![](/user_photo/77507_BUGfG.png)
Методы исследования в медицинской бактериологии
.pdf
|
|
|
|
|
11 |
2 |
Умеренный |
Базовые |
Лаборатории |
Патогенный |
Сальмонеллы, |
|
индивиду- |
(основные) с |
службы здра- |
микроорганизм, |
микобактерии |
|
альный и |
защитными |
воохранения |
который может вызвать |
туберкулеза |
|
ограничен- |
устройствами |
первичного |
заболевание, но не |
|
|
ный |
и средствами |
звена, больницы |
представляет |
|
|
обществен- |
|
первичного |
серьёзного риска для |
|
|
ный риск |
|
звена, диаг- |
персонала, населения, |
|
|
|
|
ностические |
домашнего скота или |
|
|
|
|
лаборатории |
окружающей среды. |
|
|
|
|
|
Неосторожность в |
|
|
|
|
|
лаборатории может |
|
|
|
|
|
вызвать инфекцию, |
|
|
|
|
|
однако существуют |
|
|
|
|
|
доступные лечебные и |
|
|
|
|
|
профилактические |
|
|
|
|
|
меры. Риск |
|
|
|
|
|
распространения |
|
|
|
|
|
ограничен. |
|
3 |
Высокий |
Режимные |
Специальные |
Патогенный агент, |
Бруцеллы, |
|
индивиду- |
(изолирован- |
диагностиче- |
который обычно |
возбудитель |
|
альный и |
ные) или |
ские |
вызывает серьёзное |
сибирской |
|
низкий |
лаборатории |
лаборатории |
заболевание человека |
язвы |
|
обществен- |
удержания |
|
или животных, но, как |
|
|
ный риск |
|
|
правило, не |
|
|
|
|
|
распространяется от |
|
|
|
|
|
больного к здоровому. |
|
|
|
|
|
Существуют |
|
|
|
|
|
эффективные лечебно- |
|
|
|
|
|
профилактические |
|
|
|
|
|
процедуры. |
|
4 |
Высокий |
Особого |
Лаборатории |
Патогенный агент |
Возбудитель |
|
индивиду- |
режима |
особо опасных |
вызывает обычно |
чумы, вирус |
|
альный и |
(максимально |
инфекций |
серьёзное заболевание у |
Эбола |
|
высокий |
изолирован- |
|
человека или животных |
|
|
обществен- |
ные) или |
|
и легко |
|
|
ный риск |
лаборатории |
|
распространяется от |
|
|
|
максималь- |
|
больного к здоровому |
|
|
|
ного |
|
или опосредованно. |
|
|
|
удержания |
|
Эффективных мер в |
|
|
|
|
|
большинстве случаев не |
|
|
|
|
|
существует. |
|
В таблице 2 представлена взаимосвязь групп риска и уровней биобезопасности, практики и оборудования, представленная в “Практическом руководстве по биологической безопасности в лабораторных условиях” (третье издание, Женева, 2004 г.).
Таблица 2 - Взаимосвязь групп риска и уровней биобезопасности, практики и оборудования
Группа |
Уровень |
Тип лаборатории |
Работа в лаборатории |
Безопасное |
риска |
биобезопасности |
|
|
оборудование |
|
|
|
|
12 |
1 |
Базовый уровень |
Базовые учебные, |
Надлежащая техника |
Нет. Работа на |
|
биологической |
исследовательские |
микробиологических |
открытых столах |
|
безопасности 1 |
|
исследований (НТМ) |
|
2 |
Базовый уровень |
Службы |
НТМ и защитная |
Работа на |
|
биологической |
здравоохранения |
одежда, обозначение |
открытых столах и |
|
безопасности 2 |
первичного уровня, |
биологической |
в боксах |
|
|
диагностические и |
опасности |
биологической |
|
|
исследовательские |
|
безопасности (БББ) |
|
|
лаборатории |
|
для предохранения |
|
|
|
|
от потенциальных |
|
|
|
|
аэрозолей |
3 |
Изолированный |
Специальные |
Аналогично 2-му |
БББ и/или иная |
|
уровень |
диагностические |
уровню плюс |
первичная |
|
биологической |
исследовательские |
специальная одежда, |
изоляция для всех |
|
безопасности 3 |
лаборатории |
ограниченный |
видов работ |
|
|
|
допуск, управляемая |
|
|
|
|
вентиляция |
|
4 |
Максимально |
Лаборатории для |
Аналогично 3-му |
БББ класса III или |
|
изолированный |
работы с опасными |
уровню плюс |
костюмы с |
|
уровень |
патогенными |
входные боксы, |
притоком воздуха в |
|
биологической |
агентами |
душевые на выходе, |
сочетании с БББ |
|
безопасности 4 |
|
специальные стоки |
класса II, |
|
|
|
|
автоклавы с двумя |
|
|
|
|
крышками |
|
|
|
|
(вмонтированные в |
|
|
|
|
стены), воздушные |
|
|
|
|
фильтры |
В сводной таблице 3 представлены требования к оборудованию для каждого уровня биологической безопасности (заимствовано из Руководства ВОЗ).
