2292 / Farmakognoziya_2011

В качестве ЛРС допускается использовать тра ву других видов горицвета: г. сибирского (A. sibiricus Patr. ex Ledeb.), г. амурского (A. amurensis Rql. et Radde), г. волжского, г. пламенного, г. летнего, г. зо лотистого, г. туркестанского (A. turkestanicum (korsh.) Adolf.).

Adonidis vernalis herba — горицвета весеннего трава.

ЛРС — цельные или частично измельченные облиственные стебли с цветками или без них, реже с бутонами или плодами разной степени развития, иногда частично осыпавшимися. Стебли, срезан ные выше коричневых низовых чешуевидных ли стьев, длиной от 10 до 35 см и толщиной до 0,4 см, простые или маловетвистые. Листья очередные, сидячие, полустеблеобъемлющие, округлые или широкоовальные, пальчато рассеченные на пять долей, из которых две нижние — перисто рассе ченные, три верхние — дважды перисто рассечен ные; доли листьев линейные, у верхушки шиловид но заостренные, цельнокрайние, длиной от 0,5 до

Рис. 80. Горицвет весенний: 2 см, шириной от 0,5 до 1 мм. Листья после отцвета 1 — цветок; 2 — лист; 3 — плод ния жестковатые. Цветки на верхушке стеблей оди ночные, правильные, около 3,5 см в диаметре, сво боднолепестные, с 5—8 чашелистиками, с 15—20 лепестками, с многочисленными

тычинками и пестиками. Чашелистики яйцевидные, вверху притупленные, с редки ми зубцами, опушенные, длиной 12—20 мм, шириной около 12 мм, легко опадают. Лепестки эллиптические, на верхушке суженные, зазубренные. Плод сборный, овальный, состоит из многочисленных сухих орешков, сидящих на цилиндрическом буроватом цветоложе. Биологическую активность сырья проверяют ежегодно.

Химический состав ЛРС. В траве г. весеннего содержится ряд карденолидов, но основными являются адонитоксин (гидролизующийся на адонитоксигенин строфантового типа и L рамнозу), цимарин, К строфантин , адонитоксол и другие кардиогликозиды. Имеются сапонины, фитостерины, флавоноиды, ду бильные вещества, органические кислоты.

Основное действие. Кардиотоническое, умеренно седативное, слабое моче гонное.

И с п о л ь з о в а н и е. Трава г. весеннего применяется для получения настоя, сухого экстракта, который входит в состав таблеток Бехтерева. Получаемые из травы сердечные гликозиды, в частности адонитоксин, входят в состав ЛС Адони зид, Адонис бром, а Адонизид также является компонентом комплексного ЛС Кар дивален. ЛС из горицвета применяют при сравнительно легких формах недоста точности кровообращения. В терапевтических дозах эти препараты не кумулиру ются. Кроме того, они используются как успокаивающие средства при терапии неврозов и вегетодистонии, а также для лечения почечных заболеваний с симпто мами недостаточности сердечно сосудистой системы.

Противопоказания. Настой травы горицвета и получаемые из него ЛС нельзя применять при беременности.

Желтушник раскидистый (серый) (Erysimum diffusum Ehrh., или (E. canescens

Roth.) — сем. Капустные (Brassicaceae), рис. 81. Двулетнее травянистое растение вы сотой 30—80 см. Стеблей несколько, ветвистые. Листья очередные, линейно про долговатые или ланцетовидные, цельнокрайние. Растение выглядит сероватым из за покрывающих его коротких прижатых волосков. Цветки собраны в верхушеч ные рыхлые кисти, венчик четырехлепестной, бледно желтый, длиной 10—14 мм, вдвое длиннее чашечки. Плод — четырехгранный стручок длиной до 7 см, направлен косо вверх или параллельно стеблю. Цветение происходит в мае — июне. Желтуш ник раскидистый произрастает в лесостепной зоне европейской части СНГ, в Бела руси культивируется. Вместе с травой ж. раскидистого (серого) допускается исполь зование травы ж. левкойного (E. cheiranthoides L.), произрастающего как сорняк, ко торый представляет собой однолетнее травянистое растение с ветвистым стеблем и очередными продолговато ланцетными цельнокрайними или зубчатыми листьями ярко зеленой окраски; все растение также опушено короткими прижатыми волос ками. Цветки в верхушечных кистях с ярко желтыми лепестками длиной 5 мм, вдвое длиннее чашелистиков. После отцветания они образуют стручки длиной 1—3 см на отклоненных ножках, направленные косо вверх. Заготовку ЛРС ведут во время цве тения растений. Траву скашивают, сразу собирают и сырую немедленно прессуют.

