Характеристика болезни
Особенности патогенеза
Развитие вирусной лейкемии происходит очень медленно, по типу скрытой инфекции и обусловлено генетической предрасположенностью животного к данной болезни, а также иммунологической недостаточностью его организма (первичные или вторичные иммунодефициты). Наиболее часто болезнь проявляется после воздействия неблагоприятных экзогенных и эндогенных факторов, например резкого изменения условий кормления и содержания, длительного переохлаждения и других дистрессов.
Возбудитель тропичен к клеткам лимфоидной и кроветворной тканей, поэтому его первичная репликация начинается в миндалинах глотки, а в дальнейшем распространяется на другие лимфоидные ткани, особенно на костный мозг, где под воздействием вируса происходит нарушение нормального гемопоэза и прогрессирующее разрастание опухолевой ткани (образование лимфосарком). В результате в крови больных животных появляется большое количество незрелых лейкоцитов (лейкоцитоз). При дальнейшем развитии патологического процесса вирус ВЛК обнаруживают в молоке, слюне, моче и кале больных животных, что становится важным фактором передачи возбудителя инфекции.
Описаны 3 группы вируса: А, В и С. Вирус А может передаваться от кошки к кошке. Вирусы групп В и С происходят от группы А. Вирус лейкоза группы С и, возможно, В более патогенен, чем вирус группы А. Внутри организма зараженной кошки могут также возникать другие, более патогенные, формы вируса А, относящиеся к этой же группе.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения
Вирус вызывает у кошек лейкоз, анемию, гломерулонефрит, остеосклероз и иммунодепрессивный синдром. Различают эритроидный, миелоидный и лимфоидный лейкоз. Лимфоидный лейкозможет быть 4-х типов: вилочковый, полицентрический, алиментарный и подлинная лейкемия. Наиболее распространены тимусная лимфосаркома и лимфатическая лейкемия.
Кроме того, вирус вызывает ретикулосаркому и гранулоэритромонозную лейкемию, а в некоторых случаях аутоиммунный гломерулонефрит, некоторые формы анемии, инфекционный перитонит, гломерулонефрит, фибросаркому и, возможно, карциному молочной железы. Считают, что FeLV вызывает атрофию вилочковой железы и истощение лимфоидной системы, что приводит к нарушениям иммунологической компетентности. По чувствительности к FeLV кошки могут быть разделены на 6 классов. Горизонтальная передача FeLV может происходить либо эпигенетически, либо путём контакта.
Лабораторная диагностика
Взятие материала. От больных и подозрительных на лейкоз животных берут кровь. Для гематологических исследований ее берут из вены с антикоагулянтом. Для серологических исследований используют сыворотку крови от животных в возрасте 6 мес и старше. Транспортируют в термосе со льдом.
От трупов берут кусочки пораженных органов: селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца, сычуга, матки, скелетных мышц. Транспортируют в свежем виде или в растворе консерванта (10%-ном формалине) в термосе со льдом.
Лабороторная диагностика. Проводят гематологические, гистологические и специфические исследования.
Гематологический метод основан на подсчете лейкоцитов периферической крови и выведении лейкоцитарной формулы. Для этого используют электронный счетчик или камеру Горяева. Из проб крови, где установлен лимфолейкоз, готовятмазки и подсчитывают клетки белой крови в зависимости от их морфологии.
У больных лейкозом повышено содержание лейкоцитов за счет клеток лимфоцитарного ряда, а также слабодифференцированных ретикулярных и антигенных (опухолевых) клеток.
У подозрительных на лейкоз животных гематологические исследования повторяют через равные интервалы (2—3 мес).
Для гистологических исследований из кусочков пораженных органов готовят специальные срезы и окрашивают гематоксилинэозином. У больных лейкозом наблюдают диффузную инфильтрацию клетками лимфоидного ряда разной степени зрелости, склеротические изменения и некрозы.
