Лабораторная диагностика микозов Учебное пособие для студентов факультета ветеринарной медицины очной и заочной форм обучения

2

УДК 619:616.992-07(075.8)

ББК 48.73я73 Л 12

Учебное пособие разработано в соответствии с Государственным образовательным стандартом высшего профессионального образования, утвержденным 23.12.2010 г.

Рассмотрены и рекомендованы к изданию редакционно-издательским советом ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА, протокол № __ от «__» ________ 2013 г.

Рецензент:

кандидат биологических наук, доцент Иванов И.С.

Составители:

В.В. Тихонова, кандидат биологических наук, доцент А.С. Вострухина, ветеринарный врач

Л 12 Лабораторная диагностика микозов: учеб. пособие / Сост.: В.В. Тихонова, А.С. Вострухина. – Ижевск: ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2013.

– 30 с.

Учебное пособие предназначено для студентов факультета ветеринарной медицины очной и заочной форм обучения, содержит основные методы диагностики микозов.

УДК 619:616.992-07(075.8)

ББК 48.73я73

©ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2013

©Тихонова В.В., Вострухина А.С., 2013

3

СОДЕРЖАНИЕ

Введение ……………………………………………………………………………4

1.Лабораторная диагностика поверхностных микозов ……………………….….5

2.Лабораторная диагностика глубоких микозов …………………………...……10

3.Лабораторная диагностика висцеральных микозов ……………...……………13

Список рекомендуемой литературы………………………………………………29

4

Введение

Грибы – многочисленная широко распространенная в природе группа организмов, включающая в себя около 100 тыс. видов. Грибы являются растительными гетерофильными бесхролофилловыми организмами, содержащими в клетках истинные ядра. Помимо высокого уровня клеточной организации, микроорганизмов этой группы характеризуют морфологическое разнообразие, сложные жизненные циклы, половые и бесполые циклы размножения. Грибы могут существовать в виде одноклеточных микроорганизмов (дрожжи, дрожжеподобные грибы), однако чаще им свойственен мицелиальный тип строения. Мицелий (грибница) представляет собой совокупность ветвящихся гиф (нитей), составляющих вегетативное тело гриба.

Большинство грибов является свободно живущими обитателями различных естественных субстратов окружающей среды, и только немногие из них могут выступать в качестве возбудителей заболеваний.

Микроскопические грибы вызывают микозы — специфические болезни различных видов сельскохозяйственных животных, зверей, рыб, пчел, растений и человека.

Выделяют 3 группы микозов животных:

1.Поверхностные микозы кожи и ее производных (волосы, когти) – дерматомикозы (трихофития, микроспория, фавус).

2.Вторая группа – глубокие микозы кожи, характеризующиеся появлением узлов в собственной коже и образованием язв по ходу лимфатических узлов (возбудитель эпизоотического лимфангита).

3.Третья группа – висцеральные микозы с локализацией процесса в органах дыхания или других органах (возбудители кандидамикоза, пенициллиомикоза, аспергиллеза, мукоромикоза, кокцидиоидомикоза).

5

Занятие 1. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПОВЕРХНОСТНЫХ МИКОЗОВ

Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами микологического исследования и этапами лабораторной диагностики трихофитии, микроспории.

Оборудование и материалы. Материал от животных, пораженных трихофитией и микроспорией, питательные среды, препаровальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, смесь воды, спирта, глицерина (поровну), 20%-й раствор гидроксида натрия или гидроксида калия, 50%-й водный раствор глицерина, плакаты, таблицы, биопрепараты.

Дерматомикозы – это заболевания кожи и ее производных. Восприимчивы сельскохозяйственные животные всех видов (преимущественно молодняк), пушные и хищные звери. У людей инфицированию более подвержены дети. Важным фактором заражения служит мацерация кожи.

Возбудители дерматомикозов — грибы дерматофиты, принадлежат к высшим, несовершенным (класс Deuteromycetes) грибам, широко распространены в природе. Они паразитируют на ороговевших субстратах, выделяя кератиназу, разлагающую кератин эпидермиса, волос, ногтей. К дерматофитам относят представителей трех родов: Trichophyton, Microsporum, Achorion (более 40 видов). В быту трихофитию и микроспорию

появлением на коже округлых или овальных облысевших очагов с мягкими, иногда сухими корочками в области головы. Поражения могут распространятся по поверхности тела животного.