Таблица 3 – Сводная таблица требований к биологической безопасности
Требования |
|
Уровень биологической безопасности |
|
|||
|
1 |
|
2 |
3 |
|
4 |
Изоляция лаборатории |
Нет |
|
Нет |
Да |
|
Да |
Герметичные камеры для |
Нет |
|
Нет |
Да |
|
Да |
обеззараживания |
|
|
|
|
|
|
Вентиляция: |
|
|
|
|
|
|
- приточная |
Нет |
|
Желательно |
Да |
|
Да |
- контролируемая |
Нет |
|
Желательно |
Да |
|
Да |
- с НЕРА-фильтрами на выходе |
Нет |
|
Нет |
Да/Нет |
|
Да |
Вход в виде бокса |
Нет |
|
Нет |
Да |
|
Да |
Воздушный бокс |
Нет |
|
Нет |
Нет |
|
Да |
Воздушный бокс с душем |
Нет |
|
Нет |
Нет |
|
Да |
Тамбур |
Нет |
|
Нет |
Да |
|
- |
Тамбур с душем |
Нет |
|
Нет |
Да/Нет |
|
Нет |
Обработка сточных вод |
Нет |
|
Нет |
Да/Нет |
|
Да |
Автоклав: |
|
|
|
|
|
|
- на месте работы |
Нет |
|
Желательно |
Да |
|
Да |
- в помещении лаборатории |
Нет |
|
Нет |
Желательно |
|
Да |
- автоклав с двумя крышками |
Нет |
|
Нет |
Желательно |
|
Да |
13
Боксы биологической безопасности |
Нет |
Желательно |
Да |
Да |
Индивидуальные средства контроля |
Нет |
Нет |
Желательно |
Да |
безопасности (системы |
|
|
|
|
телевизионного наблюдения, |
|
|
|
|
телефонная связь) |
|
|
|
|
Наиболее распространенными причинами возможного заражения в микробиологической лаборатории являются прямой контакт и манипуляции с культурами микроорганизмов, контакт с инфицированными животными, работа с применением контаминированного оборудования. Поэтому основным принципом биологической безопасности является ограничение распространения или предотвращение утечки инфицированного материала из лабораторной среды, в которой проводятся манипуляции с биологическими агентами. В связи с этим выделяют первичное и вторичное ограничение распространения биологического поражающего агента. Первичное ограничение распространения (защита персонала лаборатории и непосредственно среды лаборатории от воздействия инфекционных агентов) обеспечивается использованием специфических микробиологических приемов и методов работы, специальной защитной одежды и средств защиты и специального оборудования. Вторичное ограничение распространения (защита окружающей среды от воздействия инфицированного материала) обеспечивается инженерно-технологической конструкцией и технологическим оборудованием лабораторий.
14
2. Микробиологическая лаборатория
2.1. Устройство и оборудование микробиологической лаборатории
Деятельность бактериологических лабораторий в Российской Федерации регламентируется следующими основными документами:
-СанПиН 2.1.3.2630-10 “Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность”;
-СНиП-СП 1.3.2322-08 “Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней”;
-ГОСТ Р ИСО 15189-2015 “Лаборатории медицинские. Частные требования
ккачеству и компетентности”;
-Приказ от 22 апреля 1985 г. №535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клиникодиагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений”;
-СанПиН 2.1.7.2790-10 “Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами”.
Работа с возбудителями инфекционных заболеваний проводится в специализированных лабораториях. Такие лаборатории по своей структуре и оборудованию должны обеспечивать биологическую безопасность проводимых диагностических и экспериментальных исследований. Диагностические исследования проводятся для обнаружения и идентификации возбудителей, их антигенов или антител к ним, а экспериментальные исследования
осуществляются с живыми культурами возбудителей инфекционных заболеваний. Основные исследования, проводимые в микробиологических клинических лабораториях:
-диагностика инфекционных заболеваний;
-определение микробиологических показателей, характеризующих объекты окружающей среды;
-контроль напряженности специфического постинфекционного или поствакцинального иммунитета.
