Если после этого добавить эритроциты барана и гемолитическую сыв-ку (АТ против эритроцитов барана), то гемолиза не произойдет, ибо комплемент уже связан.
«+» - НЕТ гемолиза, «-« - есть гемолиз.
Непрямая РИФ – АГ бактерий (диагностикум) + сыв-ка больного (АТ) + люминесцирующая сыв-ка против Ig. Положительная реакция – зеленой свечение в люминесцентном микроскопе (сифилис).
ИФА – известный АГ фиксированный на носителе + сыв-ка больного с АТ + АТ против АТ больного, меченные ферментом + хромогенный субстрат.
Положительная реакция – изменение цвета.
Иммуноблотинг – по сути ИФА, но различные АГ нанесены в разных участках на одну бумажную полоску (диагностика ВИЧ)
18. Иммунопрофилактика, иммунотерапия. Осложнения: анафилактический шок, сывороточная болезнь. Их предупреждение
Иммунопрофилактика – способ предупреждения инфекционных заболеваний в коллективе и у отдельных индивдуумов путём создания искусственного специфического иммунитета.
2 формы иммунизации:
() активная – основана на вакцинах ---> искуственный активный иммунитет
() пассивная – основана на введении в организм сывороток и гамма-глобулинов ---> искуственный пассивный иммунитет
Активная иммунизации = вакцинопрофилактика
Вакцина – препарат, использующийся для искуственного создания приобретённого активного специфического иммунитета против определённых возбудителей или их токсинов
Требования к вакцинам:
-высокая иммуногенность
-безопасность
-низкая реактогенность
-стабильность при хранении
По содержимому можно выделить:
#Моновакцины – 1 серовар
#Поливакцины – несколько сероваров
#Комбинированные – несколько видов микробов или один в нескольких вариантах (химический + корпускулярный)
Пути введения вакцин разнообразны от накожного до ингаляционного (внутрикожный, подкожный, в/м, назально, энтерально)
С точки зрения разницы природы вакцины выделяют: живые (ослабленная вирулентность), убитые и химические вакцины
Живые вакцины:
+вызывают латентную инфекцию
+дают стойкий и длительный иммунитет
-есть риск сенсибилизации
-могут дать персистентную инфекцию Убитые:
-нет высокой иммуногенности
+ нет сенсибилизации
Химические вакцины по сути придумал Рамон, его метод создания анатоксинов дифтерии и столбняка: фильтрат, содержащий только токсины бактерий, смешивают с 0,4% формалином и нагревают до 40 градусов в течение 3-4 недель
«Новое поколение» вакцин: исуственные химические (на полимерные макромолекцлы цепляют синтетические эпитопы), генно-модифицированные (встраивание АГ-продуцирующего гена в клетку бактерии/вирус, который будет его продуцировать внутри человека) и экспозиционные (детерминанты иммунитета (АГ) крепят на белок генно-инженерно или химически)
Иммунизация – наиболее эффективное средство борьбы с инфекциями
Потенциально ликвидируемые иммунизацией заболевания: жёлтая лихорадка, коклюш, дифтерия, полиомиелит, паротит, краснуха, корь
Иммунотерапия – совокупность специфических методов лечения инфекционных болезней с помощью иммунных сывороток (серотерапия) или вакцин (вакцинотерапия) или аллергенов (десенсибилизация)
Серотерапия – метод лечения инфекционных болезней, основанный на введении больному иммунных сывороток или препартов Ig, содержащих специфические АТ к возбудителю болезни или его токсинам (наибольший эффект при дифтерии, столбняке, ботулизме, газовой гангрене, так как там работают ЭКЗОтоксины)
Вакцинотерапия основана на стимуляции иммунитета или десенсибилизации организма к данному микробу/его АТ при действии анатоксина или отдельных микробных АГ (обычно используют при хронических заболеваниях или рецидивах), используются стандартные лечебные вакцины или аутовакцины (изготовлена из штамма больного)
Десенсибилизация бывает 2 типов: при повторном введении АГ, что временно подавляет эффекторное звено, или гиперсенсибилизация при введении аллергена в возрастающих дозах (конкурентный синтез
IgG вместо IgE)
Анафилаксия развивается при участии IgE, они фиксируются на тучных клетках и базофилах и при контакте с АГ вызывают высвобождение (дегрануляция мембран) гистамина, брадикинина и других БАВ. Проявление анафилактического шока: резкое снижение давления, отёк, покраснение, одышка, судороги, тахикардия, головокружение. Так как это ГНТ, требующая контакта с небольшим количеством АГ, то профилактика и купирование заключается в ввдении большего числа АГ в организм, что приведёт к десенсибилизации (механизм описан выше)
Сывороточная болезнь – одно из проявления гиперчувствительности 3 типа (когда АГ-АТ комплексы не элиминируются, из-за чего они накапливаются в «узких» местах: почках, капиллярах, лимфоузлах), вызывают активацию комплемента по альтернативному пути (анафилотоксин) и высвобождение лизосомального содержимого нейтрофилов, что приводит к разрушению ткани. Характеризуется крапивницей, покраснением,
лихорадкой, увеличением лимфоузлов, отёками (на фоне поражения почек), тошнотой. Данная патология может развиться только при контакте АГ и АТ в кровотоке, поэтому ассоциирована с введением гетерогенных (чужеродных организму) сывороток (они произведены на основе АТ животны), Ig (антирабический, например), на приём ЛС (преимущественно антибиотиков). Для профилактики перечисленные препараты вводят не моментально, а после потсановки кожной пробы: 0,1 мл сыворотки вводя п/к при разведении 1 к 10 и ждут 20 минут, если не произошло избыточного ответа на препарат, то ставят аналогичную, но уже в/к пробу, если и она отрицательная, то вводят остаток препарата в/м
19. Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Принципы методов, используемые реагенты и оборудование, применение.
