3 курс / Фармакология / Диссертация_Ромодановский_Д_П_Разработка_требований_для_оценки_фармакокинетики

Рисунок 48. Усредненные нескорректированные фармакокинетические профили колекальциферола.

Примечание: T – исследуемый препарат; R – референтный препарат.

В исследовании до приема препаратов у части добровольцев обнаруживалась эндогенная концентрация колекальциферола. Средние значения эндогенной концентрации за 24 ч в группе изучаемого препарата (n=3) составляли 1,27 (±0,55) нг/мл и в группе препарата сравнения (n=5) - 0,98 (±0,55) нг/мл. В течение 24 ч концентрации колекальциферола не претерпевали значимых колебаний. С учетом полученных в исследовании нескорректированных средних значений после приема колекальциферола в дозировке 125 мкг Cmax для исследуемого препарата составила 6,96 (±2,79) нг/мл и препарата сравнения - 7,29 (±3,28) нг/мл. Выявленный у части добровольцев эндогенный уровень колекальциферола составлял более 5% от Cmax.

По данным литературы, значения эндогенных концентраций колекальциферола составляли около 1 нг/мл, после приема 70 мкг колекальциферола Cmax составило около 4 нг/мл, tmax - 12-24 ч [306, 443]. Метод определения колекальциферола – ВЭЖХ МС/МС, НПКО 0,5 нг/мл.

По данным Wright et al., 2015 концентрации эндогенного колекальциферола составляли около 1-1,5 нг/мл, после приема 5600 МЕ колекальциферола (140 мкг) Cmax составила около 11

нг/мл, tmax - 12,5-13,5 ч [440]. Метод определения колекальциферола – ВЭЖХ МС/МС, НПКО 0,5

нг/мл.

Согласно данным литературы в 4 исследованиях биоэквивалентности с определением концентраций колекальциферола получены следующие ФК параметры (см. таблицу 197)65,66

[101].

65Public Assessment Report Alendronat/Cholecalciferol. EU-procedure number: DK/H/2582/001-002/DC 08.02.2018. [Электронный ресурс] // Heads of medicines agencies. URL: https://mri.ctsmrp.eu/human/downloads/DK_H_2582_001_PAR.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

66Public Assessment Report Alendronat/Cholecalciferol. EU-procedure number: NL/H/3578/001/DC 16.11.2017.

[Электронный ресурс] // Heads of medicines agencies. URL: https://www.geneesmiddeleninformatiebank.nl/Pars/h117968.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

281

Таблица 197. Усредненные фармакокинетические параметры колекальциферола по данным

литературы.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; Tmax – время достижения максимальной концентрации; T1/2 – период полувыведения; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; SD – стандартное отклонение; * - значения без коррекции на эндогенный уровень (эндогенную концентрацию не определяли); ** исследование с полным повторным дизайном (значения фармакокинетических параметров приведены для каждого периода).

Таким образом, можно судить о наличии базовых эндогенных концентраций колекальциферола на уровне 1-1,5 нг/мл и сопоставимости ФК после приема экзогенного колекальциферола. При приеме дозировки 70 мкг, максимальные концентрации устанавливаются на уровне 4-6 нг/мл, при приеме 140 мкг – 8-13 нг/мл, tmax – 9-14 ч.

Результаты анализа внутрииндивидуальной вариабельности Cmax и AUC0-72 исследуемого и референтного препаратов продемонстрировали следующие значения CVintra – 22,80% и 21,58%

соответственно. Таким образом, в данном исследовании получены невысокие значения коэффициента внутрииндивидуальной вариабельности колекальциферола для обоих параметров.

В литературе данные о коэффициенте внутрииндивидуальной вариабельности параметра

Cmax также говорят о не высокой вариабельности (14-26%), в отношении параметра AUC0-t данные противоречивы (12-42%).

Таблица 198. Результаты анализа данных литературы исследований биоэквивалентности

колекальциферола при приеме натощак

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора

282

последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат, НД – нет данных (сведения в источнике литературы не приведены); * - значения внутрииндивидуальной вариабельности препарата сравнения; 2х2х2 – простой перекрестный дизайн приема 2 препаратов, в 2 последовательностях в 2 периодах; 2х2х2 – полный повторный перекрестный дизайн приема 2 препаратов, в 2 последовательностях в 4 периодах.

