3 курс / Фармакология / Диссертация_Ромодановский_Д_П_Разработка_требований_для_оценки_фармакокинетики

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; N – количество субъектов; М – мужчины; Ж – женщины; L – нижняя граница 90% доверительного интервала; U – верхняя граница 90% доверительного интервала.

Препараты левокарнитина могут быть отнесены к ЛП – АЭС и включены в Печень лекарственных средств аналогов эндогенных соединений (Приложение №5).

При планировании и оценке результатов исследований БЭ левокарнитина следует руководствоваться принципами, описанными в Приложении №2.

Мелатонин.

Мелатонин – является синтетическим аналогом гормона гипофиза, нормализует циркадные ритмы осуществляет адаптогенное действие. При приеме внутрь натощак быстро всасывается (0,75 часа и около 3 часов после приема пищи) имеет короткий период полувыведения 3,5-4 часа. У женщин отмечается 3-4 кратное увеличение Сmax. Эндогенный уровень подвержен циркадным колебаниям68,69.

Ванализ отобрано 7 исследований БЭ мелатонина. Во всех рассмотренных исследованиях был выбран стандартный простой перекрёстный дизайн (2х2х2). Препаратом сравнения во всех исследованиях был референтный препарат Мелаксен®, изучалась доза 6 мг (2 таблетки по 3 мг). Период отмывки в исследованиях варьировал от 2 до 14 дней. В части исследований определяли эндогенный уровень мелатонина, длительность отбора и количество временных точек отбора значительно варьировало в различных исследованиях. Количество субъектов, включённых в статистический анализ параметров ФК, варьировало от 18 до 40 добровольцев (Приложение №1).

Вкачестве биоаналитического метода определения мелатонина во всех исследованиях использовали ВЭЖХ с масс-спектрометрической или тандемной масс-спектрометрической детекцией аналитов, НПКО варьировал в диапазоне 0,001 – 1 нг/мл (Приложение №1).

Врезультате анализа значений концентраций мелатонина были рассчитаны ФК параметры Cmax, AUC0-t, tmax. В таблице 208 представлены усредненные ФК параметры. На рисунке 51 представлены усредненные ФК профили мелатонина.

Таблица 208.

Усредненные фармакокинетические параметры мелатонина.

68Мелаксен®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001448759/%D0%9F_N015325_01[2008]_0.pdf

(дата обращения: 11.05.2020).

69Циркадин®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001420912/%D0%9B%D0%A1%D0%A0002400_10[2014]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

291

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение.

Рисунок 51.

Усредненные фармакокинетические профили мелатонина.

а

б

Примечание: а) фармакокинетические профили исследуемых препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т7 и Р1-Р7 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Результаты исследования позволяют судить о том, что tmax для мелатонина находиться в районе 0,6-1 часа, средние значения Cmax находились на уровне 10 (±5) нг/мл.

Аналитическую методику определения мелатонина следует планировать с учетом

292

ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования, например, НПКО менее

0,25-0,75 нг/ мл. В проведенных исследованиях НПКО были 0,001-1 нг/мл, т.е. правило НПКО менее 5% от Cmax было соблюдено в большинстве исследований.

Период полувыведения мелатонина составляет около 3,5-4 часа (по данным исследований биоэквивалентности t1/2 варьировал от 0,6 до 1,4 часов), поэтому при выборе точек забора образцов крови для ФК анализа можно ограничиться общей длительностью около 12-16 часов. Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах

около 0,6-1 часа. Период отмывки с учетом длительности периода полувыведения - 7 дней.

В таблице 209 представлены средние значения эндогенных концентраций мелатонина и их доля по отношению к Cmax после приема исследуемых препаратов.

Таблица 209. Доля средних эндогенных концентраций мелатонина от средних значений Cmax.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат.

В исследовании №3 определяли эндогенный уровень 1 добровольца в течение 4 часов, была показана динамика концентраций эндогенного мелатонина от 0,087 до 0,011 нг/мл (см. рисунок 52).

293

Рисунок 52.

Эндогенный уровень мелатонина в исследовании №3.

В исследовании №4 определяли эндогенный уровень у всех добровольцев в течение 12 часов до приема исследуемых препаратов, была показана динамика концентраций эндогенного мелатонина от 0,019 до 0,028 нг/мл (см. рисунок 53).

