Упражнение 1. Изучение динамики распределения ионов
Цель работы: установить наличие активного транспорта ионов через кожу лягушки.
Ход работы
Перед началом опыта берут по 50 мл раствора NaCl и KCl и сливают в стаканчик. Затем определяют содержание ионов Na+ и К+ в растворе. Этим же раствором заливают обе половины камеры. Дальнейший анализ проводят через 5, 10, 15 и 20 мин. После каждого определения записывают показания прибора для ионов Na+ и К+. Для каждого отрезка времени рассчитывают разность потенциалов между внешней и внутренней поверхностью кожи (для определяемых ионов). Необходимо построить график изменения величины потенциала от длительности инкубации кожи лягушки.
Упражнение 2. Влияние ингибиторов и блокаторов на проницаемость кожи лягушки
Убедившись в изменении концентрации определенных ионов в растворе, необходимо выяснить их природу на препарате кожи. Порядок работы тот же, что и в предыдущем упражнении, с той лишь разницей, что в исследуемый раствор добавляют 1 мл ингибитора АТФ-азы (строфантин, оуабаин или блокатор SH-групп).
Рассчитать разность потенциалов между наружной и внутренней мембранами можно по следующей формуле:
Е=
,
где Е – мембранный потенциал, мВ; R – газовая постоянная; R=8,31 Дж/моль·К; Т – абсолютная температура, К; F – число Фарадея; F=96 485 Кл/моль; Naе – концентрация ионов Na вне клетки (на наружной стороне кожи); Nai – концентрация ионов Na внутри клетки (на внутренней стороне кожи).
Сделать выводы о проницаемости кожи лягушки в зависимости от условий опыта.
Контрольные вопросы
1. Опишите строение клеточной мембраны.
2. Охарактеризуйте транспорт веществ в клетке.
3. Что такое первично-активный и вторично-активный транспорт веществ?
4.Структура и функции Na, K-АТФ-азы.
5. Назовите ингибиторы Na, K-АТФ-азы.
6. Возможен ли синтез АТФ при работе Na, K-насоса?
7. На чем основан метод пламенной фотометрии?