Пулирование данных CVintra 3 исследований стандартного дизайна (2х2х2), описанных в литературе и результатов нашего исследования продемонстрировало следующие значения: для

Cmax – 18,84% (верхняя граница 80% доверительного интервала 19,95%), для AUC0-t – 17,87%

(верхняя граница 80% доверительного интервала 18,92%).

Пулирование данных CVintra 2 исследований полного повторного дизайна (2х2х4), описанных в литературе продемонстрировало следующие значения: для Cmax – 18,79% (верхняя граница 80% доверительного интервала 19,52%), для AUC0-t – 28,89% (верхняя граница 80% доверительного интервала 30,00%).

Таким образом, на основании вышеизложенного можно предполагать, что колекальциферол скорее не обладает высокой внутрииндивидуальной вариабельностью. Однако при расчете размера выборки стоит ориентироваться на значения вариабельности 20-30 %.

В рамках анализа также были рассчитаны коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности колекальциферола для отдельных популяций субъектов мужского и женского пола, проведено сравнение средних Cmax и AUC0-t у мужчин и женщин. Показаны CVintra Cmax - 28% и CVintra AUC0-t - 25% в группе мужчин, 8% и 12% в группе женщин, соответственно. Анализ взаимосвязи «пол-лекарственная форма» не выявил клинически значимых различий, симуляционные 90% доверительные интервалы были в установленных границах БЭ 80,00125,00%.

Сравнительный анализ средних ФК параметров не выявил статистически значимых различий (см. таблицу199).

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови.

Препараты колекальциферола не являются высоковариабельными, однако относятся к ЛП

– аналогам эндогенных соединений. Целесообразно включить колекальциферол в Перечень лекарственных средств аналогов эндогенных соединений (см. Приложение №5). При

планировании и оценке результатов исследований БЭ колекальциферола следует

283

руководствоваться принципами, описанными в Приожении№2.

Левокарнитин.

Левокарнитин – метаболическое средство, аналог эндогенных соединений, родственное витаминам группы В. Максимальная концентрация достигается через 3 часа после приема внутрь. Данных о периоде полувыведения нет67.

В результате анализа базы данных ФГБУ «НЦЭСМП» о результатах клинических исследований препаратов левокарнитина было отобрано 3 исследования БЭ. Оценка 3-х

исследований БЭ левокарнитина показала, что во всех рассмотренных исследованиях был выбран стандартный простой перекрёстный дизайн (2х2х2). Изучались лекарственные формы -

раствор для приема внутрь и гранулы для приготовления раствора для приема внутрь. Препаратом сравнения во всех исследованиях был референтный препарат Элькар®, изучались различные дозы от 900 мг до 2500 мг. Период отмывки в исследованиях составил 7 и 14 дней, длительность отбора и количество временных точек отбора варьировало в различных исследованиях. В 2 исследованиях оценивали эндогенный уровень за несколько часов до приема препаратов. Количество субъектов, включённых в статистический анализ параметров ФК,

варьировало от 18 до 36 добровольцев (Приложение №1).

В качестве биоаналитического метода определения левокарнитина в рассмотренных исследованиях использовали ВЭЖХ с масс-спектрометрической или тандемной масс-

спектрометрической детекцией аналитов с НПКО в диапазоне 0,5 – 2,5 мкг/мл (Приложение №1).

Втаблице 200 представлены средние значения эндогенных концентраций левокарнитина

иих доля по отношению к Cmax после приема исследуемых препаратов.

Таблица 200. Доля средних эндогенных концентраций левокарнитина от средних значений Cmax.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат.

Как видно из таблицы, два исследования левокарнитина демонстрируют средние значения эндогенных концентраций, значительно превышающие 5% от Cmax. По данным литературы,

эндогенные концентрации левокарнитина составляют 40-50 мкмоль/л [219], что в пересчете в пикограммы на миллилитр (при условии, что в 1 моле левокарнитина содержится 161,2 г вещества) составляет приблизительно 6,4-8 мкг/мл. В приведенном исследовании использовали

67 Элькар®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001448096/%D0%9B%D0%A1%D0%A0-

006143_10[2010]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

284

метод ВЭЖХ МС/МС с НПКО 0,1 мкмоль/л (около 0,016 мкг/мл). Также были выявлены статистически значимые различия в эндогенных концентрациях левокарнитина у мужчин и женщин (31,6–60,4 мкмоль/л у мужчин и 26,2–50,6 мкмоль/л у женщин).

