диссертации / 81
.pdf121
Таблица 56
Концентрация цитокинов (пг/мл) в сыворотках больных РА и здоровых доноров
Цитокины |
ранний РA(n=37) |
Развернутый РА(n=81) |
Доноры(n=33) |
|
|
|
|
|
|
Ме (25-75 перцентиль) |
|
|
|
|
|
Провоспалительные |
|
|
|
|
|
|
|
IL-1β |
4,8(3,7-13,4)* |
5,59(3,840-9,65)* |
4,07(2,61-5,0) |
|
|
|
|
IL-6 |
47,0(28,1-240,1)* |
62,44(21,68-186,49)* |
7,78(4,5-13,1) |
|
|
|
|
IL-15 |
20,0(5,1-63,1)* |
27,9(10,52-73,36)* |
6,7 (3,92-17,4) |
|
|
|
|
TNF-α |
82,0(50,4-162,4)* |
67,68(36,26-135,49)* |
39,0(17,2-65,0) |
|
|
|
|
MIP-1α |
21,8(14,0-32,7)* ‡ |
11,67(8,94-20,36) |
10,82(8,84-18,1) |
|
|
|
|
Антивоспалительные |
|
|
|
|
|
|
|
IL-1ra |
430,2(130,1-942,0)* |
283,03(163,14-1907,19)* |
150,64(111,19-253,8) |
|
|
|
|
IL-10 |
43,6(26,6-131,0)* |
34,15(7,54-106,25) |
13,22(5,83-34,5) |
|
|
|
|
IL-13 |
24,8(17,3-71,0)* |
28,52(8,85-76,08)* |
16,69(9,9-22,4) |
|
|
|
|
Th1 |
|
|
|
|
|
|
|
IFN-γ |
2434,0(479,4-3376,0)* ‡ |
235,45(137,69-1463,41) |
285,35(112,2-1038,0) |
|
|
|
|
IL-2 |
50,0(12,0-296,6)* |
24,96 (9,71-115,22)* |
10,77(5,53-13,8) |
|
|
|
|
IL-12 |
16,0(7,3-97,3)* |
10,88 (5,29-143,82)* |
5,78(2,24-9,9) |
|
|
|
|
Th2 |
|
|
|
|
|
|
|
IL-4 |
6,0(2,5-12,9)* |
4,05(0,43-7,93) |
3,31(0,21-6,0) |
|
|
|
|
IL-5 |
5,1(3,9-10,2)* |
4,49(0,37-16,38) |
2,92 (0,2-5,2) |
|
|
|
|
122
|
|
|
Продолжение таблицы 56 |
|
|
|
|
Цитокины пг/мл |
ранний РA(n=37) |
Развернутый РА(n=81) |
Доноры(n=33) |
|
|
|
|
Th2 |
|
|
|
|
|
|
|
IL-9 |
116,3(53,0-811,0)* |
134,8 (58,66-833,35)* |
34,17(26,3-42,3) |
|
|
|
|
Эотаксин |
397,3(99,0-1544,3)* |
154,35(42,30-606,02) |
102,41(19,39-585,7) |
|
|
|
|
Th17 |
|
|
|
|
|
|
|
IL-17 |
82,0(45,0-121,0)* ‡ |
17,09(7,65-102,35) |
22,87(5,23-90,3) |
|
|
|
|
Колониестимулирующие факторы |
|
|
|
|
|
|
|
IL-7 |
22,6(8,8-65,5)* ‡ |
7,97(2,1-38,97) |
8,15(0,5-21,5) |
|
|
|
|
G-CSF |
164,53(56,89-838,69) ‡ |
24,23(9,90-82,20)* |
10,86(2,37-56,5) |
|
|
|
|
GM-CSF |
164,5(57,0-838,9)* |
71,06(31,85-405,95)* |
39,93(21,6-61,3) |
|
|
|
|
Стромальные и ангиогенные факторы |
|
|
|
|
|
|
|
FGF-2 |
36,2(25,7-69,8)* |
37,01(17,14-53,06) |
27,25(19,32-44,3) |
|
|
|
|
