Работа №1. Получение содержимого рубца.

Рубцовое содержимое получают через фистулу, а также с помощью пищеводного зонда или извлекают комок изо рта при отрыгивании. Рубцовую массу фильтруют через четыре слоя марли в чашечку, помещенную в теплую воду при температуре тела животного. Следует иметь в виду, что при незначительном понижении температуры инфузории в содержимом рубца быстро погибают.

Работа №2. Исследование кислот рубцового содержимого.

В рубце в результате интенсивных процессов сбраживания сахаров, крахмала и клетчатки образуется большое количество кислот брожения - уксусной, масляной и пропионовой в соотношение 65:20:15. Общая концентрация летучих жирных кислот (ЛЖК) колеблется в пределах 50-150 моль/л в зависимости от состава рациона и време­ни, прошедшего после кормления. Общее количество образующихся за сутки ЛЖК составляет: у коров - 4-4,5 кг, у бычков на откорме –1,2-1,6 кг, у овец - 0,2-0,5 кг. Реакция содержимого рубца телят-молочников колеблется от слабокислой до слабощелочной (рН - 6,8-7,2): с переходом на растительные корма она становится более кислой (рН -6,4-6,5). У взрослых животных величина рН содержимого рубца поддерживается на уровне 6,7-7,4. Поддержание оптимума рН обеспечивается непрерывным выделением щелочной слюны, нейтрализующей кислые продукты брожения, и интенсивным всасыванием образующихся ЛЖК.

1.Определение реакции содержимого рубца.

Методика. К I мл содержимого рубца прибавить 4 мл дистиллированной воды и 2 капли универсального индикатора. По окраске раствора определить величину рН содержимого в соответствии со следующей шкалой:

pH	Окраска
	Простой универсальный индикатор	ЭИВ-1
3	Розов.	Красно-оранжевая
4	Красн.	Оранжевая
5	Оранжевая	Желто-оранжевая
6	Желто-розовая	Лимонно-желтая
7	Желтая	Желто-зеленая
8	Бледно-желтая	Зеленая
9	Зеленая	Сине-зеленая
10	Сине-зеленая	Фиолетовая

В нормальных условиях при добавке индикатора исследуемый центрифугат приобретает желто-зеленую окраску (рН - 6,5-7,0). При кормлении животных кислым силосом и большим количеством легкосбраживаемых углеводов рН может быть ниже 6,0.

2. Реакция на кислоты брожения.

Методика.

а). Молочная кислота.

1. К 20 мл дистиллированной воды прибавить 3 капли 1%-ного хлорного железа, вода приобретает слегка желтоватый цвет. Разлить воду в пробирки и в одну из них прилить по каплям содержимое рубца, профильтрованное через бумажный фильтр. В присутствии молочной кислоты жидкость окрашивается в канареечно-желтый цвет.

2. В пробирку налить I мл 4% р-ра карболовой кислоты (Фенола) и прибавить 2 капли 1% р-ра хлорного железа. Добавлять дистиллированную воду, пока раствор не приобретет аметистового цвета. Сверху в пробирку вносить по каплям фильтрат рубцового содержимого. При наличии молочной кислоты наблюдать появление «дорожек» лимонно-желтого цвета.

б). Летучие жирные кислоты.

1. В пробирку налить 5-7 мл фильтрата рубцового содержимого и нагреть на пламени спиртовки. Над пробиркой, не касаясь ее, держать синюю лакмусовую бумажку. В присутствии летучих жирных кислот лакмусовая бумажка краснеет.

2. В колбочку отмерить 5 мл фильтрата рубцового содержимого и добавить 5 мл эфира. Закрыть пробкой, тщательно взболтать и дать отстояться. В пробирку налить 3мл дистиллированной воды с двумя каплями 1% р-ра хлорного железа и на этот раствор наслаивать пипеткой эфирную вытяжку из колбы. На границе жидкостей появляется темно-красное (реакция на уксусную кислоту) окрашивание. Прибавить к эфирной вытяжке в пробирке несколько капель спирта. При наличии масляной кислоты вытяжка окрашивается в оранжевый цвет.