Вопрос 104 Требования к химико-токсикологическому анализу острых отравлений. Подготовка проб. Выбор методов. Методология анализа.

Требования, предъявляемые к ХТА в диагностике острых отравлений:

• Время проведения – 1-2 часа.

• Точность используемых методов (±10%), специфичность, высокая чувствительность.

Этим требованиям отвечают следующие физико-химические методы анализа:

1. Хроматографические: ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ.

2. Спектральные методы: спектроскопия в УФ- и видимой областях спектра.

Выбор метода анализа определяется физико-химическими свойствами токсических веществ, а также способами их выделения из биолог. среды. Для быстрого выполнения лабораторного анализа необходимо знать первичный клинический диагноз отравления.

Химико-токсикологический анализ:

ХТА состоит из следующих стадий: отбор пробы, подготовка и переведение её в форму, удобную для анализа; разделение, обнаружение и количественное определение; обработка результатов и их интерпретация; оформление и выдача заключения.

Цель пробоподготовки – приведение вещества в состояние, необходимое для проведения анализа

Задачи пробоподготовки – изолирование вещества, очистка и концентрирование пробы. От этого зависит полнота выделения искомого вещества из объекта (вещество не должно подвергаться химическим изменениям)

Методы – экстракция, дистилляция, сорбция, минерализация и др. 

Процесс пробоподготовки:

• Измельчение твердого объекта

• Лиофилизация (обезвоживание)

• Депротеинирование (удаление белков)

• Удаление липидов

• Гидролиз коньюгатов (при необходимости)

Методы обнаружения:

1. Предварительные испытания: могут иметь «-» судебно-химическое значение (в случае «-» результата дальнейшее исследование на в-во или группу в-в не проводится)

Методы: цветные реакции, ТСХ, иммуноферментные методы

2. Подтверждающие испытания: проводят для подтверждения результата

Методы: инструментальные – хроматографические, спектральные и др.

Методы, используемые в качестве подтверждающих, могут являются методами количественного определения

Принципы структуры хта:

1. Предварительные и подтверждающие испытания проводятся методами, основанными на разных принципах

2. Предварительные методы должны быть достаточно чувствительны, но не обязательно высоко специфичны; должны охватывать широкий круг токс. в-в

3. Подтверждающие методы должны быть выше или равными по чувствительности предварительным и более специфичными, чем предварительные

4. Результаты должны отличаться особой надежностью, т. к. имеют юридические последствия

5. Методы количественного определения должны быть апробированы на той биологической матрице, которая будет использоваться для анализа

6. Проводят не менее двух количественных определений для каждого объекта

Пробоподготовка: см. вопрос 49

Вопрос 105 Направленность анализа в зависимости от клинических данных. Принцип рационального сочетания методов.

По направленности ХТА разделают на предварительный и подтверждающий.

Цель предварительного анализа – обнаружить или исключить из анализа группу веществ или какое-либо индивидуальное вещество. Таким реакциям или методам придают «судебно-химическое значение при отрицательном результате».

Предварительные реакции и методы должны быть чувствительными, но необязательно специфичными. Среди них – скрининговые методы (ТСХ, ГЖХ - скрининг, иммунохимические методы) и реакции, которые оцениваются как имеющие значение при отрицательном результате: групповые реакции осаждения, хромогенные реакции и др. Эти способы и реакции должны быть обязательно подтверждены химическими и физико-химическими методами. Предварительные реакции и методы, как правило, не позволяют определить индивидуальные вещества.

Цель подтверждающего анализа – определение наличия в пробе каких-либо определенных веществ или групп веществ. Среди них методы ВЭЖХ, ГЖХ, ТСХ, УФ- и ИК-спектрометрия, спектрофотометрия в УФ области спектра, масс-спектрометрия, хроматомасс-спектрометрия, люминесцентный анализ, аналитические реакции разных типов (кислотно-основные, окислительно-восстановительные, комплексообразования), микрокристаллоскопический метод, фармакогностический анализ, фармакологические пробы, а также процессы осаждения, экстракции и др.

Подтверждающие методы по чувствительности обычно выше или равны предварительным методам исследования. Это позволяет снизить возможность получения ложноотрицательных результатов. По специфичности подтверждающие методы обычно превосходят предварительные, что снижает количество ложноположительных рез-тов.

Рационально использовать эти методы в комплексе для получения точных и достоверных результатов.