диссертации / 19

равновесия [24]. При анализе результатов, полученных после проведения АОП, рассматривали приросты вышеуказанных показателей к исходным данным в состоянии покоя в %. Статистический анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР) включал изучение гистограмм по следующим показателям: d (или SDNN) – стандартное отклонение RR и вариационный размах (МхDMn), определяющих активность парасимпатического отдела; Мо

– мода, величина RR наиболее часто встречающаяся, характеризующая активность гуморального канала регуляции; АМо (%) – амплитуда моды, %

наиболее частых RR (Мо), отражающая активность симпатического отдела вегетативной нервной системы; ИН – индекс напряжения (ИН, усл.ед. =

АМо/2Мо MxDMn), характеризует степень централизации управления ритмом, является интегральным показателем определяющим напряженность адаптационно-компенсаторных механизмов организма [24]; ЧСС среднее – интегральный показатель; ИВР – индекс вегетативного равновесия; ИФС – индекс функционального состояния. На основании анализа временных и спектральных характеристик составлялось заключение по следующим параметрам: оценке текущего функционального состояния,

вагосимпатического баланса, реактивности отделов ВНС, возможностей адаптации и вегетативного обеспечения деятельности.

2.2.2. Офтальмологические методы исследования

Всем детям проводилось офтальмологическое обследование с применением современной диагностической аппаратуры.

Остроту зренияопределялис помощью проектора знаковОАП-250 «Carl Zeiss» (Германия), коррекцию осуществляли с помощью набора пробных очковых линз [8]. Клиническую (статическую) рефракцию в условиях циклоплегии после инстилляции раствора цикломеда 1% оценивали при помощи скиаскопии и автокераторефрактометра KR-890, «Topcon» (Япония).

Биомикроскопию выполняли на щелевой лампе SL-120, «Carl Zeiss»

(Германия) согласно стандартной методике [215].

41

Определение запасов относительной аккомодации осуществлялось по методике Э.С. Аветисова [5].

Осмотр глазного дна под мидриазом проводили с помощью непрямой бинокулярной офтальмоскопии с использованием линз V78C иVDGTL1, Volk (США).

Эхобиометрию осуществляли на аппарате HiScan, «OPTICON» (США) с

измерением переднезаднего размера глаза (ПЗО), глубины передней камеры,

толщины хрусталика.

Регистрацию аккомодационного ответа проводили с помощью автоматического аккомодографа Speedy-KverMF-1 (Япония) (рис. 5).

Рис. 5. Исследование аккомодационного ответа на автоматическом аккомодографе Speedy-KverMF-1 (Япония).

Исследование проводилось монокулярно. Пациенту предъявлялся зрительный стимул на различном расстоянии до глаза – из бесконечности до

20 см, проводилось определение рефракции, затем предъявлялся стимул с даннойрефракцией(создавались условия для эмметропии), изатемступенчато увеличивалась рефракция стимула на 0,5 Д: –0,5 Д, –1,0Д, –1,5 Д, –2,0 Д. и т.д. (до –5,0 Д). Во время исследования рефрактометр многократно измерял рефракцию глаза на фонепредъявляемойнагрузки, затем данныепоступалина компьютер, где обрабатывались и отражались в виде диаграмм на экране монитора. Для количественной характеристики и сравнительной оценки

42

динамики аккомодограммы оценивались показатели (коэффициенты),

характеризующие работу ресничной мышцы. Коэффициенты вычислялись автоматически при помощи разработанной специальной компьютерной программы. Коэффициент аккомодационногоответа (КАО)–отражаетстепень напряжения ресничной мышцы, зависит от соотношения аккомодационного ответа и аккомодационного стимула в каждой конкретной «ступени» исследования. Для оценки роста (убывания) аккомодограммы использовался коэффициент роста (КР) аккомодограммы. Коэффициент микрофлюктуационный (КМФ) – коэффициент изменения высокочастотных микрофлюктуаций ресничной мышцы [72].

2.3. Экспериментальные исследования

Экспериментальная работа проводилась на 22 кроликах-самцах породы

«шиншилла» с исходной массой тела 1,5-2,0 кг возрасте 2 месяцев.

