Микробиологическая диагностика анаэробной инфекции раны

Микроскопический

Готовят мазки-отпечатки, окрашивают по Граму и Бурри-Гинсу (для выявления капсул). Используют также РИФ. Мазок-отпечаток обрабатывают иммунофлуюоресцентной видоспецифической сывороткой и изучают в люминесцентном микроскопе. Вокруг микробных клеток обнаруживают желто-зеленое свечение.

Бактериологический

Строгие анаэробы, имеют овальные или сферические споры: центральные у Cl. perfringens, субтерминальные у Cl. novyi и Cl. septicum или терминальные у Cl. histolyticum; бактерии имеют булавовидную (веретенообразную) форму. Оптимум температуры роста Cl. perfringens – 43–45°С, растет быстро. В среде Китта–Тароцци через 1–3 часа дает помутнение и газообразование (другие виды – через 12–18 часов). Молоко створаживает за 3–5 часа (рис. 8.4), отделяется сгусток – «штормовая реакция»; разжижает желатин.

А

Б

Рис. 8.4. Рост C. рerfringens

А – в среде Китта-Тароцци (помутнение, газообразование);

Б – «Штормовая реакция» в среде с молоком (губчатый сгусток)

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

В столбике сахарного агара – S-колонии (чечевицеобразные), R‑колонии (пушинки с плотным центром). На кровяном агаре все, кроме Cl. histolyticum, дают колонии (нередко с отростками), окруженные гемолизом. На столбике железосульфитной среды Вильсона–Блера – почернение среды с множественными разрывами.

Cl. histolyticum имеет сильные протеолитические ферменты (протеолиз мягких тканей с обнажением костей). У Cl. perfringens выделяют 6 сероваров по антигенным свойствам токсина (А, В, С, D, E, F), все они образуют альфа-токсин (лецитиназу-С) и другие токсины; типы А и С вызывают также пищевую токсикоинфекцию («болезнь закусочных» – энтеротоксин), некротический энтерит (бета-токсин). У Cl. novyi в патологии человека значим лишь тип А. Cl. difficile может вызывать псевдомембранозный колит (после нерациональной антибиотикотерапии).

Из материала готовят гомогенат, делят его на 2 части – первую прогревают на водяной бане для уничтожения вегетативных клеток. Жидкость из отека и кровь центрифугируют, для посева берут осадок. Материал высевают на среды: КА Цейсслера, желточный агар, в глубину столбика ВСА, на бензидиновый агар, среду Виллиса-Хоббса, в среду Китта-Тароцци (в 5 пробирок, 4 из которых перед посевом кипятят 20 минут, затем быстро охлаждают), на МПА и сахарный агар (инкубируют в анаэростате). Посевы в жидких средах выращивают в обычном термостате 15 суток.

На КА Цейсслера Cl. perfringens образуют плоские колонии с возвышением в центре и зоной полного гемолиза, склонны к ползучему росту; на желточном агаре – вокруг колоний образуется кольцо белого цвета (лецитиназа-С). Колонии микроскопируют и при наличии грамположительных полиморфных грубых палочек пересевают в среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры. Наблюдают помутнение среды и пузырьки газа. Микроскопируют и пересевают на плотные среды для получения отдельных колоний и выделения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим и тинкториальным свойствам, подвижности (препарат «висячая капля»), биохимическим свойствам (посев в среды Гисса, с молоком, желатином, свернутой сывороткой, ставят пробу на каталазу), аэротолерантности.

Биологический

Вид возбудителя определяют с помощью биопробы на мышах. Центрифугат культуры смешивают с антитоксическими специфическими сыворотками C. perfringens, C. septicum, C. sordellii, C. novyi и вводят двум мышам по 0,5 мл в/в. Через 3 суток гомологичная сыворотка нейтрализует токсин и не вызывает гибель животных.

Определение по способности продуцировать токсин: на предметное стекло с микробами наносят каплю акридинового оранжевого, накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе. Если культура токсигенная – палочки зеленого цвета. Палочки красного цвета или зеленого с красными участками – слабая токсигенность или ее отсутствие.

Принципы лечения

Для предупреждения распространения инфекционного процесса на здоровые ткани выполняют лампасное иссечение раны, удаление пораженных тканей, аэрацию.

С целью нейтрализации токсина вводят поливалентную антитоксическую противогангренозную сыворотку (50 тыс. МЕ) по Безредко, после идентификации клостридий – моновалентную.

Применяют антимикробную терапию, направленную на элиминацию микороорганизма, и гипербарическую оксигенацию для насыщения крови пациента кислородом.

Принципы профилактики

Пентаанатоксин (ботулинические анатоксины типов А, В, Е, анатоксины Сl. perfringens A и Cl. novyi), секстаанатоксин (те же анатоксины + АС-анатоксин).

Для экстренной профилактики при ранении – поливалентная антитоксическая сыворотка (в/м по 10 тыс. международных единиц (МЕ)).