Рисунок 53

Эндогенный уровень мелатонина в исследовании №4.

В исследовании №7 определяли эндогенный уровень у всех добровольцев в следующие временные точки 8,5 ч; 11,5 ч; 14 ч; 16,5 ч; 19 ч; 21 ч. Были показаны крайне низкие концентрации эндогенного мелатонина (ниже НПКО), с отдельными случайными значениями выше НПКО, поэтому график «концентрация-время» не строили. Средние значения эндогенных концентраций мелатонина составили 0,01 нг/мл, т.е. менее НПКО.

Как видно средние эндогенные концентрации только в 1 исследовании превысили 5% от

Сmax. Таким образом, в исследованиях БЭ мелатонина следует определять эндогенную

294

концентрацию. Согласно данным литературы, мелатонин обладает циркадным ритмом, который зависит от освещенности. Концентрация мелатонина в организме незначительна днем (1–3 пг/мл)

и начинает возрастать только за два часа до времени отхода ко сну (если нет яркого света), при выключенном свете она увеличивается (до 100–300 пг/мл) [18]. Исследование должно проводиться в светлое время суток, освещенность помещения, в котором находятся добровольцы, должна быть одинаковой на всем протяжении отбора проб крови. Поэтому целесообразно определять эндогенную концентрацию в течение того времени, которое будет определено для изучения концентраций мелатонина после приема препаратов. Т.е. если запланирован анализ концентраций в течение 12 часов в 16 точках, то эндогенную концентрацию следует определять в аналогичных временных точках до приема исследуемых препаратов.

Например, в точках - 0; 0,17; 0,33; 0,5; 0,75; 1; 1,25; 1,5; 1,75; 2; 2,25; 3; 3,5; 4; 5; 6; 12 за день до приема исследуемых препаратов.

Результаты анализа внутрииндивидуальной вариабельности представлены в таблице 210,

и демонстрируют, что в 4 исследованиях из 7 была обнаружена высокая вариабельность хотя бы одного из ФК параметров.

Таблица 210. Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина.

(верхняя граница ДИ)

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; CVpooled - усредненное («пулированное») значение коэффициента внутрииндивидуальной вариабельности; ДИ – доверительный интервал; * - значения превышающие 30%.

Полученные значения коэффициентов внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина были «пулированы». Результаты «пулирования» данных всех исследований показали, что значения CVpooled Cmax и AUC0-t мелатонина превышают 30% (31%; верхняя граница 80% доверительного интервала 33%, и 31%; верхняя граница 80% доверительного интервала

32%, соответственно).

Таким образом, в 4 из 7 исследований продемонстрирована высокая внутрииндивидуальная вариабельность мелатонина, что говорит об «умеренной» высокой

внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина (высокая вариабельность

295

продемонстрирована в 67% исследований) [98]. При планировании размера выборки в исследования БЭ следует ориентироваться на вариабельность 33%.

Также были рассчитаны коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина для отдельных популяций субъектов мужского и женского пола (см. таблицу 211).

Всего в исследованиях мелатонина в статический анализ были включены данные от 190

субъектов, из которых 95 было мужского пола и соответственно 95 женского.

В 6 из 7 исследований участвовали субъекты обоего пола, в 1 исследовании,

соответственно участвовали субъекты только одного пола. В 6 исследованиях мелатонина участвовало 67 субъектов мужского пола и 95 женского. Высокие значения CVintra

фармакокинетических параметров Cmax и AUC0-t (более 30 %), были получены в 3 исследованиях у мужчин и 4 у женщин.

Таблица 211. Данные о внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови, М – мужчины, Ж – женщины, Ж/M – отношение значений внутрииндивидуальной вариабельности фармакокинетического параметра у женщин к соответствующему значению у мужчин, СРЗНАЧ – среднее арифметическое значение, СРГЕОМ – среднее геометрическое значение, МАКС – максимальное значение, МИН – минимальное значение, СО – стандартное отклонение, * - значения, превышающие 30% (высокая вариабельность), ** - значения демонстрируют превышение внутрииндивидуальной вариабельности у женщин в сравнении с мужчинами.

Анализ средних значений внутрииндивидуальной вариабельности параметра Cmax показал незначительно большие значения в группе мужчин (30,24±16,74 и 29,72±10,97, соответственно).