Исследования проведены в соответствии с основными положениями международной резолюции ARVO (Ассоциации по офтальмологии и исследованию зрения). Работа проводилась совместно с главным врачом

«Ветеринарного центра хирургии, онкологии и терапии доктора Воронцова»,

канд. вет. наук Воронцовым А.А.

Моделирование близорукости осуществлялось с помощью установки в левую внутреннюю сонную артерию катетера Vasofix Certo 24G (B.Braun, Germany) [305] с последующим в течение 6 месяцев ежедневном введении 0,5

мл транс-ретиноевой кислоты в концентрации 0,06 мг/мл (Sigma –Aldrich,

USA) 10 кроликам первой группы (рис. 6). Животные второй группы (7

кроликов) с установленным интраартериальным катетером находились под наблюдением на протяжении всего эксперимента, однако, введение транс-

ретиноевой кислоты не проводилось. Третью группу – контрольную,

составили 5 животных.

Операция выполнялась под общим наркозом: для премедикации вводили 2% раствор ксилозина гидрохлорида (рометар). Через 10-15 мин.

43

внутривенно в краевую вену уха вводили золетил - 50 в дозе 6,6 мг/кг массы тела. Этапы операции представлены на рис. 6-8.

Рис. 6. Выделение левой внутренней сонной артерии кролика.

А) Б)

Рис. 7. Установка Vasofix Certо 24G в левую внутреннюю сонную артерию кролика (А) и ушивание раны (Б).

Рис. 8. Установленный катетер в левой внутренней сонной артерии кролика.

44

Правильное положение катетера контролировалось проведением рентгенограммы черепа в боковой проекции после введения 0,5 мл рентгенконтрастного вещества Омнипак (Amersham Health, Cork, Ireland) в

концентрации 300 мг/мл. (рис. 9).

Рис. 9. Рентгенограмма кролика, полученная при введении рентгенконтрастного вещества. Контрастируется левая внутренняя сонная артерия.

Эхобиометрические исследованияосуществлялинааппарате«Ultrasonic Biometer Model 820» (США). Клиническую рефракциюопределялиспомощью авторефрактометра «Mirae Optics (Charops) MRK-2000» (Япония).

Фоторегистрация глазного дна животных производили с помощью широкопольной цифровой педиатрической ретинальной камеры RetCam II, «Clarity Vedical Systems» (США).

Животные с установленным интраартериальным катетером после введения all-trans ретиноевой кислоты в дальнейшем были разделены на 2

подгруппы. Животным первой подгруппы (5 кроликов) ежедневно в течение

10 дней проводили внутрикожные инъекции в 3 точках орбитальной области верхних век левого глаза без введения лекарственных средств; во второй группе (5 кроликов) внутрикожные инъекции в орбитальной области верхних век левого глаза сочетались с введением препарата Церебрум-композитум в количестве 0,1 мл в каждую точку через день в течение 10 дней.

45

Кроликов выводили из эксперимента под общим наркозом.

Осуществляли внутривенную воздушную эмболию.

2.3.1. Морфологические исследования

Морфологическое исследование проводилось на базе кафедры морфологии медико-биологического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.

Пирогова Минздрава России совместно с канд. биол. наук Ставицкой Г.В.

Для оценки морфологических изменений со стороны ресничного тела и его отростков, радужки глазные яблоки после энуклеации погружали в охлажденный 2,5% раствор глутаральдегида на фосфатном буфере рН 7,2-7,4.

Затем кусочки ткани фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида на 0,2 М

какодилатном буфере, промывали в дистиллированной воде, обезвоживали в растворах ацетона восходящей концентрации и высушивали методом перехода через критическую точку. Полутонкие срезы, полученные на полозковом микротоме Richert, толщиной 6-7 мкм окрашивали гематоксилиномиэозиномпообщепринятойметодике[122].Гистологические препараты исследовали на световом микроскопе "Фотомикроскоп 3" ("Opton",

Германия). Фоторегистрацию осуществляли на цифровую камеру в комплекте аппаратно-программного комплекса автоматической морфоденситометрии

"Диаморфобъектив" (компания "ДиаМорф").

