3. Методы выделения из растительного сырья.

Выделение сердечных гликозидов ил растительного сырья можно разделить на следующие этапы: 1) экстракция сердечных гликозидов из растительного сырья; 2) очистка полученного извлечения; 3) разделение суммы сердечных гликозидов; 4) перекристаллизация и выделение индивидуальных сердечных гликозидов. Основная трудность при выделении сердечных гликозидов заключается в том, что это лабильные соединения, поэтому нарушение температурного режима на стадиях экстракции и упаривания может приводить к их разрушению. Наряду с этим в растениях присутствуют и другие группы веществ, имеющие стероидную структуру, в частности сапонины, которые изменяют растворимость сердечных гликозидов, образуют коллоидные растворы, что затрудняет их выделение. Кроме того, сердечные гликозиды очень чувствительны к изменению pН среды. В щелочной среде они превращаются в физиологически неактивные соединения, а в кислой среде гликозиды легко гидролизуются. Экстракцию сердечных гликозидов из растительного сырья чаше всего проводят метиловым, этиловым спиртами, 70-80% этиловым спиртом, хотя при получении некоторых лекарственных форм (настой) в качестве экстрагента используют воду. Если используются спирты, а также 70-80% спирт, минимизируются возможные процессы ферментативного растепления, поэтому создаются условия для выделения нативных сердечных гликозидов. Полученное спиртовое или водно-спиртовое извлечение, содержащее сумму сердечных гликозидов, подвергают очистке от сопутствующих веществ. Сопутствующими веществами могут быть как липофильные компоненты (хлорофилл, каротиноиды. липиды, стерины, смолы идр.), так и полярные вещества (сопутствующие гликозиды, полисахариды и др.). С целью очистки сердечных гликозидов от липофильных веществ извлечение упариваютдо небольшого объема (кубовый остаток) под вакуумом при температуре не выше 50-6(ГС и подвергают многократной обработке (3-4 раза) малополярными органическими растворителями (четыреххлористый углерод, гексан и др.). Дальнейшую очистку сердечных гликозидов, содержащихся в полярной фазе, от гидрофильных сопутствующих веществ осуществляют с использованием хроматографических методов, в частности, колоночной хроматографии на оксиде алюминия, силикагеле и друг их сорбентах. Эту операцию можно осуществлять не только па специальных хроматографических колонках, но и на обычных стеклянных фильтрах с высотой слоя сорбента 2-3 см ( в режиме фильтрации). Дли более тонкого разделения сердечных гликозидов хроматографический процесс осуществляют с использованием элюентных смесей различной полярности (в градиентном режиме).

Хроматографической очистке может предшествовать и обработка кубового остатка полярной органической фазой - смесью хлороформа с изопропиловым спиртом (3:1) или смесью хлороформа с этиловым спиртом (4:1), позволяющей извлекать сердечные гликозиды. Полученные элюаты (хроматографическая очистка, разделение)упаривают под вакуумом до небольшого объема и затем проводят перекристаллизацию целевых веществ до получения индивидуальных веществ или их очищенной суммы. Для установления строения сердечных гликозидов используются различные физике химические и спектральные методы, включая УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскоиию, масс-спектрометрию идр. Так, в УФ области спектра пятичленное лактонное кольцо обусловливает интенсивное поглощение при 215— 220 нм, тогда как в УФ-спектрах буфадиенолидов(шестичлеиное лактонное кольцо), наблюдается характерная полоса поглощении при 300 нм.