4. Этиология

До недавнего времени считалось, что возбудителем риккетсиоза (Ку-лихарадки) у крупного рогатого скота в нашей стране является Rickettsia Burneti, который в зарубежной литературе он чаще называется Coxiella Burneti.

Согласно современной классификации (F. Weiss, J.W. Moulder, 1984) патогенные риккетсии по структурной организации клеточной стенки являются грамотрицательными бактериями, неподвижны, спор и капсул не образуют, аэробы. В царстве прокариотов отнесены к отделу Gracilicutes, классу Scetobacteria, порядку Rickettsiales, семейству Rickettsiaceae, трибу Rickettsieae, роду Coxiella.

Риккетсии обладают значительно выраженным полиморфизмом. Чаще они встречаются внутри клеток, реже вне их.

Единого мнения об этиологии массовых инфекционных конъюктиво-кератитов у крупного рогатого скота пока нет.

Эта болезнь чаще всего регистрируется как телязиоз, хламидиоз, моракселлез, парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит (ИРТ), а также гиповитаминоз А, поллинозы (пыльцовая аллергия).

В бывшем Союзе ССР РКК впервые описал М.В. Рево (1939), а диагностировал и воспроизвел в эксперименте Г.Ф. Панин (1947).

Однако ранее при изучении инфекционного конъюнктиво-кератита у овец в Южной Африке J.W.A.Coles (1931, 1936) впервые описал похожих на риккетсии микробов, локализовавшихся в эпителии конъюнктивы и роговицы. Он назвал их Rickettsia conjunctivae.

В 60-е годы прошлого столетия М.В. Плахотин вместе со своими учениками и другие отечественные ученые, так же как и многие зарубежные исследователи возбудителем глазной инфекционной патологии у крупного рогатого скота считали Rickettsia conjunctivae bovis.

Конъюнктиво-кератит у крупного рогатого скота разного возраста может быть вызван вирусами, бактериями, хламидиями, а так же и паразитами (телязиями).

В 2000 году на территории Воронежской области сотрудниками ГФП ГНУ «Государственный научный центр прикладной микробиологии» МЗ РФ В.В. Гусевым и О.М. Ласкиной от телят больных инфекционным конъюнктиво-кератитом в стадии клеточной инфильтрации и абсцедирования роговицы из пораженных роговиц и головного мозга впервые выделен возбудитель - Rickettsia conjunctivae bovis, имеющий два серотипа – А и В.

На наш взгляд, эта риккетсия является одним из возбудителей конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота в нашей стране.

При Ку-лихорадке, возбудителем которой является Coxiella Burneti, у животных отсутствуют гнойно-язвенные кератиты.

Дифференциальный диагноз основан на анализе эпизоотологических, клинических данных и результатов микроскопических исследований. Важное значение имеет экспериментальное воспроизведение риккетсиозной инфекции у животных (согласно схемы изучения вновь выделенных штаммов риккетсий по П.Ф. Здродовскому (1974).

В.В. Гусев и О.М. Ласкина (2002) осуществили экспериментальное заражение кроликов, морских свинок и белых мышей взвесью из желточных мешков куриных эмбрионов, содержащих Rickettsia conjunctivae bovis, выделенную от больных животных с признаками РКК в хозяйствах «Старый Курлак» и «Правда» Воронежской области (5-й пассаж). Материал вводили различными методами и в разных инфицирующих дозах.

В результате проведенных исследований установлено, что экспериментальная инфекция, вызванная возбудителем РКК Rickettsia conjunctivae bovis, отличается от таковой при Coxiella Burneti. Кроме того, при внутрибрюшинном и интратестикулярном методах введения Rickettsia conjunctivae bovis у лабораторных животных формировался полный иммунитет, а при внутрикожном – частичный иммунитет.

Это положение подтверждается тем, что в стационарно неблагополучных хозяйствах по РКК крупного рогатого скота Белгородской, Воронежской и Липецкой областей (В.Н. Авроров, 1973; В.А. Черванев, 1994; М.И. Лебедев, 2001), Южного Урала (В.А. Молоканов, С.М. Воробьев, 2001), ни в одном случае, не была зарегистрирована Ку-лихорадка у обслуживающего персонала и зооветеринарных специалистов. В тоже время заболевание людей ку-лихорадкой не приводило к появлению инфекции у контактирующих с ними животными. Это связано с тем, что человек для Coxiella Burneti, является «биологическим тупиком» и не имеет значения для сохранении инфекции в природе (Н.И. Федорова, 1968).

Характеристика возбудителя. Риккетсии, находящиеся внутри клеток, чаще имеют кокковидную форму, а вне их принимают вид палочек, часто заостренных или выглядят как диплобактерии. Встречаются гантелевидные и нитевидные формы. В сосудах конъюнктивы век и в строме роговицы больного глаза Rickettsia conjunctivae bovis имеет овальновытянутую форму и напоминает вид челнока.

Coxiella Burneti с учетом полиморфизма, имеют длину от 0,4 до 1,0 мкм (гантелевидные формы 1,0, диплобактерии – 1,25 мкм); и толщину 0,25 мкм.

Rickettsia conjunctivae bovis соответственно от 1,2 до 3,5 мкм (палочковидные формы 1,2 – 3,5, гантелевидные 2,0 – 2,5 и диплобактерии – 2,0 – 3,5 мкм.) и 0,4 – 0,5 мкм.

Риккетсии хорошо растут и размножаются в различных тканевых культурах, лучше – в желточных мешках куриных эмбрионов, вызывая их гибель на 5 – 6 сутки после заражения.

