13. Методы изучения растительных клеток. Метод микроскопирования. Строение светового микроскопа. Приготовление временных и постоянных препаратов.
Методы изучения растительных клеток:
1) Световая микроскопия
2) Электронная микроскопия
3) Метод замораживания-скалывания
4) Дифференциальное центрифугирование
5) Метод культуры клеток
Методы микроскопии делятся на световую и электронную микроскопии.
Световая микроскопия - обеспечивает увеличение до 2–3 тысяч раз, цветное и подвижное изображение живого объекта, возможность микрокиносъемки и длительного наблюдения одного и того же объекта, оценку его динамики и химизма.
Изображение в световом микроскопе формируется вследствие того, что объект и различные его структуры избирательно поглощают свет с различной длиной волны.
Электронная микроскопия - позволяет обнаружить объекты, которые не разрешаются при использовании световых или ультрафиолетовых лучей.
Теоретически разрешение просвечивающего электронного микроскопа составляет 0,002 нм;
Реальное разрешение современных электронных микроскопов приближается к 0,1 нм. На практике разрешение для биологических объектов достигает 2 нм.
Строение
светового микроскопа:
Объектив — система линз, фокусирующая свет от объекта. Обычно имеется несколько объективов во вращающейся (револьверной) головке.
Окуляр — система линз, в которую смотрит наблюдатель.
Тубус, при помощи которого зафиксированы на определенном расстоянии окуляр и объективы.
Штатив.
Предметный столик, где располагается объект на предметном стекле.
Осветительная система — обычно лампа и система фокусирующих линз (конденсор).
Макровинт и микровинт для грубой и тонкой фокусировки соответственно.
Приготовление временных препаратов.
Изучаемый объект помещают на предметное стекло в каплю воды, глицерина, раствора, реактива или красителя и накрывают покровным стеклом. Такие препараты можно хранить в течение нескольких дней, поместив во влажную атмосферу.
Приготовление постоянных препаратов.
1.Фиксация материала. Сразу после окончания фиксации производится промывка материала или водой (после водных фиксаторов), или 80%-ным спиртом (после спиртовых фиксаторов).
2.Обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации. Параллельно происходит уплотнение материала.
3.Просветление. Это пропитывание материала растворителем парафина – ксилолом (бензолом, хлороформом).
4.Заливка в парафин. Это замещение ксилола парафином.
5.Окрашивание срезов.
6.Обезвоживание и просветление окрашенных срезов спиртом и ксиолом.
7.Заключение в среды (заливка).
14. Межклеточные связи - поры, перфорации, плазмодесмы. Типы, строение и значение в жизни растительного организма. Мацерация. Межклетники.
Межклеточные связи (контакты):
Плазмодесмы – цитоплазматические нити в клеточной стенке, соединяющие протопласт соседних клеток.
Плазмодесмы выглядят как узкие каналы (диаметром от 30 до 60 нм), выстланные плазматической мембраной.
Плазмодесмы возникают в период образования клеточной пластинки, по причине неполного слияния секреторных пузырьков, поступающих к микротрубочкам фрагмопласта. С полмощью плазмодесмы от клетки к клетке передаются различные вещества.
Перфорации – сквозные отверстия в смежных стенках члеников сосудов, предназначенные для прохождения воды.
Образование перфораций происходит путём ослизнения клеточных оболочек.
Сосуд – это длинная трубка, составленная ищщз мёртвых специализированных клеток – члеников сосудов.
Перфорации у члеников сосудов обычно располагаются на их поперечных стенках (реже и на боковых).
Боковые стенки сосуда (членика) содержат поры простые или окаймлённые.
Поры – перерывы во вторичной клеточной оболочке.
Пора представляет собой полость во вторичной оболочке, соединяющую полость клетки с внутренней частью её первичной оболочки.
Поры двух смежных клеток обычно располагаются друг против друга, образуя пару пор.
Пора имеет два отверстия: внутреннее, открывающееся во внутрь клетки, и наружное, обращенное к первичной клеточной оболочке.
По форме полости обычно различают поры 2-х типов:
1) простые - имеют вид радиальных каналов. Поровые каналы имеют одинаковый диаметр от наружного до внутреннего отверстия.
2) окаймлённые - в средней части поровой мембраны образуется линзовидное утолщение – торус, а её периферическая часть становится рыхлой и эластичной
Простой поры эти каналы могут иметь разную форму: чаще – округлую, реже – щелевидную
Мацерация- разъединение растительных клеток в тканях.
Естественная мацерация —результат растворения межклетного вещества. У растений мацерация наблюдается в мякоти созревающих плодов.
Межклеточники– полости между клетками.
Межклеточники могут формироваться при раздвижении соседних клеток, при разрыве и последующем отмирании или при растворении группы клеток.
Межклеточники улучшают газообмен в клетках, могут быть вместилищами разнообразных продуктов выделения, воды и воздуха. Они возникают при неполной мацерации.