PDGF-ВВ |
29912,32(10329,17-4571,33) |
11862,42(6020,06-54889,46) |
26024,51(5854,75-56472,8) |
|
|
|
|
VEGF |
509,3(153,3-518,4)* |
285,17(83,72-656,31) |
205,6(64,0-313,0) |
|
|
|
|
Хемокины |
|
|
|
|
|
|
|
IL-8 |
14,92(10,14-17,62) ‡ |
7,20(4,07-16,61) |
12,47(4,76-9,0) |
|
|
|
|
IP-10 |
9454,0(1609,2-138,0)* ‡ |
606,05(257,24-8313,56) |
717,8(188,68-17831,0) |
|
|
|
|
MCP-1 |
84,63(21,38-254,75) |
91,68(41,65-187,12) |
48,59(22,26-6169,5) |
|
|
|
|
MIP-1β |
81,92(43,98-132,45) |
64,78(39,89-112,91) |
66,05 (49,36-99,5) |
|
|
|
|
RANTES |
1802,29(1802,29-6169,50) |
6169,50(1802,29-6169,50) |
1809,29(1802,29-6169,5) |
|
|
|
|
* - р<0,05 относительно здоровых доноров, ‡- р<0,05 между ранней и развернутой стадиями РА
123
Рисунок 17 Цитокиновый профиль при раннем РА, n=37 (А); развернутом РА, n=81 (Б); и
у здоровых доноров, n= 33 (В)
А
Б
В
Обозначения функциональных классов цитокинов: (П)-провоспалительные, (А)-антивоспалительные, (Th1)- Th1, (Th2)-Th2, (Th17)-Th17, (T-рег)-Т-регуляторные, (К)-колониестимулирующие, (СА)-стромальные и ангиогенные, (Х)-хемокины.
124
При развернутом РА отмечена корреляция уровней IL-1β,-5,-6,-9, FGF-2, GMCSF, TNF-α и СРБ; IL-1β,-6, G-CSF c DAS28 (табл. 57). При развернутом РА отмечена корреляция уровней IL-1ra,-2,-4,-6,-9,-12,-13,-15, FGF-2, GM-CSF, IFN-γ,
MIP-1α c содержанием кальпротектина (табл. 57). При раннем РА обнаружена корреляция IL-1β,-1ra,-2,-4,-5,-6-7,-9,-10,12,-13,- 15,-17, эотаксина, GM-CSF, IFN-
γ, MIP-1α c IgM РФ; IL-1β,-1ra,-2,-4,-6,-9,-10,-13,-15, эотаксина, GM-CSF, IFN-γ c IgA РФ; IL-1β,-2,-6,-12,-15, эотаксина, G-CSF, GM-CSF с АМЦВ (табл. 58). При развернутом РА обнаружена корреляция IL-1β,-1ra,-2-5,-6-9,-10,-12,-13,-15, G- CSF, GM-CSF, MCP-1, TNF-α c IgM РФ; IL-1β,-1ra,-2,-9,-12,-15, эотаксина, G-CSF, GM-CSF с IgA РФ; IL-1β,-1ra,-9,-15, G-CSF, GM-CSF, TNF-α c АЦЦП; а также IL- 1β,-1ra,-2,-9,-15, GM-CSF c АМЦВ (табл. 59). При раннем РА обнаружена обратная корреляция уровней TNF-α и FGF-2 с sRANKL, а также положительная корреляция концентраций с COMP и IP-10. При развернутом РА - положительная коррелция уровней IL-1ra, IL-4, IP-10 с MMП-3 (табл.60).