При поверхностной форме размер повреждений 1...5см в диаметре, иногда развиваются более обширные очаги. Корки легко отделяются вместе со склеенными волосами, под ними на слегка влажной поверхности кожи торчат обломавшиеся волосы, кое-где встречаются папулы и пузырьки.

При глубокой форме болезни наблюдают несколько очагов поражения с ярко выраженными экссудативными и воспалительными процессами, инфильтрацию, большое количество фолликулярных пустул. Встречаются множественные экссудативные поражения. Все очаги покрыты засохшим серозно-гнойным экссудатом. При удалении корок обнаруживают эрозии. Часто отмечают осложнения секундарной инфекцией.

Основные возбудители трихофитии: у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, оленей — T. verrucosum (син. T. faviforme), реже T. mentagrophytes; у лошадей — Т. eguinum и Т. mentagrophytes; у овец и коз — Т. verrucosum, Т. mentagrophytes; у свиней — Т. mentagrophytes; у верблюдов

— Т. verrucosum, Т. sarkisovi; у собак и кошек— Т. mentagrophytes (кошки редко болеют трихофитией); у пушных зверей и кроликов — Т.

6

mentagrophytes, редко Т. verrucosum; у лабораторных животных (мыши, крысы, хомяки, морские свинки) — Т. mentagrophytes; у птиц — Т. gallinae. Этот возбудитель известен давно как возбудитель парши (фавуса) преимущественно у рода куриных. Раньше болезнь называли «белый гребень».

Микроспория. Инфекционное заболевание кожи и ее производных. Появление очагов поражения сопровождается воспалительным процессом, обламыванием и выпадением волос, иногда наблюдают поражение когтей.

Основные возбудители микроспории: у кошек и собак — М. canis (син.

М. lanosum); у лошадей — М. eguinum, редко М. distorum и М. gypseum; у

свиней — М. canis; у пушных зверей, кроликов — М. canis; у лабораторных животных — М. canis; у крупного рогатого скота и овец — М. canis и М. gypseum. Микроспорией болеют дикие звери, а также животные зоопарков и цирков.

Лабораторная диагностика трихофитии и микроспории.

Лабораторная диагностика основана на результатах микологического исследования.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии и люминесцентного анализа, выделение чистой культуры посевом на специальные питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим свойствам.

Материал для исследования.

В лабораторию направляют соскобы с пораженных частей тела животного вместе с корочками и чешуйками, пораженные волосы с участков, граничащих со здоровой кожей.

Микроскопический метод.

Чаще готовят неокрашенные (нативные) препараты. Исследуемый материал помещают в чашки Петри, измельчают ножницами и расщепляют с помощью скальпеля. Затем кусочки волос, чешуек, корочек переносят на предметное стекло, наносят каплю 20%-го раствора гидроксида натрия или гидроксида калия и слегка подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. После этого добавляют каплю 50%-го водного раствора глицерина. На приготовленный препарат накладывают покровное стекло и просматривают сначала под малым увеличением сухого объектива (х 8), затем с объективом х 40 или с помощью иммерсионной системы.

С целью дифференциации грибов рода Trichophyton и Microsporum учитывают характер расположения спор в пораженном волосе (цепочками или мозаичное), пользуясь следующими критериями:

Род Microsporum

Споры мелкие (З...5мкм), беспорядочно располагаются у основания волоса (иногда образуя чехлы) или на его поверхности. Споры резко преломляют свет и плотно прилегают друг к другу. Искривление мицелия и распад его на споры обусловливают характерное для микроспория мозаичное расположение спор. В чешуйках встречается ветвящийся мицелий.

7

Род Trichophyton

Гриб располагается снаружи или внутри пораженного волоска в виде рядов септированного мицелия. Споры округлые или овальные, располагаются цепочками, как и мицелий, вокруг или внутри волоса. В чешуйках и на ранних стадиях поражения встречается ветвящийся мицелий. Споры T. verrucosum и Т. eguinum более крупные, чем споры T. mentagrophytes.

Люминесцентный анализ.

Исследуемый материал помещают в чашки Петри на расстоянии 20 см от ртутно-кварцевой лампы ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда и просматривают под ультрафиолетовыми лучами в затемненном помещении. Пораженные возбудителем микроспории волосы дают яркое зеленоватое свечение. Корочки, чешуйки не светятся. Кроме того, с помощью люминесцентного анализа проводят раннюю диагностику атипичных и скрытых форм микроспории.