Таким образом, полученные в 3 рассмотренных исследованиях результаты противоречивы, т.к. получены эндогенные концентрации, отличающиеся друг от друга, однако в исследовании №1 и №2 эндогенные уровни в целом близки с описанными в литературе. Результаты исследований подтвердили эквивалентность фармакокинетики левокарнитина в отношении параметров Cmax, AUC0-t.

В результате анализа значений концентраций левокарнитина были рассчитаны ФК параметры Cmax, AUC0-t, tmax. В таблице 201 представлены усредненные ФК параметры, на рисунках 49 и 50 представлены ФК профили.

Таблица 201.

Усредненные фармакокинетические параметры левокарнитина.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение; * - значения без коррекции на эндогенный уровень; ** - значения скорректированные.

Рисунок 49. Усредненные фармакокинетические профили левокарнитина с коррекцией на

эндогенную концентрацию.

а

285

б

Примечание: а) фармакокинетические профили исследуемых препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т3 и Р1-Р3 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Рисунок 50. Усредненные фармакокинетические профили левокарнитина без коррекции на

эндогенную концентрацию.

а

286

б

Примечание: а) фармакокинетические профили исследуемых препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т3 и Р1-Р3 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Результаты исследований №2 и №3 позволяют предположить о том, что tmax для левокарнитина находиться в районе 5 часов, средние значения скорректированной Cmax

находились на уровне 10-17 мкг/мл, значения не скорректированной Cmax – 18-19 мкг/мл. В исследовании №1 получены результаты, значительно отличающиеся от других, при этом аналитический метод не позволил добиться требуемого НПКО менее 5% от Cmax.

В исследовании Sahajwalla C.G., et al, 1995 максимальные концентрации карнитина были достигнуты через 3 часа после приема таблеток и перорального раствора левокарнитина и находились на уровне 80-90 нмоль/мл (около 13-14,5 мкг/мл). В качестве аналитического метода использовали радиоферментный анализ (НПКО метода не указан) [377].

Таким образом, можно предположить, что время достижения максимальной концентрации левокарнитина может варьировать в диапазоне 3-7 часов, значения средних Cmax

до коррекции на эндогенный уровень варьировали от 6 до 19 мкг/мл с учетом применения разных ЛФ и дозировок левокарнитина, а также использования различных аналитических методик.

Аналитическую методику определения левокарнитина следует планировать с учетом ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования, например, НПКО менее 0,3-0,95 мкг/мл (5% от средних Cmax 6-19 мкг/мл).

Период полувыведения левокарнитина в проведенных исследованиях БЭ варьировал в диапазоне 9-19 часов (при расчете t1/2=0,693*MRT), поэтому при выборе точек забора образцов крови для ФК анализа можно ограничиться общей длительностью около 72 часов, с учетом ЛФ с немедленным высвобождением. Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах около 3-7 часов. Период отмывки с учетом длительности периода полувыведения - 7 дней. Для более точных прогнозов ФК левокарнитина необходимо накопить больше данных о ФК исследованиях.

287

Результаты анализа внутрииндивидуальной вариабельности представлены в таблице 202,

и демонстрируют, что в 3 исследованиях левокарнитина не была обнаружена высокая вариабельность хотя бы одного из ФК параметров.

Таблица 202. Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности левокарнитина

(верхняя граница ДИ)

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; CVpooled - усредненное («пулированное») значение коэффициента внутрииндивидуальной вариабельности; ДИ – 80% доверительный интервал.

Полученные значения коэффициентов внутрииндивидуальной вариабельности левокарнитина были «пулированы». «Результаты «пулирования» данных всех исследований показали, что значения CVpooled Cmax и AUC0-t не превышают 30% (17%; верхняя граница доверительного интервала 19%, и 15%; верхняя граница доверительного интервала 17%,

соответственно). При планировании размера выборки в исследования левокарнитина следует ориентироваться на вариабельность 19%.

Также были рассчитаны коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности левокарнитина для отдельных популяций субъектов мужского и женского пола (см. таблицу 203).

Всего в 3 исследованиях в статический анализ были включены данные от 72 субъектов, из которых 26 было мужского пола и соответственно 46 женского.

Таким образом, в исследованиях левокарнитина субъекты мужского и женского пола не демонстрировали высокие значения CVintra.

