Контрольные вопросы

1. Краткая характеристика потенциалов живой клетки.

2. Что такое потенциал покоя?

3. Назовите условия возникновения потенциала покоя?

4. Что такое потенциал действия?

5.Факторы, определяющие скорость проведения потенциала действия.

6. Как изменяется проницаемость мембраны для ионов натрия в фазе деполяризации?

Лабораторная работа № 7

Исследование влияния температуры на оптические свойства растворов оксигемоглобина

Цель работы: изучить оптические свойства растворов оксигемоглобина, модифицированного воздействием различных температур.

Выделение из крови оксигемоглобина

В опытах используют водно-солевые растворы оксигемоглобина в концентрации 5*10^-5 моль/л, который выделяют по методу Д. Л. Драбкина с модификацией Л. А. Блюменфельда из эритроцитов путем их осмотического гемолиза. Кровь, содержащую небольшое количество антикоагулянта (цитрат натрия или гепарин), смешивают с изотоническим (0,85 %) раствором хлорида натрия. Смесь центрифугируют в течение 10 мин при 6000 об/мин на центрифуге. Надосадочную жидкость, содержащую плазму и тонкий слой лейкоцитов, осторожно удаляют пипеткой Пастера. К осадку, содержащему эритроциты, добавляют 0,85% раствор NaCl, осторожно перемешивают и снова центрифугируют при тех же условиях.

К полученной отмытой эритроцитарной массе в качестве гемолизирующего агента добавляют дистиллированную воду. Гемолиз проводят в течение 3 мин при периодическом перемешивании. Мембраны эритроцитов осаждают центрифугированием в течение 15 мин при 8000 об/мин. Надосадочная жидкость содержит преимущественно раствор оксигемоглобина. Полученный раствор гембелка разбавляют до необходимой концентрации, которая контролируется спектрофотометрически с использованием формулы:

где [HbO₂] — концентрация оксигемоглобина; D₅₇₆, D₅₆₀, D₅₄₀- значения оптической плотности исследуемого раствора оксигемоглобина при длинах волн 576, 560 и 540 нм соответственно.

Ход работы

Приготовить раствор оксигемоглобина в концентрации 1*10^-5 моль/л.

Снять спектр поглощения раствора гемоглобина. Для дальнейших исследований выбрать тот светофильтр, при котором оптическая плотность образца имеет наибольшую величину, так как измерения необходимо проводить в области максимума поглощения исследуемого образца.

Нагреть термостат до необходимой температуры и поместить в него растворы гемоглобина.

Вариант 1. Растворы белка термостатировать при 35, 45 и 55°С в течение 20 мин.

Вариант 2. Растворы белка нагревать при 40°С в течение 10, 15, 30, 45 мин.

Вариант 3. Растворы белка нагревать при 50°С в течение 5; 10; 15; 20 мин.

Измерить оптическую плотность термомодифицированных растворов белка.

Сделать выводы об оптических свойствах растворов гемоглобина, модифицированных воздействием различных температур; о связи оптических свойств и структуры молекулы биополимера.

Контрольные вопросы

1. Основные характеристики оптического излучения.

2. Понятие об оптической плотности, светопропускании, светопоглощении; взаимосвязь между данными параметрами.

3. Закономерности поглощения света веществом.

4. Применение спектральных методов в биологии и медицине.

5. Связь оптических характеристик и структурного состояния биополимеров.

6. Оптическая плотность раствора D=0,08. Найдите его светопоглощение и светопропускание.

7. Интенсивность света, прошедшего через раствор, уменьшилась в 10 раз. Известно, что данное вещество имеет молярный коэффициент

8. поглощения на данной длине волны, равный 500 моль^-1 см^-1. Толщина кюветы с раствором 1 см. Найдите концентрацию вещества в растворе.

9. Чему равен молярный коэффициент поглощения вещества при длине волны 400 нм, если при прохождении света через раствор с концентрацией 0,5 моль/л интенсивность света уменьшилась в 5 раз? Толщина кюветы равна 0,3 см.