Для исследования методом трансмиссионной электронной микроскопии материал фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида в течение 4 часов с последующейпостфиксацией четырехокисью осмия в течение1 ч.Послеэтого образцы промывали в дистиллированной воде (2 смены по 30 мин),

обезвоживали в спиртах и окиси пропилена и заливали в эпон по общепринятой методике. Ультратонкие срезы готовили на специальном приборе LKB, окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца по общепринятой схеме и изучали на трансмиссионном электронном микроскопе

JEM-100.

46

Препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовали для

выявления общих особенностей гистоархитектоники тканей глаза и

проведения морфометрических исследований.

2.4. Метод лечения детей с прогрессирующей близорукостью

185 детей с простой близорукостью и близорукостью ассоциированной с НДСТ были разделены на 2 подгруппы. В каждой из которых в зависимости от технологии лечения выделено 4 категории воздействия: 1 – лечение проводилось только с помощью курсового воздействия ИНЭМП; 2 –

использовался метод биопунктуры без введения лекарственного вещества; 3 –

метод биопунктуры препаратом Церебрум-композитум; 4 – сочетанное применение воздействием ИНЭМП и биопунктуры препаратом Церебрум-

композитум (табл. 1).

Таблица 1.

Распределение детей с близорукостью по группам терапевтического воздействия

Интегрированная технология лечения заключалась в сочетанном применении биопунктуры препаратом Церебрум-Композитум в биологически активные точки и дополнительном воздействии ИНЭМП.

47

После выявления акупунктурных точек век BL1 (UB1), ST1, EX-HN7 (QIUHOU), GB 1, EX-HN4 (YUYAO) с помощью аппарата «AcuVision-04»

(рис. 10) [1] проводилась аппликация крема «Эмла» менее 1 г, накладывалась окклюзионная повязка на 15-20 минут (рис. 11) [165].

Рис. 10. Аппарат бесконтактной электроимпульсной и аэроионной терапии «Acu Vision» с визуализацией точек наименьшего кожного сопротивления.

Рис. 11. Схема акупунктурных точек.

Далее внутрикожно в область визуализированных биологически-

активных точек производился укол иглой для мезотерапии 30gх4мм с введением препарата Церебрум-композитум (табл. 2) в количестве 0,2 мл на каждую точку.

48

Таблица 2.

Состав гомеопатического препарата «Церебрум-композитум»

После чего осуществлялось воздействие ИНЭМП с помощью аппарата Инфита-М с постоянной сменой частоты воздействия 40-60-80-60-40-60-80- 60-40-60 Гц, с экспозицией не менее 9 минут при каждой процедуре (рис. 12).

Рис. 12. Аппарат Инфита-М (Россия).

49

Курс лечения состоял из 10 процедур, проводимых через день (патент на изобретение №2494708 от 09.06.2012 «Способ лечения прогрессирующей близорукости у детей»).

Воздействие ИНЭМП проводилось по следующей схеме: процедура 1 – 40 Гц, длительность 9 мин; процедура 2 – 60 Гц, длительность 9 мин; процедура 3 – 80 Гц, длительность 9 мин;

При последующих процедурах осуществляют воздействие ИНЭМП от аппарата ИНФИТА с изменением частоты воздействия на каждой процедуре:

60-40-60-80-60-40-60 Гц, с экспозицией не менее 9 минут при каждой процедуре. Таким образом, каждой процедуре соответствует своя частота ИНЭМП, что позволяет избежать проблемы привыкания к данному виду физиотерапевтического воздействия.

2.5. Статистическая обработка результатов

Статистический анализ результатов экспериментально-клинического исследования проводился согласно общепринятым методикам с помощью программных средств Microsoft Office 2007 для операционной системы

Windows-XP и программы STATISTICA 10.0. Статистические данные в условиях нормального распределения представлены средней арифметической

± ошибка средней арифметической (M±m). За достоверный показатель принималась разница величине р<0,01 (99% уровень значимости) и р<0,05

(95% уровень значимости).

50