов лекарственных средств, механизмы действия которых направлены на различные этапы жизненного цикла ВИЧ. Ингибиторы проникновения (класс IV) снижают способность связывания вириона с мембраной клетки-мишени и внедрения его в цитоплазму. Эффекты нуклеозидных (класс I) и ненуклеозидных (класс II) ингибиторов обратной транскриптазы направлены на угнетение образования из РНК провирусной ДНК. Ингибиторы интегразы (класс V) предотвращают встраивание ДНК вируса в геном клетки. Ингибиторы протеазы (класс III) нарушают трансляцию и рассечение вирусных полипептидов на функционирующие белки.

Показаниями к назначению антиретровирусных препаратов является лечение больных ВИЧ инфекцией, профилактика вертикальной передачи ВИЧ, профилактика парентерального и полового заражения ВИЧ.