Значения отношений внутрииндивидуальной вариабельности между женщинами и мужчинами составило – 1,11, что, наоборот, демонстрирует незначительно большую внутрииндивидуальную вариабельность у женщин. Анализ сравнения средних значений внутрииндивидуальной вариабельности параметров Cmax у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=0,063; p=0,951).

В отношении параметра AUC0-t показаны незначительно большие значения в группе женщин (30,70±12,19 и 28,82±14,32, соответственно). Отношение значений вариабельности

296

между женщинами и мужчинами составило 1,13. Анализ сравнения внутрииндивидуальной вариабельности параметров AUC0-t у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=-0,239; p=0,816).

Можно судить о том, что выявленные различия в значениях внутрииндивидуальной вариабельности параметров ФК мелатонина у женщин и мужчин статистически не значимы.

Таким образом, высокая внутрииндивидуальная вариабельность ФК мелатонина хотя бы одного изучаемого ФК параметра наблюдалась у мужчин в 3 исследованиях из 6, у женщин в 4

исследованиях из 6. Т.е. частота встречаемости высокой вариабельности у женщин была выше.

Анализ ассоциации между принадлежностью к определённому полу и выявлением высокой частоты внутрииндивидуальной вариабельности ФК параметров, изученных в исследованиях БЭ мелатонина, выполнили, используя точный критерий Фишера (F), для чего была построена таблица сопряженности (см. таблицу 212). Анализ влияния фактора гендерной принадлежности на частоту выявления высокой внутрииндивидуальной вариабельности не выявил статистически значимых различий (Fр=0,621; p>0,05).

Таблица 212. Ассоциация между полом субъектов и частотой выявления высокой

внутрииндивидуальной вариабельности мелатонина.

Таблица 213 демонстрирует отношение средних T/R для мужчин и женщин в проведенных исследованиях БЭ и случаи выявленной клинически значимой разницы отношений средних T/R

у мужчин и женщин. Показано отсутствие случаев наличия взаимосвязи «пол–лекарственная форма» в исследованиях БЭ мелатонина.

Анализ сравнения отношений геометрических средних T/R ФК параметров у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий для Сmax (t=-0,418; p=0,685) и для AUC0-t

(t=-1,153; p=0,293).

Таблица 213. Клинически значимые различия отношений геометрических средних воспроизведенного и

референтного препаратов мелатонина у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови, М – мужчины, Ж - женщины, М-Ж разница значений T/R у мужчин и женщин, T/R – отношение средних фармакокинетических параметров исследуемого (T) и референтного препарата (R), * - значения превышающие порог ±0,2.

Проведен анализ ФК различий путем сравнения значений Cmax и у мужчин и женщин, принимающих оба препарата (исследуемый и референтный) в 6 исследованиях мелатонина, в которых участвовали субъекты обоего пола.

В 2 исследованиях были выявлены статистически значимые различия у мужчин и женщин для параметров Cmax и AUC0-t (см. таблицу 214). Распределение логарифмированных данных было близко к нормальному, поэтому для сравнения использовали критерий Стьюдента. Аналогичный анализ в субпопуляции только исследуемого препарата также показал наличие статистически

значимых различий у мужчин и женщин.

Примечание: № - номер исследования; ФК – фармакокинетика; N – количество субъектов анализа; t-критерий – критерий Стьюдента; р – значимость; ln – логарифм; Cmax – максимальная концентрация в плазме крови AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови.

Как видно из таблицы, у женщин средние значения были статистически значимо выше.

С помощью полученных в результате нашего анализа значений внутрииндивидуальной вариабельности и отношений геометрических средних T/R, рассчитали симуляционные 90%

доверительные интервалы для 6 исследований воспроизведённых препаратов мелатонина при допущении, что количество субъектов мужского и женского пола будет приравнено к значению общей исходной выборки. Как видно из таблицы 215, в результате проведенных расчетов, в 9 из

48 случаев (факт превышения верхней или нижней границы БЭ хотя бы одного параметра)

получены доверительные интервалы, не укладывающиеся в допустимый диапазон 80,00-125,00 %.