Таблица 57
Связь уровня цитокинов (r) с клинико-лабораторными показателями воспалительной активности при развернутом РА (n=81)
|
СОЭ |
СРБ |
Кальпротектин |
DAS28 |
|
|
|
|
|
n |
81 |
81 |
36 |
81 |
|
|
|
|
|
Провоспалительные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-1β |
0,17 |
0,40* |
0,07 |
0,40 |
|
|
|
|
|
IL-6 |
0,37 |
0,46* |
0,50* |
0,44* |
|
|
|
|
|
IL-15 |
0,10 |
0,25 |
0,20* |
0,33 |
|
|
|
|
|
TNF-α |
0,02 |
0,44* |
0,27 |
0,09 |
|
|
|
|
|
Антивоспалительные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-1ra |
0,09 |
0,26 |
0,25* |
0,17 |
|
|
|
|
|
IL-10 |
0,11 |
0,31 |
0,19 |
0,12 |
|
|
|
|
|
IL-13 |
0,25 |
0,34 |
0,24* |
0,16 |
|
|
|
|
|
Th1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IFN-γ |
0,04 |
0,20 |
0,20* |
0,01 |
|
|
|
|
|
125
Продолжение таблицы 57
|
СОЭ |
СРБ |
Кальпротектин |
DAS28 |
|
|
|
|
|
IL-2 |
0,09 |
0,21 |
0,3* |
0,08 |
|
|
|
|
|
IL-12 |
0,05 |
0,42* |
0,25* |
0,05 |
|
|
|
|
|
Th2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-4 |
0,03 |
0,22 |
0,24* |
0,03 |
|
|
|
|
|
IL-5 |
0,07 |
0,35* |
-0,03 |
0,05 |
|
|
|
|
|
IL-9 |
-0,03 |
0,63* |
0,34* |
-0,06 |
|
|
|
|
|
Эотаксин |
0,13 |
0,16 |
0,16 |
0,03 |
|
|
|
|
|
Th17 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-17 |
-0,09 |
0,14 |
0,10 |
-0,23 |
|
|
|
|
|
Колонистимулирующие факторы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-7 |
0,01 |
0,24 |
0,18 |
-0,01 |
|
|
|
|
|
G-CSF |
0,29 |
0,26 |
-0,02 |
0,47* |
|
|
|
|
|
GM-CSF |
-0,09 |
0,35* |
0,38* |
-0,11 |
|
|
|
|
|
Стромальные и ангиогенные факторы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
FGF-2 |
0,20 |
0,37* |
0,24* |
0,18 |
|
|
|
|
|
PDGF-ВВ |
0,12 |
0,21 |
0,08 |
0,10 |
|
|
|
|
|
VEGF |
0,18 |
0,12 |
0,17 |
-0,06 |
|
|
|
|
|
Хемокины |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-8 |
0,19 |
0,08 |
0,19 |
-0,15 |
|
|
|
|
|
IP-10 |
-0,09 |
0,14 |
0,14 |
-0,13 |
|
|
|
|
|
MCP-1 |
0,06 |
-0,14 |
0,18 |
0,08 |
|
|
|
|
|
MIP-1α |
0,06 |
0,23 |
0,30* |
-0,14 |
|
|
|
|
|
MIP-1β |
-0,08 |
-0,20 |
0,20 |
-0,13 |
|
|
|
|
|
RANTES |
-0,17 |
0,03 |
-0,09 |
-0,11 |
|
|
|
|
|
*-p<0,05
126
Таблица 58
Связь уровней цитокинов (r) с аутоантителами при раннем РА (n=37)
Цитокины |
IgM РФ |
IgA РФ |
АЦЦП |
АМЦВ |
|
|
|
|
|
IL-1β |
0,38* |
0,54* |
0,23 |
0,34* |
|
|
|
|
|
IL-1ra |
0,59* |
0,69* |
0,16 |
0,31 |
|
|
|
|
|
IL-2 |
0,56* |
0,68* |
0,09 |
0,38* |
|
|
|
|
|
IL-4 |
0,47* |
0,51* |
-0,04 |
0,21 |
|
|
|
|
|
IL-5 |
0,46* |
0,20 |
