- •Краткий курс
- •Введение понятие о микробах
- •Методы исследования в микробиологии
- •Морфология и физиология микробов микроскопический метод исследования
- •Структура бактериальной клетки обязательные (постоянные) структурные элементы
- •Действие физических и химических факторовна микроорганизмы
- •Методы тепловой стерилизации
- •Основные положения работы централизованных стеридизационных отделений (цсо) в лечебно-профилактических учреждениях
- •Физиология бактерий
- •Выделение чистой культуры бактерий-аэробов занимает 3 дня:
- •1. День:
- •2. День:
- •3. День:
- •Генетика бактерий
- •Бактериофаги
- •Морфология и физиология грибов, актиномицетов, спирохет и простейших
- •Инфекция
- •Иммунитет
- •1.Общефизиологические факторы.
- •Специфические механизмы защиты. Антигены. Антитела.
- •Реакции иммунитета
- •Современные методы молекулярной биологии
- •Иммуноблоттинг
- •Характеристика некоторых реакции иммунитета (ри)
- •Медицинские иммунобиологические препараты
- •Характеристика вакцинных препаратов Классификация вакцин
- •Способы введения вакцин
- •Перспективы создания новых вакцин
- •Пример описания лечебных сывороток и иммуноглобулинов
- •1. Препараты экзогенного происхождения.
- •2. Препараты эндогенного происхождения.
- •3. Синтетические и химически чистые препараты.
- •Иммунокоррегирующая терапия
- •Пример описания препарата
- •Препараты из живых микроорганизмов или микробных продуктов
- •Пример описания
- •Диагностические препараты
- •Диагностические иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Примеры описания.
- •Диагностикумы
- •Примеры описания.
- •Аллергены
- •Пример описания
- •Диагностические бактериофаги
- •Пример описания
- •Иммунотерапия
- •Химиотерапевтические препараты антибиотики
- •Микрофлора тела человека
- •Основы санитарной микробиологии
- •Морфология и физиология вирусов
- •Частная микробиология
- •Бактерии - возбудители инфекций, передаваемых контактным путём возбудители раневых инфекций
- •Возбудители венерических инфекций
- •Бактерии - возбудители респираторных инфекций
- •Бактерии - возбудители кишечных инфекций
- •Бактерии - возбудители кровяных инфекций
- •Вирусы - возбудители контактных инфекций
- •Вирусы - возбудители респираторных инфекций
- •Вирусы - возбудители кишечных инфекций
- •Вирусы - возбудители кровяных инфекций
- •Патогенные грибы
Бактериофаги
БАКТЕРИОФАГИ - вирусы бактерий, которые обладают способностью лизировать бактериальную клетку или изменять ее свойства. Фаги размножаются в клетках чувствительных к ним бактерий.
Строение фага кишечной палочки (Т2)
Средние размеры фагов - 25-110 нм.
По характеру взаимодействия с чувствительной клеткой фаги различают:
а) вирулентные (дают литическую продуктивную инфекцию);
б) умеренные (вызывают лизогенизацию клетки). По специфичности различают:
а) полифаги (лизируют несколько видов бактерий);
б) монофаги (лизируют только один вид бактерий);
в) типовые фаги (лизируют не все штаммы данного вида, а лишь некоторые, принадлежащие к одому фаговару).
Этапы взаимодействия вирулентного фага с клеткой:
Адсорбция фага на специфических рецепторах клеточной стенки (с участием фибрилл и отростка).
Проникновение нуклеиновой кислоты фага внутрь бактериальной клетки (лизоцим отростка фага растворяет клеточную стенку бактерии в месте адсорбции, чехол сокращается, стержень проходит сквозь клеточную стенку и нуклеиновая кислота фага поступает внутрь бактериальной клетки, оболочка головки остается снаружи).
Синтез в клетке компонентов фага (проникшая нуклеиновая кислота фага вызывает полную перестройку метаболизма клетки; на рибосомах синтезируются белки фага, а в других участках клетки реплицируется его нуклеиновая кислота).