Erysimi diffusi herba recens (Erysimi canescentis herba recens) — желтушника рас кидистого трава свежая (желтушника серого трава свежая).

Сырье состоит из стеблей длиной до 30 см с листьями, цветками, незрелыми плодами. Цвет травы серо зеленый. Запах слабый, вкус сырья не определяют (ядовито !). Проверяют активность свежего ЛРС.

Erysimi diffusi semina (Erysimi canecentis semina) — желтушника раскидистого семена (желтушника серого семена).

Зрелые семена яйцевидно эллиптические, длиной 1,5—1,8 мм и шириной 0,5—0,9 мм, с гладкой блестящей желтовато коричневой по верхностью, без запаха. На срезе под оболочкой внутри семени видны крупный согнутый заро дыш и семядоли с алейроновыми зернами и ка плями масла в клетках.

Химический состав ЛРС. Надземная часть ж. раскидистого (серого) содержит кардено лиды строфантового типа (листья — 1—1,5 %, стебли — 0,5 %, семена — 2—6 %), в которых генином является строфантин, а в гликозиль ной части находится дигитоксоза, присутст вующая у сердечных гликозидов наперстянки, но конечным звеном цепочки является глюко за. Основные кардиогликозиды травы жел тушника — эризимозид и эризимин. Присут ствуют также флавоноиды (производные изо рамнетина и кверцетина). В семенах имеются эризимозид (2,5 %), гликозиды строфантина (1,4 %), масло (30—40 %) с содержанием олеи

новой (50 %), эруковой (30 %), линоленовой (5 %) и других непредельных жирных кислот.

Основное действие. Кардиотоническое.

И с п о л ь з о в а н и е. Сок ж. раскидистого (серого) входит в состав ЛС Кар диовален (вместе с экстрактом плодов боярышника, корней валерианы, адонизи дом, камфорой, натрия бромидом) и применяется при ревматических пороках сердца, кардиосклерозе с нарушением кровообращения, неврозах, аритмии, сте нокардии. Семена ж. раскидистого (серого) используют также для приготовления ЛС Строфантидина ацетат (получаемого главным образом из семян строфанта Комбе). В медицине препараты желтушника применяются, как и строфантин, при острой и хронической сердечной недостаточности II—III степени с тяжелым нарушением кровообращения.

Тот факт, что на протяжении столетий и до настоящего времени ЛР, содер жащие сердечные гликозиды, не утратили своего значения как источники ФАВ, позволяет выделить два перспективных направления будущей работы:

1)изучать виды — возможные потенциальные источники сердечных гли козидов: растения рода Морозник (Helleborus), Морской лук (Urginea), Бовиейя (Bowiea), Джут (Corhus), Кендырь (Apocynum), Обвойник (Periploca), Олеандр (Nerium) и др.;

2)разрабатывать новые методы получения сердечных гликозидов, прежде всего биотехнологическим способом: из культуры клеток и тканей растений, син тезирующих эти соединения.

САПОНИНЫ

Сапонины — природные гликозиды (сапонизиды, сапозиды), характерны ми свойствами которых являются: 1) высокая поверхностная активность (спо собность при встряхивании образовывать пену, т. е. это детергенты); 2) гемоли тическая активность, обусловливающая образование пор в клеточной мембране эритроцитов и, как следствие, выход гемоглобина в плазму крови; 3) токсич ность для холоднокровных животных, вызванная способностью сапонинов на рушать функционирование жабр, что обусловило применение некоторыми пле менами ЛР, содержащих сапонины, при ловле рыбы.