Обнаружение мицелия гриба и различных спор в материале — достаточное основание для постановки диагноза на дерматомикозы.

Микологический метод.

Культуры выделяют в сомнительных случаях для подтверждения диагноза. Для получения чистой культуры грибов отдельные волосы или фрагменты кожи, корочки высевают на специальные питательные среды — агар Сабуро, сусло-агар, МПА, содержащий 2 % глюкозы, агар Чапека и некоторые другие. Чтобы освободить исследуемый материал от сопутствующей микрофлоры, перед посевом на питательные среды его обрабатывают 60%-м этанолом в течение 5...7 мин, а затем дважды отмывают дистиллированной водой и подсушивают в термостате при 37 °С, или же в питательные среды добавляют антибиотики (пенициллин, стрептомицин и др.) из расчета 100...200 ЕД/мл. Посевы инкубируют при температуре 26...28 oС 20...30сут и более. У выросших культур грибов изучают культуральные и морфологические свойства. Готовят препараты «раздавленная капля» и микроскопируют. При идентификации видов грибов руководствуются признаками, изложенными в таблице 1.

Таблица 1. Дифференциальные культуральные и морфологические признаки грибов-дерматофитов

8

Задания для самостоятельной работы.

1.Промикроскопировать готовые препараты из материала от животных, больных дерматомикозом.

2.Записать характеристику возбудителя по схеме

Таксономия:

Отдел_____________________________________________

Семейство_________________________________________

Род_______________________________________________

Вид_______________________________________________

Морфология:_______________________________________________________

__________________________________________________________________

Культуральные свойства:____________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

9

Ферментативные свойства:__________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Патогенность:______________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Токсигенность:_____________________________________________________

__________________________________________________________________

Антигенная структура:______________________________________________

__________________________________________________________________

Источник инфекции:________________________________________________

__________________________________________________________________

Пути передачи:____________________________________________________

__________________________________________________________________

Патогенез: ________________________________________________________

__________________________________________________________________

Клиника:__________________________________________________________

__________________________________________________________________

Иммунитет:________________________________________________________

__________________________________________________________________

Специфическое лечение:_____________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Специфическая профилактика:_______________________________________

__________________________________________________________________

3. Изучить культуральные свойства возбудителей трихофитии и микроспории.

4.Записать схему выделения возбудителей дерматомикозов.

1.Этап. Материал_________________________________________

2.Этап. 1) Учет культуральных свойств:

2)Микроскопия препарата «раздавленная капля»:

3)Дифференциация грибов-дерматофитов.

10

3. Этап. Заключение о полученном виде.

5. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы:

1. Какие микроорганизмы вызывают дерматомикозы?

2. По каким критериям дифференцируют грибы родов

Trichophyton и Microsporum?

Занятие 2. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЛУБОКИХ МИКОЗОВ

Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами микологического исследования и этапами лабораторной диагностики эпизоотического лимфангита.

Оборудование и материалы. Материал от животных, питательные среды, препаровальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, смесь воды, спирта, глицерина (поровну), 50%-й водный раствор глицерина, плакаты, таблицы, биопрепараты.

Эпизоотический лимфангит (бластомикоз, африканский сап).

Хроническое заболевание животных. Характеризуется поражением лимфатических узлов, лимфатических сосудов и подкожной клетчатки с образованием язв, абсцессов и узелков. В отличие от дерматомикозов поражены более глубокие слои кожи. Болеют однокопытные животные:

Возбудитель эпизоотического лимфангита — Histoplasma farciminosus (син. Criptococcus farciminosus). Классификация криптококка неясна: одни исследователи причисляют его к бластомицетам, другие на основании некоторых биологических данных – к несовершенным грибам.

Лабораторная диагностика эпизоотического лимфангита основана на результатах микологического и серологического исследований.

Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя при микроскопии препаратов-отпечатков из исходного материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и серологическим свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют содержимое абсцессов, гнойный экссудат язв.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Готовят препарат «раздавленная капля». Чаще микроскопируют неокрашенный препарат или красят по Граму или Романовскому-Гимзе. Благодаря окраске гранулы в цитоплазме хорошо различимы. Возбудителя эпизоотического лимфангита относят к дрожжеподобным грибам. В исследуемом материале