Микробиологическая диагностика туляремии
Засеянные питательные среды инкубируют в термостате до 10 суток. Туляремийные бактерии растут в виде налета с неровной поверхностью или образуют мелкие гладкие, S-формы, колонии, имеющие беловатый цвет с голубым оттенком, похожие на капельки росы. После выделения чистой культуры микробов проводят их идентификацию по морфологическим, культуральным, антигенным свойствам. В мазках, приготовленных из колоний, обнаруживают мелкие полиморфные грамотрицательные бактерии. Антигенные свойства определяют в реакции агглютинации с туляремийной агглютинирующей сывороткой.
Возбудитель хорошо культивируется в желточном мешке 12‑суточного куриного эмбриона, в котором его легко обнаруживают с помощью прямой РИФ.
Возбудитель туляремии – аэроб; не растет на обычных средах, хорошо развивается при температуре 37°С в средах богатых витаминами: желточная среда; среды, содержащие кровь, цистеин, мозговую ткань, печень, куриный эмбрион (рис. 4.8).
Рис. 4.8. Характер роста возбудителя туляремии на плотной питательной среде
(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)
Ферментативно малоактивны: расщепляют с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, маннозу. Некоторые штаммы ферментируют глицерин и обладают цитруллинуреидазой. Биохимические свойства нестабильны. Это зависит от питательных сред и способности туляремийного микроба ферментировать белки.
Биологический и бактериологический методы проводят только в специализированных лабораториях.
Серологический
Со 2-й недели заболевания ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с туляремийным диагностикумом. Диагностическим считается титр 1:100. При постановке реакции агглютинации с парными сыворотками увеличение титра антител в четыре и более раз позволяет поставить диагноз. Специфические антитела в сыворотке крови больного определяют и в реакции пассивной гемагглютинации, которая может быть положительной уже в конце первой недели заболевания. Для ее постановки используют эритроцитарный туляремийный диагностикум.
Аллергологический
Ставят кожно-аллергическую пробу с тулярином. В случае внутрикожной постановки она бывает положительной с 3–5-го, а при накожной – с 6–8-го дня болезни. Результаты пробы учитывают через 24–48 часов. Наличие выраженного инфильтрата и гиперемии диаметром 0,5 см и более свидетельствует о положительной реакции.
Принципы профилактики
Мероприятия: проведение общих противоэпидемических мероприятий в очагах; борьба с грызунами-переносчиками и иммунизация людей по эпидемическим показаниям. Специфическую профилактику проводят живой вакциной Гайского-Эльберта, а также инактивированной, приготовленной из протективного антигена. Вакцину выпускают в сухом виде. Применяют накожно, однократно. Иммунитет 3–6 лет.
Принципы лечения
Применяют для лечения туляремии в основном аминогликозиды (гентамицин, сизомицин), левомицетин, тетрациклин и др.
Задания для самоконтроля
1. В Одессу приплыл корабль, везший груз из Эквадора. В пути случилось несчастье: заболел матрос, у которого внезапно появились сотрясающий озноб, температура до 40°С, сильная головная боль, головокружение, лицо стало бледным с синюшным оттенком и выражением страдания. При подходе в порт больной умер.
A. Можно ли до выяснения причины смерти матроса ставить корабль на разгрузку?
B. Какие методы лабораторной диагностики можно использовать для уточнения причины смерти матроса?
C. Какие необходимо провести мероприятия на судне, если будет диагностировано особо опасное заболевание – чума?
2. Группа интернов должна поехать в Африку (Уганду). Однако известно, что в данной стране неблагополучная эпидемическая обстановка по чуме (в среднем ежегодно заболевают несколько сот человек).
A. Какие необходимо принять меры для предупреждения заболевания среди командируемых лиц?
B. Как называется препарат, используемый для проведения специфической профилактики чумы? Как вводить?
C. Необходимо ли повторное введение препарата, если специалисты будут находиться там по контракту в течение 2 лет?
3. При микроскопии препарата, приготовленного из мокроты больного Н., у которого были кашель, боли в груди, очень высокая лихорадка (температура 40°С), повышенное отделение жидкой, пенистой, с примесью крови мокроты, обнаружены мелкие с нежной капсулой грамотрицательные палочки, концы которых окрашены интенсивно. В посеве мокроты на МПА были обнаружены на следующий день колонии R-типа, напоминающие «смятый кружевной платочек».
A. Можно ли на основании полученных данных поставить предварительный диагноз «чума»?
B. Следует ли применять в этом случае срочные противоэпидемические мероприятия, если в это же время в данной местности началась эпидемия чумы среди грызунов и их массовая гибель?
C. Какие этапы исследования необходимо проделать для определения видовой принадлежности выделенных бактерий?
D.Как можно выделить культуру иерсиний чумы, если материал загрязнен посторонней микрофлорой?
4. Через 3 недели после приезда в неблагополучный по туляремии очаг заболел охотник Н. В течение 5 дней – озноб, повышенная температура (38°С), повышенная потливость, головная боль, разбитость, боли в мышцах. При обследовании обнаружены увеличенные шейные лимфоузлы. Предполагая, что у больного туляремия, и зная, что ранним методом диагностики этого заболевания является аллергическая проба, врач поставил внутрикожную пробу с тулярином. Через 48 часов в месте введения аллергена появились гиперемия и отек диаметром 1 см.
Произведите учет этой пробы.
Что собой представляет тулярин?
Можно ли, используя данные, изложенные в условии задачи и полученные при постановке аллергической пробы, поставить диагноз «туляремия»? Если нет, то почему?
Что нужно предпринять для выяснения этиологии заболевания
5. Больной К. поступил с жалобами на высокую температуру, головную боль, боли в мышцах. При осмотре врачом у больного отмечались резкий отек век, гиперемия конъюнктив, бубон в околоушной области слева. Врач поставил клинический диагноз (глазо-бубонная форма туляремии?) и направил отделяемое из конъюнктивы глаза в лабораторию особоопасных инфекций. В лаборатории из исследуемого материала приготовили мазок, далее посеяли на свернутую желточную среду и ввели подкожно белой мыши. Животное погибло на 5-й день после введения материала, на питательной среде к этому времени роста не было, а в мазках обнаружены мелкие, грамотрицательные колонии.
Являются ли полученные результаты исследования подтверждением тому, что заболевание вызвано Francisella tularensis?
Какими последующими исследованиями можно доказать, что лабораторное животное погибло от туляремии?