Культивирование вирусов в курином эмбрионе
Куриные эмбрионы для некоторых вирусов (гриппа, кори, герпеса) являются идеальными моделями для культивирования. Замкнутая полость эмбриона препятствует проникновению микроорганизмов извне или развитию спонтанных инфекций.
Заражение производят одним из четырех методов:
на хорионаллантоисную оболочку (ХАО) (вирусы натуральной оспы, герпеса);
в амниотическую полость (вирусы кори, паротита, гриппа);
в аллантоисную полость (вирусы гриппа);
в желточный мешок (вирус бешенства).
Индикацию вируса проводят при помощи РГА, исследования специфических поражений хорионаллантоисной оболочки (особенно у герпесвирусов), также на наличие вируса указывает гибель эмбрионов.
Идентификацию проводят при помощи РТГА (для вирусов с гемагглютинирующей активностью, например, гриппа), РН, РИФ и РСК.
Культивирование вирусов на лабораторных животных
Лабораторных животных можно использовать для культивирования вирусов с учетом их естественной восприимчивости и тропизма вируса. Наиболее часто заражают мышей, кроликов, обезьян и новорожденных мышат (мышат-сосунков).
Наиболее часто этот метод используют для культивирования вирусов гриппа, Коксаки, гепатита В, герпеса, бешенства, некоторых арбовирусов и аренавирусов. Многие вирусы ввиду невосприимчивости животных культивировать этим способом невозможно. В настоящее время применение метода вследствие дороговизны, сложности и гуманных соображений в основном ограничено исследовательскими (а не диагностическими) целями.
В зависимости от того, к каким тканям у вируса имеется тропизм, заражение производят следующими способами:
подкожно (оспа) и внутримышечно;
интраназально (грипп);
интраперитонеально;
интрацеребрально (бешенство) и др. способами.
Для индикации вируса оценивают состояние животного, клиническую картину развившейся болезни, патоморфологические изменения тканей органов. Для идентификации используют экскреты или секционный материал животного.
Идентификацию проводят при помощи РТГА (для вирусов с гемагглютинирующей активностью, например, гриппа), РН, РИФ и РСК.
Серологический
Серологические методы при диагностике вирусных инфекций применяют широко. Важно знать, что при исследовании антител почти во всех случаях исследуют парные сыворотки: первый образец забирают немедленно, а второй – через 10–14 дней. Диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в четыре раза. Исследование именно парных сывороток позволяет убедиться, что обнаруженные антитела имеют отношение к острой инфеции в настоящее время, а не к перенесенной в прошлом.
В связи с этим определение антител зачастую имеет ретроспективный характер, поскольку через две недели, которые занимает проведение исследования, его клиническое значение обычно минимальное (зачастую инфекция к этому времени уже разрешается). Однако при исследовании некоторых антител (ВИЧ, вирусы гепатитов) парные сыворотки применять необязательно.
Вирусоскопический
Приготовление мазка и микроскопия иммерсионнной системой микроскопа (рис. 11.5).
1 2 3 4
Рис. 11.5. Микроскопия иммерсионным объективом окрашенных препаратов
1 – элементарные тельца Пашена (вирус натуральной оспы); 2 – включения Гварниери (герпесвирусы); 3 – тельца Гварниери (герпесвирусы); 4 – включения Бабеша-Негри (вирус бешенства)
При микроскопии обнаруживают образовавшиеся в клетках вирусные включения, которые представляют собой: вирусные «фабрики» или скопления вирусных частиц:
цитоплазматические: тельца Негри (бешенство), тельца Гварниера и Пашена (натуральная оспа);
внутриядерные: тельца Каудри (простой герпес и ветряная оспа), Липшютца (ветряная оспа), «совиные глаза» (цитомегаловирусная инфекция.