Понятие «сапонины» произошло от названия растения мыльнянка (Sapo naria officinalis L., сем. Гвоздичные — Caryophyllaceae). Термин был предложен в 1819 г. Мэлоном для обозначения мыльных свойств веществ, выделенных из это го растения (sapo — мыло).

Химическая структура и классификация сапонинов

По структуре молекул сапонины условно разделяют на стероидные и тритер пеновые (пента и тетрациклические), хотя по большому счету все сапонины от

носятся к терпеноидам и основу их генинов составляет циклопентанпергидрофе нантреновое ядро.

Стероидные сапонины. Стероидные сапонины (фуро и спиростанолового типа) — большая группа природных соединений. Особенностью агликонов сте роидных сапонинов является присутствие в молекуле 27 атомов углерода и атома кислорода у С16 (в кольце Е), а иногда также в положении у С1, С2, С5, С12. В поло жении С5—С6 у многих имеется двойная связь (например, в молекуле диосгенина, агликона диосцина). В зависимости от ориентации (поворота) спирокетального кольца F стероидные сапонины подразделяют на соединения «нормального» ряда и изо ряда. Спирокетальные группы обнаружены и у стероидных алкалоидов, что говорит об их общем происхождении и родстве с другими стероидами.

Стероидные сапонины обычно являются С3—О гликозидами, поскольку ОН группа у С3 атома агликона является основным местом присоединения ос татков сахаров. В гликозильной цепочке может быть несколько мономеров (не только глюкозы — например, в молекуле, выделенной из растений рода Напер стянка (Digitalis), имеется 5 монозидов, в том числе галактоза, ксилоза, глюкоза; са погенин — дигитонин). Данный случай также показывает, что в растениях, содер жащих кардиогликозиды, эти вещества часто встречаются вместе с сапонинами.

19

Диосгенин (спиростаноловый тип)

Стероидные сапонины и их гликозиды характерны для следующих семейств: Диоскорейные, Лилейные, Норичниковые, а также обнаружены у растений семейств

Бобовые, Лютиковые, Пасленовые, Парнолистиковые.

Стероидные сапонины имеют значение прежде всего как исходные продукты для получения кортикостероидов и других стероидных гормональных ЛС (Преднизо лон, Прогестерон). От других сапонинов они практически ничем не отличаются, кро ме способности образовывать с высшими спиртами (в частности, с холестерином) комплексные соединения, не растворимые в воде, но хорошо растворимые в этаноле.

Наиболее типичным представителем стероидных сапонинов является диос генин, содержащийся в корневищах и корнях разных видов диоскореи: ниппон ской, кавказской, дельтовидной. Сапогенин диосгенин у С3 через кислород обра зует связь с глюкозой, к которой (разветвленно через О связи) присоединены две L рамнозы, образуя гликозид диосцин.

Фитоэкдизоны. По структуре молекул к стероидным сапонинам близки со единения, именуемые фитоэкдизонами (экдистероидами).

В основе строения молекул экдизонов лежит циклопентанпергидрофенан треновый скелет, к которому в С17 положении присоединена алифатическая це почка из восьми углеродных атомов. По физико химическим свойствам фитоэк дизоны — твердые кристаллические вещества, хорошо растворимые в этаноле, метаноле, ацетоне, этилацетате и плохо — в хлороформе, не растворимые в петро лейном эфире, оптически активные.

Экдизон

Впервые фитоэкдизоны были обнаружены у насекомых и ракообразных в связи с тем, что они контролируют метаморфоз и линьку этих беспозвоночных животных. Затем их нашли в растениях — папоротниках, таких как тайвань ский папоротник пайючин (Podocarpus nakai), серпуха сухоцветная (Seratula xeranthemoides); у последнего вида их содержание было около 2 %. Установили, что если личинки насекомых не получают достаточного количества экдистерои дов из растений, используемых ими для питания, то у них не наступают процессы окукливания и превращения в стадию имаго.

