Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций
Бактериологический
Этапы выполнения
I. Индикация
Посев на питательные среды КА и желточно-солевой агар (ЖСА).
Инкубация в термостате в течение 18–24 часов при 37ºС.
Изучение роста колоний на МПА – непрозрачные колонии средней величины 1–3 мм, на КА – колонии S. аureus окружены зоной гемолиза и часто имеют золотистый пигмент, на ЖСА – колонии S. аureus окружены радужным венчиком помутнения среды вследствие лецитиназной активности. Лецитиназа (лецитовителлаза) – фермент из группы липаз. Этот фермент разрушает лецитин, содержащийся в клеточных мембранах. Благодаря этому ферменту бактерии способны персистировать в секрете сальных желез кожи, разрушать жировые соединения в устьях волосяных фолликулов, подавлять фагоцитоз.
Приготовление мазка, окраска по Граму из изолированной колонии.
Пересев оставшейся части колонии на скошенный МПА для накопления культуры микрооорганизмов. Термостатирование.
Через 18–24 часа приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия.
II. Идентификация
Чистую культуру изучают по комплексу биологических свойств: по способности продуцировать плазмокоагулазу стафилококки классифицируют на коагулазоположительные (золотистый стафилококк – S. aureus) и коагулазоотрицательные стафилококки (S. epidermidis и S. saprophyticus). Внутри вида по чувствительности к бактериофагам S. aureus подразделяют на фагогруппы и фаговары.
Для идентификации S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus применяют следующие реакции:
Реакция плазмокоагуляции. В пробирку наливают 0,5 мл разведенной 1:5 кроличьей плазмы, петлей вносят в нее суточную агаровую культуру стафилококка. Пробирку помещают в термостат. Появление желеобразного сгустка свидетельствует о наличии фермента плазмокоагулазы у изучаемого штамма. Это характерно для S. aureus. Через 2–3 часа образуются высоковирулентные штаммы. Далее по истечении времени вирулентность снижается.
Определение ДНК-азы. На поверхность МПА, содержащего ДНК, высевают штрихом суточную агаровую культуру стафилококка и помещают в термостат на 24 часа. После инкубации поверхность агара заливают 1 N раствором соляной кислоты. Если стафилококки продуцируют ДНК-азу, то вокруг колоний остается зона просветления.
Определение фосфатазы. На чашку с фенолфталеиновым агаром высевают выделенную культуру стафилококка. Колонии, выросшие через 18–24 часа, обрабатывают парами аммиака. Появление розовой окраски колоний свидетельствует о положительной реакции (табл. 6.2).
Таблица 6.2
Дифференциальные признаки основных (патогенных для человека) видов стафилококков
(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)
Признак |
Вид |
||
S. aureus |
S. epidermidis |
S. saprophiticus |
|
Плазмокоагулаза |
+ |
– |
– |
ДНКаза |
+ /– |
– |
– |
Гемолиз |
+ |
– |
– |
Золотистый пигмент |
+ /– |
– |
– |
Сбраживание маннита |
+ |
– |
– |
Гиалуронидаза |
+ |
? |
? |
Фосфатаза |
+ |
+ |
– |
Окисление маннита трегалозы |
|
||
+ |
– |
+ |
|
+ |
– |
+ |
|
Устойчивость к новобиоцину (1,6 мкг/мл) |
– |
– |
+ |
Примечание: позитивный признак (+), негативный признак (–), непостоянный признак (+ –), неизвестно (?)
Токсигенность выделенных культур стафилококков определяют в опыте in vitro с помощью реакции диффузной преципитации в геле.
Для установления источника инфекции определяют фаговар патогенных стафилококков.
При необходимости проводят определение чувствительности стафилококков к антибиотикам и фаготипирование культур. Чувствительность к антибиотикам проверяют стандартным диско-диффузионным методом (рис. 6.6).
А |
Б |
Рис. 6.6. Методы установления источника стафилококковой инфекции
А – Определение чувствительности стафилококков к антибиотикам
диско-диффузионным методом; Б – фаготипирование
(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)
При проведении дерматонекротической пробы на кроликах у них происходит некроз кожи.
Бактериоскопический
При микроскопии мазков, окрашенных по Граму, обнаруживают грамположительные кокки, расположенные поодиночно, парами, короткими цепочками и ввиде скоплений, напоминающих гроздья винограда.
Биологический
При биологическом методе исследования выполняют в/в введение фильтрата бульонной культуры Staphylococcus кошкам (2–3 мг/кг веса). Энтеротоксины стафилококков у кошек вызывают рвоту и понос.
Принципы лечения
Поверхностные стафилококковые инфекции (пиодермии) чаще всего лечат с помощью препаратов для местного применения: бриллиантового зеленого, фукорцина, калия перманганата и других средств. Для лечения глубоких стафилококковых инфекций используют антибиотики. При необходимости предварительно определяют чувствительность выделенных культур к антибиотикам диско-диффузионным методом. Также, применяют стафилококковый бактериофаг антистафилококковый иммуноглобулин и другие препараты.
Принципы профилактики
Специфическая профилактика: средства специфической профилактики стафилококковых инфекций – стафилококковый анатоксин, применяют аутовакцины, стафилококковую плазму.
Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима, применении современных дезинфицирующих и антисептических средств, выявлении и санации бактерионосителей (особенно среди персонала хирургических стационаров и родильных домов для профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи). Для санации носителей резистентных штаммов S. aureus используют интраназальное применение антибиотиков.