Структура микробиологической лаборатории зависит от задач и особенностей её деятельности. Микробиологические лаборатории, независимо от специализации, должны размещаться в чистых светлых помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Их следует изолировать от других исследовательских лабораторий. Микробиологические лаборатории целесообразно размещать в отдельном здании или в отдельной секции здания с изолированным входом. Эти помещения должны быть обеспечены электроэнергией, горячим и холодным водоснабжением, газом, снабжены эффективной вентиляцией и канализацией. Стены помещений облицовывают кафелем или окрашивают масляной краской светлых тонов. Полы покрывают керамической плиткой, а в некоторых помещениях (комната для переодевания, препараторская) в качестве покрытия полов используют линолеум. В лабораторных помещениях должна быть достаточная освещенность, обеспечивающая удобство в работе.
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou15x1.jpg)
15
Микробиологическая лаборатория должна иметь достаточное количество комнат, отдельный вход для сотрудников и для посетителей с тамбуром, обязателен гардероб и душевая. В составе лаборатории должны быть помещения для приема материала (приемная), автоклавные, моечная, помещения для хранения химреактивов, виварий и другие помещения. Часто в современных лабораториях виварий отсутствует, так как многие исследования на лабораторных животных заменяются методами, проводимыми in vitro.
При проведении исследований в лабораториях необходимо поддерживать чистоту. Кроме ежедневной влажной уборки помещения периодически обрабатывают растворами дезинфицирующих веществ (карболовой кислоты, хлорной извести, хлорамина и т. п.) и подвергают ультрафиолетовому облучению – текущая дезинфекция. При необходимости проводят заключительную дезинфекцию.
Типовое расположение оборудования в лаборатории для микробиологических исследований микроорганизмов 3-4 групп патогенности представлено на рисунке 1.
Рисунок 1 - Расположение оборудования в лаборатории для исследований микроорганизмов 3-4 групп патогенности. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Регистрация поступающего на исследование патологического материала проводят в приемной. Пол в ней должен быть бетонный (выложен кафельной плиткой), стены покрыты масляной краской или керамической плиткой. При входе в
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou16x1.jpg)
16
приемную располагают коврик, пропитанный дезинфицирующим раствором. В приемной размещают несколько столов, покрытых материалом, стойким к химическим веществам, емкость с дезинфицирующим раствором, письменный стол, стулья (рисунок 2).
Рисунок 2 – Приемная. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
В комнате для предварительной обработки материала проводят подготовку поступившей пробы для дальнейшего исследования. В комнате должны быть бокс с предбоксником. В боксе разбирают поступившие на анализ пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят другие предварительные исследования. В комнате для предварительной обработки материала располагают столы, шкафы со стерильными инструментами (ножницы, пинцеты, скальпели, корнцанги) и стерильной посудой для сбора материала, емкости с дезинфицирующими растворами.
Комнаты, предназначенные для непосредственной работы с патогенными микроорганизмами, должны быть хорошо освещены, и состоять из двух отделений, разобщенных стеклянной перегородкой. Эти отделения называются боксом и предбоксником (рисунок 3).
Рисунок 3 – Бокс и предбоксник для работы с микроорганизмами. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou17x1.jpg)
17
В боксах над рабочим столом на расстоянии 50-70 см от поверхности устанавливают бактерицидные лампы. Для этих целей можно использовать передвижную кварцевую лампу. Для обеззараживания воздуха широко используются бактерицидные облучатели настенные или потолочные. Открытые ультрафиолетовые лампы включаются только при отсутствии в помещениях людей. Экранированные бактерицидные облучатели могут использоваться в присутствии персонала. В последние годы широкое применение находят системы стерилизации воздуха непрерывного действия (например, ультрафиолетовая система стерилизации воздуха “Germredue”). В таких системах воздух с помощью насосов пропускается через камеру, в которой подвергается УФ-облучению. В боксе, кроме рабочих столов и стульев, должны быть все необходимые для работы принадлежности: стерилизаторы для инструментов, емкости с дезинфицирующими растворами для отработанных пипеток и другой стеклянной посуды, бак с дезраствором для сбора отработанных материалов, баночки со спиртом, йодом, штативы для пробирок, пробирки с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д.
У входа в бокс помещают коврик, пропитанный дезраствором. По мере высыхания дезраствора коврик смачивают. В предбокснике должны находиться сменная обувь (тапочки), стерильные халаты, шапочки, маски, которые одевают перед работой с культурами в боксе. В предбокснике можно размещать дополнительное оборудование: термостаты, холодильники, лабораторные центрифуги, микроскопы и другое оборудование.