Помимо этого для подтверждения диагноза могут проводить индикацию и идентификацию вируса.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Используют серологические реакции, из которых наиболее чувствительны РДП (реакция диффузной преципитации) и ИФА (иммуноферментный анализ). Они позволяют обнаружить специфические антитела у инфицированных животных, начиная с 6-месячного возраста и старше. Это объясняется тем, что телята, выпаиваемые молозивом и молоком инфицированных кошек, получают материнские антитела, которые сохраняются до 6 мес.
РДП (реакция диффузной преципитации). Для постановки реакции используют диагностический набор, содержащий необходимые компоненты (специфический антиген и сыворотку к нему, отрицательную сыворотку). Реакцию ставят микро- или макрометодом по общепринятой методике, используя 0,8%-ный агар на трис-буфере. Учет проводят через 48 ч. Животные, сыворотки крови которых положительно прореагировали (полоса преципитации между испытуемой сывороткой и антигеном) в РДП (реакция диффузной преципитации), считаются зараженными лейкозом.
ИФА (иммуноферментный анализ). Применяют для обнаружения специфических антител в сыворотках крови, молоке и молозиве. Используются диагностические наборы для непрямого и конкурентного вариантов ИФА (иммуноферментный анализ). Данный метод в 100 раз чувствительнее РДП (реакция диффузной преципитации).
Другие серологические методы уступают по чувствительности (% выявляемости) РДП (реакция диффузной преципитации) и ИФА ,(иммуноферментный анализ) поэтому могут рекомендоваться в качестве дополнительных. К ним относятся реакции латексагглютинации (РЛА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция иммунной флуоресценции (РИФ), а также встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ).
Индикация и идентификация вируса. С этой целью применяют ПЦР (полимеразная цепная реакция) для обнаружения вирусного генома (провирусной ДНК), выделение вируса в культуре клеток и его индикацию в месте синцитиобразования, электронно-микроскопический метод, реакции бласттрансформации лейкоцитов (РБТЛ), а также обнаружение вирусных антигенов методом радиоиммунологического анализа (РИА).
ПЦР(полимеразная цепная реакция). Реакция позволяет обнаружить провирусную ДНК в патологическом материале через две недели после заражения. В диагностический набор входят праймеры, соответствующие участкам определенных генов некоторых структурных белков. Чувствительность данного набора достаточно высокая и позволяет выявлять до десяти копий ДНК в 1 мкг исследуемой пробы.
Тест синцитиобразования (ТСО). Основан на выделении инфекционного вируса в субкультурах и перевиваемых культурах клеток лимфоцитов, где он размножается с образованием многоядерных клеток (синцитиев), которые выявляются при окрашивании монослоя.
Электронно-микроскопический метод. Позволяет обнаруживать вирусные частицы в препаратах, полученных из краткосрочных культур клеток лейкоцитов крови, зараженных вирусом лейкоза, и из перевиваемых культурах клеток, сокультивируемых с инфицированными лимфоцитами. Вирионы обнаруживают в основном в межклеточном пространстве и на внешней мембране лимфоидных клеток. Они имеют ультраструктуру, характерную для онковирусов типа С.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Основана на способности лимфоцитов трансформироваться в переходные клеточные формы в питательной среде (в присутствии фитогемагглютинина) при определенном режиме культивирования (36 °С, 72 ч). Такие же процессы происходят in vivo у клинически здоровых животных. В препаратах, полученных в результате культивирования и окрашенных по Романовскому— Гимзе, определяют количество трансформированных лимфоцитов на 1000 учтенных клеток и выражают показателем бласттрансформации. Диагноз на лейкоз считается подтвержденным, если этот показатель не выше 35%.
РИА (радиоиммунологического анализа). Метод конкурентного радиоиммунного анализа позволяет обнаруживать вирусные антигены в краткосрочных культурах лимфоцитов крови инфицированных животных. Основан на конкуренции вирусного антигена, выделенного из зараженных клеток, с контрольным (специфическим) антигеном, меченным изотопом, за связывание со специфическими антителами. Метод — наиболее чувствителен и специфичен.