Микробиологическая диагностика чумы

Микробиологическую диагностику чумы проводят с соблюдением строгого режима в лабораториях особо опасных инфекций высокоподготовленные специалисты. Форма одежды – противочумной костюм, который предусматривает защиту всех открытых участков тела, поскольку возбудитель обладает инвазивными свойствами и способен проникать через неповрежденные кожные покровы и слизистые оболочки.

Экспресс-метод

Для ускоренной диагностики чумы применяют ПЦР, ДНК-зонды, РИФ (прямую), а также ИФА.

Микроскопический

Из исследуемого материала готовят мазки и окрашивают по Граму и синькой Леффлера. Yersinia pestis в мазках похожа на короткую овоидную палочку и окрашивается биполярно. Возбудитель чумы окрашивается по Граму отрицательно. Наиболее эффективным является выявление возбудителя с помощью специфических люминесцентных сывороток в РИФ. После обработки такими сыворотками мазков из исследуемого материала при просмотре препаратов с помощью люминесцентного микроскопа обнаруживают характерные по морфологическим признакам палочки, которые с обеих сторон на концах светятся изумрудно-зеленым цветом.

Бактериологический

Исследуемый материал высевают на МПА (рис. 4.2) с добавлением стимуляторов роста (сульфит натрия, кровь или лизат культуры сарцин) и на МПБ. Инкубируют в термостате при температуре 25–28°С. Возбудитель – факультативный аэроб, хорошо растет на обычных питательных средах, имеющих рH 7,0–7,2, при температуре 28–30°С и 5–37°С. При выращивании на агаре через 6–10 часов образуются колонии в виде рыхлых мелких глыбок, похожих на битое стекло. На МПБ растет в виде хлопьев, взвешенных, как правило, в прозрачной жидкости. При длительном выращивании на МПБ образуются «чумные сталактиты», спускающиеся вниз с поверхности пленки.

Рис. 4.2. Характер роста возбудителя чумы на МПА

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

На МПА через 24 часа вырастают колонии R-формы в виде «кружевных платков» – компактный выпуклый центр окружен светлой кружевной зоной (рис. 4.3).

Рис. 4.3. Колонии возбудителя чумы на МПА в виде «кружевных платочков»

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

В бульоне рост проявляется образованием пленки, от которой вниз отходят нитевидные образования, напоминающие сталактиты. Бульон остается прозрачным (рис. 4.4).

Рис. 4.4. Характер роста возбудителя чумы на МПБ

рост с образованием нежной пленки с отростками

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

Материал из подозрительных колоний пересевают на скошенный агар для получения и накопления чистой культуры микробов. Из выросшего на скошенном агаре микробного налета готовят мазок, окрашивают по Граму, изучают под микроскопом и устанавливают чистоту полученной культуры.

Далее проводят ее идентификацию. Принадлежность к Y. pestis устанавливают на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных свойств, пробы с чумным бактериофагом, биопробы, подвижности (табл. 4.1).

Серологический

Антитела к возбудителю чумы в сыворотке крови больных определяют с помощью реакции пассивной гемагглютинации, непрямой РИФ (рис. 4.5) и ИФА.

Рис. 4.5. Реакция иммунофлюоресценции с возбудителем чумы

(источник заимствования – ресурсы сети Интернет)

Биологический

Исследуемый материал вводят морской свинке подкожно, внутрибрюшинно или наносят наружно, втирая его в выбритую скарифицированную кожу живота.

При наличии в материале возбудителя чумы у животных развивается острый инфекционный процесс. При внутрибрюшинном заражении морские свинки погибают через 2–3 суток, а при наружном – через 5–7 суток. Из трупного материала погибших животных готовят мазки – отпечатки (из лимфатических узлов, селезенки, печени, легких), а также готовят мазки крови, делают посев на питательные среды. После забора материала на исследование трупы животных погружают в 5% раствор лизола, а затем сжигают.

Для выявления возбудителей чумы в загнивающем трупном материале, применяют реакцию термопреципитации с чумной преципитирующей сывороткой.

Принципы лечения

Для лечения чумы в основном используют такие антибиотики, как стрептомицин, тетрациклин, мономицин, противочумная антитоксическая сыворотка.

Принципы профилактики

Неспецифическая

Строгий надзор за эндемичными очагами чумы.

Специфическая

Для специфической профилактики рекомендована в эндемических очагах вакцина из штамма EV. Невосприимчивость сохраняется до 1 года.

Таблица 4.1

Дифференциация Y. pestis от Y. pseudotuberculosis и Y.  Enterocolitica источник заимствования – ресурсы сети Интернет

Свойства	Y. pestis	Y. pseudotuberculosis	Y. enterocolitica
Подвижность при 25ºС	–	+	+
Подвижность при 28–37ºС	–	–	–
Ферментация с образованием кислоты рамнозы рафинозы инозита
	–	+	–
	–	+	–
	–	–	+
Образование уреазы	–	–	+
Образование орнитин-декарбоксилазы	–	–	–
Наличие фракции 1	+	–	–
Наличие мышиного токсина	+	–	–
Наличие пестицина 1	+	–	–
Наличие плазмокоагулазы	+	–	–
Фибринолизин	+	–	–
Чувствительность к чумному бактериофагу	+	–	–
Вирулентность	в R-форме	в S-форме	в S-форме