Таблица 203. Данные о внутрииндивидуальной вариабельности у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови, М – мужчины, Ж – женщины, Ж/M – отношение значений внутрииндивидуальной вариабельности фармакокинетического параметра у женщин к соответствующему значению у мужчин, СРЗНАЧ – среднее арифметическое значение, СРГЕОМ – среднее геометрическое значение, МАКС – максимальное значение, МИН – минимальное значение, СО – стандартное

288

отклонение, * - значения демонстрируют превышение внутрииндивидуальной вариабельности у мужчин в сравнении с женщинами.

Анализ средних значений внутрииндивидуальной вариабельности параметра Cmax показал незначительно большие значения в группе мужчин (18,94±7,93 и 13,37±0,81, соответственно).

Значения отношений внутрииндивидуальной вариабельности между женщинами и мужчинами составило – 0,85, что также демонстрирует большую внутрииндивидуальную вариабельность у женщин. Анализ сравнения средних значений внутрииндивидуальной вариабельности параметров Cmax у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=1,211; p=0,292).

В отношении параметра AUC0-t показаны незначительно большие значения в группе мужчин (19,04±3,86 и 15,41±6,01, соответственно). Отношение значений вариабельности между женщинами и мужчинами составило 0,80. Анализ сравнения внутрииндивидуальной вариабельности параметров AUC0-t у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=0,878; p=0,437).

Можно судить о том, что внутрииндивидуальная вариабельность параметров ФК левокарнитина у мужчин незначительно выше, чем у женщин, однако, различия статистически не значимы. Возможно, это связано со статистически значимыми различиями в эндогенных концентрациях левокарнитина у мужчин и женщин [219].

Таблица 204 демонстрирует, отношение средних T/R для мужчин и женщин в проведенных исследованиях БЭ и случаи выявленной клинически значимой разницы отношений средних T/R у мужчин и женщин. Показано отсутствие случаев наличия взаимосвязи «пол – готовая ЛФ» в исследованиях БЭ левокарнитина.

Анализ сравнения отношений геометрических средних T/R ФК параметров у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий для Сmax (t=0,831; p=0,453) и для AUC0-t

(t=0,336; p=0,754).

Таблица 204. Клинически значимые различия отношений геометрических средних воспроизведенного и

референтного препаратов левокарнитина у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови, М – мужчины, Ж - женщины, М-Ж разница значений T/R у мужчин и женщин, T/R – отношение средних фармакокинетических параметров исследуемого (T) и референтного препарата (R).

Проведен анализ ФК различий путем сравнения значений Cmax и AUC0-t у мужчин и женщин, принимающих оба препарата (исследуемый и референтный) в 3 исследованиях

289

левокарнитина, в которых участвовали субъекты обоего пола.

В двух исследованиях (№1 и №3) выявлены статистически значимые различия в отношении AUC0-t (см. таблицу 205). Для сравнения использовали логарифмированные данные как наиболее близкие к нормальному распределению. Т.к. распределение не являлось нормальным, анализ проводили с помощью критерия Манна-Уитни.

Таблица 205. Фармакокинетические различия у мужчин и женщин из исследований

левокарнитина.

Примечание: № - номер исследования; ФК – фармакокинетика; N – количество субъектов анализа; t-критерий – критерий Стьюдента; р – значимость; ln – логарифм; Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови.

Аналогичный анализ в субпопуляции только исследуемого препарата также показал наличие статистически значимых различий у мужчин и женщин в исследовании №1 (см. таблицу

206). Для референтного препарата различия не были значимыми.

Таблица 206. Фармакокинетические различия у мужчин и женщин в субпопуляции исследуемого

препарата.

Примечание: № - номер исследования; ФК – фармакокинетика; N – количество субъектов анализа; t-критерий – критерий Стьюдента; р – значимость; ln – логарифм; Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови.

С помощью полученных в результате нашего анализа значений внутрииндивидуальной вариабельности и точечной оценки, рассчитали симуляционные 90% доверительные интервалы для 3 исследований воспроизведённых препаратов левокарнитина при допущении, что количество субъектов мужского и женского пола будет приравнено к значению общей исходной выборки. Как видно из таблицы 207, в результате проведенных расчетов, во всех случаях получены доверительные интервалы, укладывающиеся в допустимый диапазон 80,00-125,00 %.

Таблица 207. 90 % доверительные интервалы для отношения геометрических средних исследуемого и

референтного препаратов левокарнитина у мужчин и женщин.