0,25 |
0,17 |
|
|
|
|
|
IL-6 |
0,48* |
0,64* |
0,23 |
0,42* |
|
|
|
|
|
IL-7 |
0,46* |
0,45 |
0,07 |
0,19 |
|
|
|
|
|
IL-8 |
0,18 |
0,24 |
-0,06 |
0,14 |
|
|
|
|
|
IL-9 |
0,78* |
0,88* |
0,05 |
0,22 |
|
|
|
|
|
IL-10 |
0,52* |
0,57* |
0,05 |
0,26 |
|
|
|
|
|
IL-12 |
0,49* |
0,43 |
0,15 |
0,35* |
|
|
|
|
|
IL-13 |
0,39* |
0,47* |
0,10 |
0,28 |
|
|
|
|
|
IL-15 |
0,43* |
0,55* |
0,29 |
0,36* |
|
|
|
|
|
IL-17 |
0,33* |
0,30 |
-0,14 |
0,04 |
|
|
|
|
|
Эотаксин |
0,51* |
0,52* |
0,15 |
0,34* |
|
|
|
|
|
FGF-2 |
0,28 |
0,36 |
0,14 |
0,16 |
|
|
|
|
|
G-CSF |
0,31 |
0,37 |
0,30 |
0,45* |
|
|
|
|
|
GM-CSF |
0,57* |
0,67* |
0,16 |
0,37* |
|
|
|
|
|
IFN-γ |
0,53* |
0,60* |
0,05 |
0,29 |
|
|
|
|
|
IP-10 |
0,21 |
0,25 |
-0,14 |
0,01 |
|
|
|
|
|
MCP-1 |
0,24 |
0,10 |
0,09 |
0,17 |
|
|
|
|
|
MIP-1α |
0,41* |
0,44 |
-0,03 |
0,12 |
|
|
|
|
|
MIP-1β |
-0,09 |
-0,16 |
-0,01 |
-0,06 |
|
|
|
|
|
PDGF-ВВ |
-0,13 |
0,06 |
-0,21 |
-0,16 |
|
|
|
|
|
RANTES |
-0,14 |
-0,23 |
0,17 |
0,08 |
|
|
|
|
|
TNF-α |
0,30 |
0,29 |
0,18 |
0,28 |
|
|
|
|
|
VEGF |
0,19 |
0,22 |
0,10 |
0,22 |
|
|
|
|
|
*-p<0,05 |
|
|
|
|
127
Таким образом, уровни цитокинов в сыворотке крови изменяются в зависимости от длительности РА. Цитокиновый профиль при раннем РА, в
отличие от РА длительностью более 6 мес., характеризуется более высокой концентрацией провоспалительных, Th1, Th17 цитокинов,
колониестимулирующих факторов и хемокинов. При РА уровни провоспалительных, антивоспалительных, Th1, Th2, Th17 цитокинов, и
колониестимулирующих факторов положительно коррелируют с концентрацией РФ и АЦБ в сыворотке крови. При развернутом РА обнаружена прямая взаимосвязь концентрации белков острой фазы воспаления (СРБ, кальпротектин)
с провоспалительными, Th1, Th2 цитокинами; активности заболевания – с
провоспалительными цитокинами, колонистимулирующими факторами;
показателей костного и хрящевого метаболизма - с антивоспалительными, Th2
цитокинами и хемокинами.
Таблица 59 Связь уровня цитокинов (r) с аутоантителами при развернутом РА (n=81)
|
IgM РФ |
IgA РФ |
АЦЦП |
АМЦВ |
|
|
|
|
|
IL-1β |
0,64* |
0,63* |
0,44* |
0,36* |
|
|
|
|
|
IL-1ra |
0,63* |
0,70* |
0,43* |
0,48* |
|
|
|
|
|
IL-2 |
0,57* |
0,67* |
0,39* |
0,39* |
|
|
|
|
|
IL-4 |
0,27 |
0,30 |
0,13 |
0,14 |
|
|
|
|
|
IL-5 |
0,41* |
0,32 |
0,23 |
0,16 |
|
|
|
|
|
IL-6 |
0,45* |
0,36 |
0,32 |
0,17 |
|
|
|
|
|
IL-7 |
0,26 |
0,14 |
0,12 |
0,11 |
|
|
|
|
|
IL-8 |
-0,08 |
-0,08 |
-0,21 |
-0,06 |
|
|
|
|
|
IL-9 |
0,78* |
0,67* |