Боксы и предбоксники, кроме ежедневной влажной дезинфекционной обработки, облучают бактерицидными лампами в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.
Альтернативой боксированного помещения являются вытяжные шкафы и ламинарные боксы (рисунок 4).
а б Рисунок 4 – Вытяжной шкаф (а) и ламинарный бокс (б). Заимствовано из Интернет-
ресурсов.
Проведение работ с непатогенными культурами, антигенными препаратами, диагностикумами и химическими реактивами проводят в обычных лабораториях. Потолок и стены лабораторных комнат покрывают масляной краской (кафельной плиткой), пол – линолеумом или кафельной плиткой. Лабораторию оборудуют
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou18x1.jpg)
18
термостатами, холодильниками, центрифугами, весами различных типов, электроплитками, водяными банями, электромагнитными мешалками и другими приборами, необходимыми для проведения исследований. Лабораторию снабжают в достаточном количестве биксами, фильтрами Зейтца, ящиками для хранения сред, эмалированной и стеклянной посудой – матрацами, флаконами, колбами разных объемов, градуированными пипетками, микропипетками, цилиндрами, стаканами, пробирками серологическими, бактериологическими и центрифужными, ампулами и резиновыми пробками разных размеров, металлическими или пластмассовыми штативами для пробирок, карандашами по стеклу, фильтровальной бумагой. В лабораториях для определенных операций закрепляют рабочее место. На столах размещают необходимую аппаратуру, соответствующие дезинфицирующие средства, краски, реактивы.
В автоклавной необходимо иметь два автоклава: для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов) и для инфицированных материалов (для обезвреживания заразного материала). Допускается наличие в автоклавной сухожаровых шкафов, сушильных шкафов, дистилляторов, столов и шкафов для стерильной посуды (рисунок 5).
Рисунок 5 – Автоклавная. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Моечная предназначена для мытья посуды и принадлежностей. В ней располагают машины для мытья посуды и стирки белья, сушильные шкафы, необходимую мебель. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после автоклавирования или использования другого способа дезинфекции. Оснащение моечной представлено на рисунке 6.
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou19x1.jpg)
19
Рисунок 6 – Моечная. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных и работы с ними. В виварии должно быть карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещение для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухня для приготовления кормов для животных, кладовая, фуражная и другие помещения. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга и иметь самостоятельные входы с дезинфицирующими ковриками. Кроме того, они должны быть недоступны для грызунов и насекомых. Виварий должен быть теплым, светлым и сухим (рисунок 7).
Рисунок 7 – Помещение для содержания лабораторных животных. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Лабораторных животных в виварии содержат в клетках или коробках с сетчатыми крышками (рисунок 8).
![](/html/77507/660/html_zvTOll6rGX.aZHy/htmlconvd-qV1Dou20x1.jpg)
20
Рисунок 8 – Коробки для содержания мелких лабораторных животных. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Водной клетке может быть 1-2 кролика, 5-6 морских свинок, 8-10 крыс, 1520 мышей. На каждой клетке с животными вывешивают паспорт с отметкой даты поступления в виварий, даты заражения и вида используемого инфицированного материала. Чистку клеток и уборку помещения вивария проводят ежедневно.
Набор помещений и их оснащение приборами и оборудованием могут варьировать в зависимости от целей и задач конкретной лаборатории с учетом группы патогенности микроорганизмов, с которыми осуществляются исследования
вданной лаборатории. При этом помещения лаборатории разделяют на “заразную” (“грязную”) зону, предназначенную для манипуляций с патогенными биологическими агентами и их хранения, и “чистую” зону, где не проводят работ с патогенными микробами и не хранят их.
В“чистой” зоне располагаются следующие помещения:
-гардероб для верхней одежды персонала;
-помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, помещения для приготовления питательных сред и др.);
-помещение для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды (стерилизационная);
-помещение с холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов;
-помещение для переодевания персонала в рабочую одежду;
-помещение для работы с документами и литературой;
-комната отдыха персонала;
-кабинет заведующего лабораторией;
-подсобные помещения;
-туалет.
В лабораториях, проводящих исследования с микроорганизмами 1-2 групп патогенности, в “заразной” зоне располагаются:
-лабораторные помещения, оснащенные боксами биологической безопасности, для проведения микробиологических исследований;
-блок для работы с инфицированными животными, состоящий из комнаты для приема и первичной обработки поступающего материала, комнаты для
заражения и вскрытия лабораторных животных, комнаты для содержания