Сборка фаговых частиц и лизис клетки (нуклеиновая кислота наполняет белковые головки пристраивается отросток; лизоцим фага растворяет клеточную стенку бактерии, клетка лизируется, и из нее выходят 100-300 новых фагов; они внедряются в соседние клетки и также лизируют их; в результате мутная культура бактерий на жидкой среде просвегляется, а на плотной среде образуется колония фага - "стерильное пятно").
Взаимодействие умеренного фага с клеткой
Адсорбция фага и проникновение нуклеиновой кислоты происходит аналогично. Но проникшая в клетку ДНК фага встраивается в хромосому клетки, где может находиться в неактивном состоянии (под действием белка-репрессора) и наследоваться дочерними клетками после репликации хромосомы. Этот процесс называется лизогенизацией, а клетки, содержащие неактивный геном фага (профаг), называются лизогенными. Чтобы обнаружить в клетке профаг, надо подействовать индуцирующими агентами физическими (УФО, рентгеновскими лучами) или химическими. Они разрушают репрессор, с профага считывается информация, в клетке синтезируются компоненты фага и клетка лизируется. Этот процесс называется индукцией. В процессе лизогенизации может произойти конверсия фагом (изменение свойств бактериальной клетки). Так, если нетоксичную дизентерийную палочку (не продуцирующую экзотоксин) обработать умеренным дифтерийным фагом, некоторые клетки станут лизогенными и приобретут способность продуцировать экзотоксин.
Титрование фагов
Активность препарата фага определяется его титром. Титр фага - наибольшее его разведение, еще вызывающее лизис чувствительной культуры бактерий.
Фаги титруют следующими методами.
/. Титрование фага на жидкой среде
Готовят последовательные десятикратные разведения испытуемого фага в жидкой питательной среде; 10-1, 10-2, 10-3, и т.д. В эти разведения вносят чувствительную культуру бактерий. Пробирки инкубируют в термостате при 37°С 18-20 часов. Затем отмечают наибольшее разведение фага, ещё вызывающее лизис внесённой культуры (рост бактерий в этой пробирке отсутствует). Это разведение, и является титром фага. Например: "титр фага - 10-6"
2. Титрование фага на плотной среде
Чашку с плотной средой делят на несколько зон. Культуру чувствительных бактерий высевают сплошным газоном на поверхность среды. Затем в соответствующие зоны наносят по капле различных десятикратных разведений фага. После инкубации в термостате при 37°С 18-20 часов отмечают наибольшее разведение фага, ещё вызывающее лизис (образование "стерильного пятна").
Практическое применение фагов.
I. Вирулентные фаги применяют:
1) для лечения и экстренной профилактики (при угрозе заражения). Например:
брюшнотифозный
дизентерийный
холерный Эль-Тор,
коли - протейный,
стафилококковый,
гангренозные,
синегнойный и др.
для диагностики (с целью установления вида неизвестного микроба). Например: испытуемый микроб высевают сплошным газоном на чашку с плотной средой, на которую наносят каплю известного видового фага и инкубируют в термостате. Если культура бактерий соответствует данному фагу, образуется "стерильное пятно".
для фаготипирования с целью установления источника заражения (применяются типовые фаги). Если штаммы, выделенные от больного и предполагаемого источника лизирутотся одними и теми же типовыми фагами (принадлежат к одному фаговару), это подтверждает общность их происхождения.
Применение умеренных фагов:
на лизогенных бактериях изучают механизмы функционирования различных генов; с помощью трансдукции устанавливают локализацию генов на бактериальной хромосоме.
лизогенные бактерии ипользуются при поисках противоопухолевых веществ: если препарат обладает индуцирующими свойствами, т.е. он взаимодействует с нуклеиновыми кислотами, и его можно испытывать как противоопухолевый препарат.
лизогенные штаммы используют при изучении различных мутагенных факторов, например, в космических исследованиях - как индикаторы надежности защиты космических кораблей от жестких космических лучей: если по возвращению из космоса произошла индукция, и культура лизировалась, следовательно в корабль проникли космические лучи, т.е. защита корабля ненадежна.
умеренные фаги широко используются в генной инженерии. Модель "профаг - клетка" лежит в основе вирусогенетической гипотезы происхождения опухолей