0,47* |
0,69* |
|
|
|
|
|
IL-10 |
0,33* |
0,25 |
0,21 |
0,13 |
|
|
|
|
|
IL-12 |
0,58* |
0,61* |
0,31 |
0,29 |
|
|
|
|
|
IL-13 |
0,37* |
0,26 |
0,24 |
0,13 |
|
|
|
|
|
IL-15 |
0,63* |
0,59* |
0,42* |
0,35* |
|
|
|
|
|
IL-17 |
-0,05 |
0,12 |
-0,11 |
-0,05 |
|
|
|
|
|
128
|
Продолжение таблицы 59 |
|||
|
|
|
|
|
|
IgM РФ |
IgA РФ |
АЦЦП |
АМЦВ |
|
|
|
|
|
Эотаксин |
0,33 |
0,44* |
0,16 |
0,20 |
|
|
|
|
|
FGF-2 |
0,13 |
0,23 |
-0,01 |
0,13 |
|
|
|
|
|
G-CSF |
0,46* |
0,47* |
0,40* |
0,26 |
|
|
|
|
|
GM-CSF |
0,66* |
0,59* |
0,44* |
0,52* |
|
|
|
|
|
IFN-γ |
0,23 |
0,27 |
0,10 |
0,08 |
|
|
|
|
|
IP-10 |
-0,02 |
-0,04 |
-0,26 |
-0,08 |
|
|
|
|
|
MCP-1 |
0,41* |
0,71 |
0,28 |
0,34 |
|
|
|
|
|
MIP-1α |
0,04 |
0,22 |
-0,02 |
0,13 |
|
|
|
|
|
MIP-1β |
0,15 |
0,31 |
0,08 |
0,21 |
|
|
|
|
|
PDGF-ВВ |
-0,17 |
0,03 |
-0,17 |
-0,14 |
|
|
|
|
|
RANTES |
-0,05 |
0,04 |
-0,17 |
-0,02 |
|
|
|
|
|
TNF-α |
0,56* |
0,65 |
0,22* |
0,28 |
|
|
|
|
|
VEGF |
-0,12 |
-0,17 |
-0,12 |
-0,13 |
|
|
|
|
|
*-p<0,05
Таблица 60 Связь уровня цитокинов (r) с маркерами костного и хрящевого метаболизма
при РА
|
Ранний РА (n=32) |
Развернутый РА (n=34) |
|
|
|
|
|
Цитокины |
sRANKL |
COMP |
MMП-3 |
|
|
|
|
IL-1β |
-0,21 |
0,11 |
-0,09 |
|
|
|
|
IL-1ra |
-0,14 |
0,13 |
0,45* |
|
|
|
|
IL-2 |
-0,12 |
0,14 |
-0,08 |
|
|
|
|
IL-4 |
-0,25 |
0,28 |
0,39* |
|
|
|
|
IL-5 |
-0,18 |
0,32 |
-0,01 |
|
|
|
|
IL-6 |
-0,15 |
0,11 |
-0,19 |
|
|
|
|
IL-7 |
-0,16 |
0,25 |
0,31 |
|
|
|
|
IL-8 |
-0,32 |
0,17 |
-0,17 |
|
|
|
|
IL-9 |
-0,21 |
0,13 |
-0,13 |
|
|
|
|
IL-10 |
-0,28 |
0,05 |
-0,08 |
|
|
|
|
IL-12 |
-0,26 |
0,05 |
-0,00 |
|
|
|
|
129
Продолжение таблицы 60
|
Ранний РА (n=32) |
Развернутый РА (n=34) |
|
|
|
|
|
Цитокины |
sRANKL |
COMP |
MMП-3 |
|
|
|
|
IL-13 |
-0,27 |
0,03 |
-0,10 |
|
|
|
|
IL-15 |
-0,09 |
0,15 |
0,33 |
|
|
|
|
IL-17 |
-0,33 |
0,35 |
0,27 |
|
|
|
|
Эотаксин |
-0,14 |
0,13 |
-0,09 |
|
|
|
|
FGF-2 |
-0,43* |
0,08 |
0,03 |
|
|
|
|
G-CSF |
-0,02 |
0,01 |
0,29 |
|
|
|
|
GM-CSF |
-0,09 |
0,12 |
-0,04 |
|
|
|
|
IFN-γ |
0,02 |
0,20 |
0,14 |
|
|
|
|
IP-10 |
-0,26 |
0,42* |
0,35* |
|
|
|
|
MCP-1 |
-0,12 |
0,03 |
-0,1 |
|
|
|
|
MIP-1α |
-0,24 |
0,31 |
0,1 |
|
|
|
|
MIP-1β |
-0,05 |
0,19 |
0,33 |
|
|
|
|
PDGF-ВВ |
0,00 |
0,24 |
0,01 |
|
|
|
|
RANTES |
0,05 |
-0,32 |
0,01 |
|
|
|
|
TNF-α |
-0,47* |
-0,09 |
-0,08 |
|
|
|
|
VEGF |
-0,18 |
0,18 |
-0,05 |
|
|
|
|
*-p<0,05 |
|
|
|
3.5. Сравнение уровней биомаркеров ревматоидного артрита в крови и
синовиальной жидкости.