Большинство пентациклических тритерпеновых сапонинов относится к пяти типам: амирина, амирина, лупеола, фриделина и гопана. В природе наиболее широко представлены продукты амирина — олеаноловая кислота, производные которой имеются у аралии, синюхи, солодки, патринии и многих других ЛР. Произ водные амирина, представителем которых является урсоловая кислота и ее про дукты, выделены из растений семейств Брусничные, Вересковые, Кутровые. Произ водные лупеола, такие как бетуловая кислота, бетулин, выделены из березы.

Тритерпеновые сапонины могут быть нейтральными и кислыми. Кислый ха рактер рН обусловлен присутствием карбоксильной группы в агликоне или уро новых кислот в гликозильной части молекулы. Гидроксильные группы могут быть ацилированы уксусной кислотой (пропионовой или другими). Сахаристые остатки могут присоединяться к агликону по гидроксильной или карбоксильной группам; гликозильная цепочка может быть линейной или разветвленной.

Физико химические свойства

По физико химическим свойствам сапонины — это бесцветные или желтова тые аморфные гигроскопичные вещества. В кристаллическом виде получены от дельные гликозиды сапонинов, которые содержат не более четырех моносахаридов.

Как стероидные, так и тритерпеновые сапониновые гликозиды (сапонизиды, или сапозиды) растворимы в воде, а также в разведенных водой (60—70 %) низших спиртах (этаноле, метаноле) даже на холоде. В более высоких концентрациях этих спиртов (80—95 %) только при нагревании и при охлаждении выпадают в осадок. Растворимость в воде определяется количеством моносахаридов в гликозидной части молекулы сапонизидов и увеличивается с возрастанием их числа. Гликозиды сапонинов с 1—4 моносахаридами обычно плохо растворимы в воде. Как правило, сапонизиды при растворении в воде образуют коллоидные растворы. В растворе оптически активны (за счет гликозильных остатков). Сапонизиды не растворимы в эфире, бензоле, ацетоне, хлороформе и других органических растворителях.

Многие сапонины образуют молекулярные комплексы с солями тяжелых металлов, фенольными веществами, стеринами, липидами, белками. При этом их гликозильные части определяют способность связывания, а сапогенины гемо литически не активны и не токсичны для рыб.

Из водных растворов сапонины осаждаются солями тяжелых металлов, гид роксидами бария (или магния), белками и таннинами; из спиртовых растворов — неполярными органическими растворителями (диэтиловым эфиром, этилацета том и др.), стеринами, липидами. Под действием кислот и ферментов гликозиды сапонинов распадаются на агликон и остаток сахара. Сапонины обладают жгучим раздражающим вкусом и вызывают чихание и покраснение глаз, аллергию.

Некоторые сапонины могут быть не растворимы в воде, плохо пениться, не проявлять гемолитических свойств.

Стероидные сапонины образуют комплексы и осадки с высшими спиртами и холестерином. Стероидные сапонины в основном рН нейтральны, а тритерпе новые — в основном кислые. Сапогенины — кристаллические вещества с четкой температурой плавления (в отличие от гликозидов, которые не имеют определен ной температуры плавления). Сапогенины, как правило, растворимы в спиртах, диэтиловом эфире, ацетоне, бензоле, но не растворимы в воде.

Выделение сапонинов из ЛРС

Этот процесс проводят по следующей схеме. Предварительно ЛРС обраба тывают петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом — для разруше ния комплекса сапонинов со стеринами, которые не растворимы в спиртах. Из ЛРС сапонины экстрагируют водой, этанолом, метанолом или их водными рас творами. Водой в основном извлекают гликозиды (чем больше гликозильных ос татков, тем растворимость в воде больше). Поэтому обычно 60—70 % спиртом из влекаются и гликозиды, и агликоны сапонинов.

Из водных вытяжек различные тритерпеновые сапонины осаждают тяжелы ми металлами (кислые сапонины с металлами образуют соли, которые затем раз лагают серной или угольной кислотами). Если образуются холестериновые ком плексы, проводят извлечение холестерина бензолом, если белковые комплек сы — проводят разрушение комплекса кипячением с этанолом (сапонины пере ходят в раствор, белок остается в осадке). Из танниновых комплексов сапонины освобождают кипячением с оксидом цинка: таннины остаются в осадке в виде комплекса с цинком, сапонины переходят в раствор.