298

Таблица 215. 90 % доверительные интервалы для отношения геометрических средних исследуемого и

референтного препаратов мелатонина у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; N – количество субъектов; М – мужчины; Ж – женщины; L – нижняя граница 90% доверительного интервала; U – верхняя граница 90% доверительного интервала; * – значения, не укладывающиеся в диапазон 80,00-125,00%.

У мужчин не эквивалентные результаты были получены в 4 исследованиях из 6 рассмотренных исследований (67%), у женщин в 2 исследованиях (33%). Изучение ассоциации между принадлежностью к определённому полу и выявлением неэквивалентных результатов исследований биоэквивалентности мелатонина, выполнили, используя точный критерий Фишера, для чего построена таблица сопряженности (см. таблицу 216). Анализ влияния фактора гендерной принадлежности на частоту результатов выявления доверительных интервалов, не укладывающихся в диапазон 80,00-125,00 %, показал отсутствие статистически значимой взаимосвязи (Fр=0,323; р>0,05).

Таблица 216. Ассоциация между полом субъектов и частотой выявления не биоэквивалентных

результатов исследований мелатонина.

Примечание: n – количество наблюдений.

Препараты мелатонина могут быть отнесены к ЛП – АЭС и включены в Печень лекарственных средств аналогов эндогенных соединений (Приложение №5). Также препараты мелатонина обладают высокой внутрииндивидуальной вариабельности и могут быть включены в Печень высоковариабельных лекарственных средств (Приложение №3).

При планировании и оценке результатов исследований БЭ мелатонина следует руководствоваться принципами, описанными в Приложении №2.

Урсодезоксихолиевая кислота.

Урсодезоксихолиевая кислота – является эпимером хенодезоксихолевой кислоты и представляет собой гидрофильную, не обладающую цитотоксичностью жёлчную кислоту. Она является наименее агрессивной жёлчной кислотой — естественным компонентом жёлчи

299

человека и содержится в количестве 1—5 % от общего количества жёлчных кислот в человеческом организме. Обладает гепатопротекторным действием. Сведения о ФК ограничены, указано на быструю абсорбцию. Период полувыведения 3,5-5,8 дней70,71,72.

В результате анализа базы данных ФГБУ ВО «ЯГМУ» и ФГБУ «НЦЭСМП» о результатах клинических исследований препаратов урсодезоксихолиевой кислоты (УДХК) было отобрано 15 исследований БЭ.

Оценка исследований БЭ УДХК показала, что в 13 рассмотренных исследованиях был выбран стандартный простой перекрёстный дизайн, в 2 исследования был выбран неполный повторный перекрестный дизайн с двумя последовательностями и тремя периодами (2х2х3). Препаратом сравнения в 14 исследованиях был Урсофальк® в различных ЛФ, который является референтным препаратом, согласно данным портала Государственного реестра лекарственных средств. Изучались различные дозы УДХК от 250 до 1000 мг. Период отмывки в большинстве исследований составил 14 дней, длительность отбора и количество временных точек отбора значительно варьировало в различных исследованиях. В 8 из 15 исследований определяли эндогенный уровень УДХК. Количество субъектов, включённых в статистический анализ параметров ФК, варьировало от 18 до 36 добровольцев. Преимущественно во всех исследованиях в крови определяли общую (конъюгированную УДХК). В одном исследовании определяли также свободную (неконъюгировнную УДХК). Согласно зарубежным рекомендациям, следует определять оба аналита с целью оценки биоэквивалентности73. В качестве биоаналитического метода определения аналитов в большинстве исследований использовали ВЭЖХ с масс-

спектрометрической или тандемной масс-спектрометрической детекцией аналитов, НПКО варьировал от 20 нг/мл и выше (Приложение №1).

В результате анализа значений концентраций УДХК были рассчитаны ФК параметры

Cmax, AUC0-t, tmax. В таблице 217 представлены усредненные ФК параметры, на рисунке 54

представлены усреднённые ФК профили.

70Урсофальк®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001400567/%D0%9B%D0%9F-003568[2017]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

71Урсофальк® капсулы. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001440447/%D0%9F_N014714_01[2016]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

72Урсофальк® суспензия. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001447610/%D0%9F_N014714_02[2016]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

73Product-Specific Draft Guidance on Ursodiol. [Электронный ресурс] // United States Food and Drug Administration. URL: https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/psg/Ursodiol_tab_20675_RC7-08.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

300