Иммуноферментный анализ — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой).
После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Применение: для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010 -1012 г/л).
По типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА классифицируют на: конкурентный и
неконкурентный методы.
Все методы ИФА делятся на гомогенные (применяются для определения низкомолекулярных субстанций, в основе лежит ингибирование активности фермента при его соединении с АГ или АТ) и гетерогенные (характерно проведение анализа в двухфазной системе с участием твердой фазы – носителя, и обязательная стадия разделения иммунных комплексов от непрореагированных компонентов (отмывка), которые находятся в разных фазах).
По принципу определения тестируемого вещества ИФА делят:
·Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ) по числу провзаимодействующих с ним центров связывания. Ферментная метка в образовавшемся комплексе АТ-АГ.
·Определение концентрации вещества по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания.
Твердофазный (прямой) ИФА — вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты
выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена.
Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания, I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента. II. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.
Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Другой тест - Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧинфекции и др. Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.
20. История микробиологии. Этапы развития. Современные задачи.
История микробиологии:
Все ученые в хронологическом порядке.
Антоний Ван Левенгук - сконструировал прибор напоминающий современный микроскоп, знаменит тем, что открыл микробы (1676). Увидел и описал все формы микробов: кокки, палочковидные и извитые, пришел к выводу, что окружающий мир заселен микробами. Работы не получили должного признания и лишь во второй половине 19 века благодаря развитию микроскопической техники и работам Луи Пастера (по изучению процессов брожения) микробиология получила внимание исследователей.
В 1856 г. Луи Пастер - решил проблему вина и пива во Франции (они портились и страна несла убытки, Пастер предложил прогревать их до 50-60 градусов, что приводило к гибели вегетативных форм микроорганизмов, этот метод получил название пастеризация). Для стерилизации Пастер предложил прогревать жидкости до 120 а твердые предметы до 140 градусов. Открыв микробную природу брожения, гниения и тд Пастер делает вывод, что причиной инфекционных заболеваний человека и животных являются живые микробы. Ученый открыл возбудителей куриной хоеры, родильной горячки, остеомиелита, септицемии, абсцессов.
1880-1885 гг. – Пастер делает вывод, что ослабленные микробы, введенные в организм, создают в нем иммунитет против последующих заражений вирулентными микробами. Создает вакцины против куриной холеры, сибирской язвы и бешенства.
Первая в России и вторая в мире пастеровская станция (иммунизация против бешенства) была открыта в Одессе в 1866 г. Мечниковым и Гамалеем.
Параллельно со школой Л. Пастера развивалась и достигла успехов немецкая школа микробиологов, основоположником который был Роберт Кох. Ему удалось культивировать и описать возбудителя сибирской язвы, стафилококка, возбудителей раневых инфекций и столбняка, возбудителя туберкулеза и туберкулина, который нашел применений в диагностике этой инфекции.
Яркий представитель немецкой школы – Пауль Эрлих. Он занимался поисками путей поучения химических соединений, способных подавлять жизнедеятельность возбудителей заболеваний. Ввел в практику лечение четырехдневной малярии красителем метиленовым синим. Особое значение – работы по лечению сифилиса органическими соединениями мышьяка. Сообщил об открытии арсфенамина – эффективного средства против сифилиса.
В 1890-1895 гг. работая с Р. Кохом в институте инфекционных болезней в Берлине разработал метод определения активности антитоксических сывороток и изучения взаимодействия АГ-АТ in vitro. Создал теорию боковых цепей, сыгравшую большую роль в развитии иммунологии.
Основываясь на принципах гуморальной иммунной теории, разработанной Эрлихом Э. Беринг в 1890 получил антитоксическую сыворотку для лечения дифтерии, а в 1923 Рамон – дифтерийный анатоксин.
Мечников – возникновение современной иммунологии. Открытие фагоцитарной теории иммунитета в 1908 присуждена Нобелевская премия.
Д.И. Ивановский – открытие вирусов.
Н.Ф. Гамалею принадлежат заслуги в ликвидации оспы в нашей стране.
Л.С. Ценковский – борьба с сибирской язвой.
Г.Н. Габричевский – организация производства противодифтерийной сыворотки, создана вакцина от скарлатины.
С.Н. Виноградский – основы современного понимания метаболизма прокариот и возникла новая наука – почвенная микробиология.
З.В. Ермольева и Г.Ф. Гаузе – первые отечественные антибиотики – пенициллин, грамицидин С, стрептомицин. Создан первый в России институт получения антибиотиков.
П.Ф. Здродовский – исследование реккетсиозов, вирусно-генетическая теория канцерогенеза, создание вакцины против полиомиелита.
П.Н. Кашкина – исследование грибов и создание отечественной медицинской микологии.
Этапы развития:
1.Эвристический период (Гиппократ, Авиценна)
2.Морфологический период (Левенгук)
3.Физиологический период (Пастер)
4.Иммунологический период (Мечников, Гамалея и тд)