Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Бактериологический

Этапы выполнения

1. посев исследуемого материала (испражнения – при кишечных формах, материал из соответствующего инфекционного очага – при парентеральных формах) на среду Эндо (образуются колонии темно-малинового цвета с металлическим блеском) (рис. 1.3);

2. термостатирование 24 часа при температуре 37°C;

3. реакция агглютинации (РА) на стекле с поливалентной ОК‑сывороткой (из 10 отобранных колоний);

4. пересев «+» колоний в РА на среду Ресселя;

5. термостатирование 24 часа при температуре 37°C;

6. приготовление мазка, окрашивание по Граму, микроскопия (проверка микроорганизмов на чистоту культуры);

7. посев в «пестрый» ряд Гисса (биохимические свойства) и постановка линейной реакции агглютинации с живой и гретой культурой микроорганизмов;

8. РА на стекле с поливалентной ОК‑сывороткой, затем с каждой из сывороток в отдельности (антигенные (Аг) свойства);

9. учет биохимических свойств культуры и результата линейной реакции агглютинации с живой (агглютинат крупнохлопчатый, компактный, видный невооруженным глазом) и гретой (мелкозернистый агглютинат, который учитывают в агглютиноскопе или при помощи сильной лупы).

Рис. 1.3. Рост кишечной палочки

на дифференциально-диагностической среде Эндо

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

Серологический

Для выявления О-антител к ЭПКП в исследуемой сыворотке может быть использована реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). В качестве антигена в этой реакции используют эритроциты, сенсибилизированные 48-часовой культурой E. сoli, кипяченой на протяжении 2 часов. Реакция позволяет отличить больных от бактерионосителей. У первых обычно обнаруживаются антитела, у вторых – нет.

Биологический

Определение токсигенности E. coli проводят на линии клеток почек мышей. Культуры клеток (КК) суспендируют в ростовой среде до концентрации 2,5×10⁵ кл/мл. Отбирают по 0,2 мл и разливают в лунки пластины для тканевых культур. Далее инкубируют в течение 3 дней при температуре 37°С. Через 72 часа КК промывают свежим раствором ростовой среды.

В лунки добавляют по 0,025 мл нативного и обработанного кипячением бактериального фильтрата. Термостатируют 24 часа при температуре 37°С. Клетки фиксируют метанолом, окрашивают по Романовскому-Гимзе, промывают, сушат и исследуют методом световой микроскопии. Положительный результат – округление свыше 90% клеток в лунках с нативным фильтратом микроорганизмов и отсутствие изменений КК в лунках с бактериальным фильтратом, обработанным кипячением.

Молекулярно-генетический

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Принципы лечения

• Антибиотики (левомицетин и др.).

• Бактериофаги.

• Молочнокислые продукты, пробиотики.

• Физиологические растворы с глюкозой.

Принципы профилактики

Специфическая профилактика не разработана.

Неспецифическая профилактика – соблюдение санитарно-гигиенических правил и санитарный контроль источников водоснабжения, пищевых предприятий, продуктов питания.