Обследовано 61 пациент с РА из них 10 с ранним РА и 53 с РА (табл.
61). Различий уровней исследованных биомаркеров в синовиальной жидкости в зависимости от стадии РА не обнаружено (табл. 63). В
синовиальной жидкости больных ранним РА по сравнению с сывороткой крови повышены уровни: СРБ, провоспалительных IL-6,-15,
антивосполительных - IL-10,-13 цитокинов, хемокинов- MCP-1, MIP-1α и
снижено содержание Th1 и Th2 цитокинов (IFN-γ и IL-9)
колониестимулирующего фактора IL-7 (табл. 63, рис. 18).
130
Таблица 61 Клинико-лабораторная характеристика больных РА при исследовании
уровней цитокинов в синовиальной жидкости.
|
Ранний РА |
Развернутый РА |
n |
10 |
53 |
Муж/жен |
8/2 |
38/15 |
Возраст (лет) |
52(42-55) |
51(43-61) |
Длительность (мес.) |
4,5(1,5-6) |
59(30-92) |
DAS 28 (баллы) |
5,9(4,9-6,2) |
4,6(3,6-5,4) |
СОЭ (мм/ч) |
61,0(33,0-70,0) |
36,0(24,0-50,0) |
СРБ (мг/л) |
33,9(19,3-46,2) |
27,0(9,1-43,4) |
IgM РФ (МЕ/мл) |
8,4(0,1-28,4) |
18,6(0,1-121,5) |
АЦЦП (Ед/мл) |
100,0(0,3-100,0) |
11,0(0,5-100,0) |
При развернутом РА в синовиальной жидкости по сравнению с сывороткой крови отмечено повышение концентрации СРБ,
провоспалительных: IL-1β,-6,-15, антивоспалительных: IL-1ra,-10,-13, Th17 – IL-17 цитокинов, ангиогенного фактора VEGF, хемокинов IL-8, IP-10, MCP- 1; одновременно были понижены уровни Th2 цитокина IL-4, стромального фактора PDGF-BB, хемокина RANTES (табл. 62, рис.19).
Таблица 62 Концентрация лабораторных биомаркеров в синовиальной жидкости
больных РА
|
ранний РА (n=10) |
РА(n=53) |
|
|
|
СРБ (мг/л) |
9,7(0,9-15,8) † |
13,1(4,2-23,8) † |
|
|
|
IgM РФ (МЕ/мл) |
5,8(0,1-61,0) |
48,6(0,1-146,9) |
|
|
|
АЦЦП (Ед/мл) |
94,8(0,7-100,0) |
38,3(1,0-100,0) |
|
|
|
АМЦВ (Ед/мл) |
535,6(0,3-985,5) |
35,7(0,1-201,5) |
|
|
|
Цитокины (пг/мл) |
|
|
|
|
|
IL-1β |
2,45(1,47-89,30) |
46,80(13,26-78,80)† |
|
|
|
IL-1ra |
2303,51(98,48-28383,24) |
3852,60(794,59-7158,46)† |
|
|
|
IL-2 |
0,78(0,02-24,36) |
29,77(4,18-130,07) |
|
|
|
IL-4 |
0,01(0,01-1,16) |
1,49(0,49-2,56)† |
|
|
|