Вопрос 130 Газо-жидкостная хроматография как современных метод разделения, идентификации и количественного определения «летучих» ядов.

Методика ГЖХ «летучих» ядов основана на исследовании не самой биологической жидкости (крови, мочи), а газовой фазы, находящейся над ней.

Этот способ назван парофазным анализом (ПФА) или анализом равновесного пара.

Методика исследования. ХИМИЗМ.

1. 0,5 мл ТХУ + 0,5 мл пробы

2. Перемешивают

3. 0,35 мл NaNO2

4. 30 раз взболтать маятником

5. Подождать 1 минуту

6. Отобрать 0,2 см3 газовой фазы

7. Хроматографируют и строят градуировочный график

Химизм ГЖХ (для спиртов)

R-OH + NaNO₂ + H⁺(среда) -> R-NO₂ + H₂O

В процессе хроматографирования отмечают время выхода отдельных пиков. Идентификацию вышедших из колонки веществ проводят по времени удерживания, которое рассчитывают от момента введения пробы в дозатор до момента появления максимума пика на хроматограмме.

Результаты подтверждаются химическим методом. Если при проведении газохроматографического скрининга получен отрицательный результат, т.е. на хроматограмме не обнаружено пиков, характеризующих присутствие какого-либо ядовитого вещества, делают вывод о ненахождении группы «летучих» ядов в объекте.

Количественное определение:

Используют метод абсолютной градуировки и метод внутреннего стандарта.

Метод абсолютной градуировки основан на предварительном определении зависимости между количеством введенного вещества и площадью или высотой пика на хро­матограмме. Анализируют исследуемый образец, измеряют площадь или высоту пика определяемого компонента и по градуиро­вочному графику рассчитывают его количество.

Метод внутреннего стандарта основан на сравнении пика (по высоте или площади) анализируемого вещества с высотой или площадью пика образца известной кон­центрации. Площадь пика на хроматограмме устанавливают с помощью планиметра или умножением высоты пика на его полуширину.

Вопрос 131

Синильная кислота и её соли. Физические и химические свойства. Услови изолирования, способы обнаружения и количественного определения синильно кислоты в объектах биологического происхождения.

Токсикологическое значение

Синильная кислота – газ, б/ц жидкость с запахом горького миндаля

Источники отравления – косточки миндаля, абрикоса, и др, содержащие амигдалин. В свободном виде в природе не встречается, следы находят в табачном дыме.

Поступление в организм: с вдыхаемым воздухом (дым), перкутанно, перорально

Нарушение клеточного дыхания, гипоксия -> смерть; нарушает деятельность многих ферментов

Биотрансформация синильной кислоты:

1. Гидролиз

2. Превращение в роданиды под влиянием фермента роданазы – основной метаболит

3. Соединение с гемоглобином крови.

4. Связывание с цистеином.

5. Присоединение к веществам, содержащим альдегидную группу, например к сахарам

Объекты исследования: как обычно

Изолирование: перегонка с водяным паром – 1 порция дистиллята

Обнаружение синильной кислоты в дистилляте

1. Реакция образования берлинской лазури (появление синего окрашивания, а затем синего осадка)

NaOH + HCN = NaCN + Н₂0

NaCN + FeSO₄ = Fe(CN)₂ + Na₂SO₄

Fe(CN)₂ + NaCN = Na₄[Fe(CN)₆]

Na₄[Fe(CN)₆] + Fe₂(SO₄)₃ = Fe₄[Fe(CN)₆]₃ + Na₂SO₄

Заключение о не нахождении синильной кислоты можно дать с полной уверенностью, если через 48 ч синяя окраска раствора и синий осадок не обнаружены. Реакция чувствительна, специфична.

2. Реакция образования берлинской лазури на тест-бумаге. Наблюдают образование пятна синего цвета (берлинская лазурь) на общем белом фоне. Реакция применима при анализе объектов, подвергшихся гнилостному разложению.

3. Реакция образования полиметинового красителя с помощью пиридинбензидинового реактива.

Продукты гнилостного разложения биологического объекта не мешают ее определению.

4. Реакция образования бензидиновой сини. Соли меди с цианидами образуют диуиан, при взаимодействии которого с водой выделяется кислород, окисляющий бензидин. Продукт окисления – бензидиновая синь.

5. Микрокристаллоскопическая реакция образования цианида серебра. Под микроскопом наблюдают образование кристаллов в виде длинных игл и сростков из них голубого цвета (в присутствии метиленового синего, его добавл. для наглядности)

NaCN + AgNО3= AgCN + NaNО3

Реакция применима в присутствии продуктов гнилостного разложения объекта.

Количественное определение:

1. Фотоколориметрический метод. Он основан на реакции образования

полиметинового красителя с помощью пиридин-бензидинового реактива.

2. Аргентометрический метод (метод Фолъгарда).

HCN + AgN03 = AgCN + HN03

Непрореагировавший нитрат серебра оттитровывают раствором тиоцианата аммония, используя железоаммониевые квасцы в качестве индикатора.

AgN03 + NH4CNS = AgCNS + NH4N03

3NH4CNS + NH4Fe(S04)2 = Fe(CNS)3 + 2(NH4)2S04

красное окрашивание

Этот метод нельзя использовать при анализе гнилостно-разложившегося объекта, так как при гниении биологического материала образуется сероводород, который также перегоняется с водяным паром и реагирует с нитратом серебра.

2AgNО3 + H2S = Ag2S + 2HNО3