Полученные фракции сапонинов разделяют на индивидуальные вещества с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, оксиде алюминия, активи рованном угле, гельфильтрацией на сефадексе и т. п.

Качественное определение наличия сапонинов

Методы обнаружения сапонинов в ЛРС основаны на использовании трех различных свойств этих веществ: физических, химических и биологических.

1. Реакции, основанные на физических свойствах сапонинов. Гликозиды сапо нинов обладают детергентной активностью, что связано с наличием в одной мо лекуле гидрофильного (углеводная часть) и гидрофобного остатков (агликон). Образование пены обусловлено тем, что сапонины понижают поверхностное на тяжение на границе двух сред: воды и воздуха, воды и жира, т. е. они способны эмульгировать жиры.

Реакция пенообразования. При встряхивании в пробирке водного извлечения, содержащего сапонины, образуется довольно устойчивая пена. По характеру и степени пенообразования примерно определяют групповую принадлежность са понинов (стероидную или тритерпеновую). Для проведения этой реакции водные экстракты из ЛРС делят на две части: первую подкисляют до рН 1, вторую под щелачивают до рН 13. Оба раствора в пробирке встряхивают. Наблюдают обра зование столбов пены. Если в пробирках образуются примерно равные по вели чине и стойкости столбики пены, то ЛРС содержит тритерпеновые сапонины, если же столбики пены больше при щелочном растворе рН, чем при кислом, то сырье содержит стероидные сапонины.

2. Реакции, основанные на химических свойствах сапонинов. Это реакции оса ждения сапонинов и цветные реакции.

Реакции осаждения сапонинов:

из водных растворов сапонины осаждаются Ba(OH)2, Mg(OH)2, CuSO4, ацетатом Pb, причем тритерпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные — оснóвным;

из спиртовых экстрактов стероидные и тритерпеновые сапонины осажда ются спиртовым раствором холестерина в виде комплексов (холестеридов).

Реакции окрашивания сапонинов:

к 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл 10 % NaNO2 и 1 каплю концен трированной H2SO4. В результате появляется кроваво красное окрашивание;

к 2 мл водного извлечения прибавляют 2 мл хлороформа и 5 капель кон

центрированной H2SO4 — возникает желтое, переходящее в темно коричневое окрашивание в нижнем (хлороформном) слое;

реакция Лафона: к 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл этанола, 1 мл

концентрированной H2SO4, затем каплю раствора Fe2(SO4)3. При нагревании пробирки в ней появляется сине зеленое окрашивание.

Эти три реакции положительны как на стероидные, так и на тритерпеновые сапонины. Только на с т е р о и д н ы е с а п о н и н ы позитивны следующие ре акции:

реакция Либермана — Бурхардта (на стероидное ядро молекулы, как и

укардиогликозидов): к 3 мл водного извлечения из ЛРС, выпаренного досуха, до бавляют каплю ледяной уксусной кислоты и затем смесь (50 : 1) уксусного ангид

рида и концентрированной H2SO4. Через 5 мин появляется розовое окрашива ние, переходящее в зеленовато синее;

реакция Санье: к 2 мл 1 % раствора сурьмы (III) хлорида добавляют несколько

капель концентрированной H2SO4, содержащей уксусный ангидрид. В результате взаимодействия реагентов со стероидной частью молекулы сапонинов появляется желтое окрашивание.

Существует вариант реакции Санье для выявления сапонинов на хромато граммах. Для этого хроматограммы после разделения суммы сапонинов опры скивают 5 % спиртовым раствором ванилина, 10 мин нагревают в сушильном

шкафу при температуре 100—110 С, затем опрыскивают 50 % раствором H2SO4 и снова 10 мин нагревают в сушильном шкафу — пятна гликозидов стероидных са понинов окрашиваются в желтые тона.

Для хроматографического выявления тритерпеновых сапонинов хромато граммы опрыскивают 20 % раствором H2SO4 и 10 мин нагревают в сушильном шкафу при 110 С, в результате чего сапонины (особенно аралозиды) проявляют ся в виде пятен вишневого цвета.

3. Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов. Реакция гемоли за эритроцитов. Для ее проведения используют кровь (или эритроциты крови). Необходимо, чтобы в крови было незначительное содержание холестерина, при сутствие которого может сдерживать гемолиз. Кроме того, требуется, чтобы рН был физиологическим (около 7,4), для чего взвесь эритроцитов разводят 0,9 % раствором NaCl. После смешивания равных объемов извлечения из ЛРС (содер жащего сапонины) и взвеси эритроцитов в физиологическом растворе через не которое время кровь становится прозрачной и ярко красной — происходит гемо лиз эритроцитов и выход гемоглобина в среду. Следует отметить, что различные сапонины имеют разный гемолитический индекс. Например, требуется 1 г сапо нинов синюхи обыкновенной для гемолиза 10 000 мл крови и 1 г сапонинов дио скореи ниппонской для гемолиза 600 мл крови, т. е. гемолитический индекс у са понинов синюхи выше, чем у сапонинов диоскореи. У солодки голой и конского каштана сапонины (сапонозиды) гемолитической активностью не обладают, а их агликоны — обладают.

Количественное определение содержания сапонинов в ЛРС. Единого метода количественного определения сапонинов пока нет. Ранее широко применяли гравиметрический метод, основанный на осаждении сапонинов холестерином, солями свинца, меди, магния, гидроксидом бария или концентрированными ма лополярными растворителями. Однако этот метод неспецифичен и дает завы шенные результаты.

Используются также методы спектрофотометрии. Например, в п е р в о м ме тоде берут порцию стероидных сапонинов, извлекаемых этанолом из диоскореи, прибавляют реактив Эрлиха (1 % раствор п диметил аминобензальдегида в четырех нормальном спиртовом растворе HCl), инкубируют 2 ч при 58 С, охлаждают и изме ряют оптическую плотность раствора. В д р у г о м методе спектрофотометрирова ние раствора проводят после осаждения глицерризиновой кислоты из ацетонового извлечения солодки голой 25 % раствором аммиака. В т р е т ь е м методе на хрома тограммах в парах ортофосфорной кислоты стероидные сапонины дают розовые пятна, ярко флуоресцирующие в УФ свете, что используют для флуориметрии.

Биологические свойства и фармакологическое действие

Все сапонины:

обладают гемолитической активностью (за исключением сои, солодки и конского каштана). Гемолитическая активность — это способность сапонинов образовывать комплексы со стеринами и, как следствие, поры в мембранах эри троцитов, что позволяет гемоглобину этих клеток свободно диффундировать в среду или в плазму крови, давая так называемую «лаковую кровь» — явление, от крытое Л. Федотовым в 1875 г.;

токсичны для организмов при попадании в кровь. Сапонины вызывают гемолиз эритроцитов и паралич ЦНС, прежде всего ее дыхательного центра. Поэтому введе ние этих веществ непосредственно в кровь недопустимо. Возможно пероральное применение препаратов сапонинов, так как они не всасываются ЖКТ;

даже в очень высоких разведениях (1 : 1 000 000) сапонины вызывают гибель холоднокровных животных (рыб, червей, лягушек), показано, в частности, их дест руктивное действие на жабры — орган дыхания, солевого обмена и осмотическо го давления у рыб и амфибий;

сапогенины (агликоны сапонинов) не обладают гемолитическими свойства ми и не токсичны для рыб и других холоднокровных животных.

Имеются особенности биологического действия стероидных и тритерпено вых сапонинов.

Стероидные сапонины проявляют:

фунгицидную активность: вызывается образованием комплексов стероид ных гликозидов со стеринами мембран грибных гиф. Это свойство используется для борьбы с патогенными грибами;

противоопухолевую активность: выявлена у ряда сапониновых гликозидов. Установлено, что за цитостатическую активность отвечает стериновый агликон и его полярность. Углеводная часть молекулы оказывает влияние на растворимость и со действует транспорту стероидных гликозидов через плазматические мембраны;

противосклеротическое действие: стероидные сапонины сдерживают раз витие атеросклероза, в частности снижают содержание холестерина в крови. Они