Плеоморфизм риккетсий зависит от фазы развития инфекционного процесса и его интенсивности. Так, кокковидные формы типичны для всех видов интенсивно протекающего риккетсиоза, палочковидные – для его начального периода или заражения животных слабопатогенным возбудителем. Нитевидные формы возбудителя встречают в раннем периоде умеренно выраженного риккетсиоза, короткие палочковидные формы при интенсивном его размножении в культуре клеток, в организме лабораторных животных и в развивающихся куриных эмбрионах.

Установлено, что нитевидные формы соответствуют наиболее ранней фазе развития риккетсий, тогда как кокковидные и короткие палочковидные формы представляют конечную стадию их деления (В.Н.Паутов, А.И.Игумнов, 1968).

Риккетсии способны проходить через бактериальные фильтры, в том числе фильтры Зейца и ультрафильтры с величиной пор до 65 нм.

Считается, что фильтрующиеся формы риккетсий являются ранней стадией внутриклеточной репродукции возбудителя, находящегося в виде нуклеиновых кислот, лишенных или почти лишенных белковой оболочки. Им отводится значительная роль в этиологии инфекций у животных и человека (П.Ф. Здродовский, 1974).

Риккетсии – типичный представитель облигатных внутриклеточных паразитов. При попадании в клетки вокруг них образуется внутриклеточная вакуоль, в которой происходит интенсивное размножение возбудителя. В пораженных клетках обнаруживается одна или несколько колоний – вакуолей. Размеры их, как и пораженных клеток, увеличиваются, а ядра оттесняются к периферии.

Риккетсии активно размножаются как в альвеолярных, так и в перитонеальных макрофагах, не вызывая их быстрого разрушения.

Наличие вакуолей в пораженных риккетсиями клетках является дифференциально-диагностическим признаком болезни.

Риккетсии могут существовать и в нефагоцитирующих клетках, что способствует их длительной персистенции. Экологической микронишей представителей рода Coxiella является фагосома и фаголизосома, которые являются источником питания и в то же время надежно защищают их от бактерицидных механизмов хозяина.

Патогенность. Особенностью жизнедеятельности риккетсий в организме является способность их продуцировать специфический липополисахарид с выраженными свойствами эндотоксина, тесно связанного с мембраной. У животных (крупный рогатый скот, морские свинки) он вызывает гиперемию видимых слизистых оболочек, гипертермию, потерю массы тела, увеличение печени.

Вирулентность риккетсий зависит от источника их изоляции. От членистоногих и диких млекопитающих, как правило, выделяют высоковирулентные, а от больных людей и сельскохозяйственных животных – слабовирулентные штаммы.

При длительном пассировании в куриных эмбрионах вирулентность возбудителя снижается. То же самое отмечается и при воздействии парааминобензойной кислоты, но этот процесс предупреждается в присутствии дифосфопиридин-нуклеотида и коэнзима А.

Классической моделью для экспериментального воспроизведения риккетсиоза является морская свинка, хотя его можно воспроизвести и на других животных (белые мыши, крысы и др.).

В мазках-отпечатках из органов риккетсии окрашиваются по методу Романовского-Гимза – в голубоватый цвет на фиолетовом фоне тканей, по Здродовскому-Маккиавело – в рубиново-красный, по Морозову – в темно-коричневый или черный, по Граму – отрицательно.

Антигенное строение Rickettsia conjunctivae bovis изучено недостаточно. При гибели риккетсий освобождается эндотоксин.

К настоящему времени из Coxiella Burneti выделены корпускулярные антигены, которые используются в серологических реакцииях агглютинации, связывания комплемента и др.

Устойчивость. Риккетсии устойчивы к воздействиям различных физических и химических факторов.

При облучении ультрафиолетовыми лучами с расстояния 1 м они сохраняют устойчивость в течение 5 часов. Высушивание их и последующее хранение возможно не менее 8-10 лет. На сухой поверхности они сохраняются в течение 15 суток. В желудочном соке с нормальной и повышенной кислотностью остаются вирулентными в течение 2 часов, в высохшей моче и крови зараженных животных – от нескольких недель до полугода, а в фекалиях – до 2 лет.

На инфицированной хлопчатобумажной ткани (спецодежда) при ее высушивании жизнедеятельность и вирулентность риккетсий сохраняется до 35-40 дней; на деревянных и железных предметах (полы, кормушки, перегородки клеток) – 16-17 суток; при температуре 4-6⁰С на шерсти– от 12 до 16 месяцев; в песке и глинистой почве – в течение 9 месяцев.

Риккетсии хорошо сохраняются: в стерильной воде при комнатной температуре 160, в стерильном молоке – 273 дня, в снятом молоке при температуре 4-6⁰С 12 месяцев, в кефире, сыворотке, твороге, мясе – до 30, в соленом мясе – до 90 дней.

Нагревание до 90⁰С они выдерживают более часа, но при 100⁰С погибают за 1 минуту. При низких температурах (- 20⁰С, - 70⁰С) риккетсии сохраняются в течение 5 месяцев.

Дезинфицирующие вещества: 3-5% раствор фенола, 3% раствор хлорамина, 2% раствор формальдегида, 5% раствор перекиси водорода и 10% раствор едкого натра инактивируют их в течение 5 минут.

Хлопчатобумажная ткань (спецодежда) обеззараживается только после 30-минутного кипячения в 2% растворе хлорамина Б или фенола, при замачивании ее в течение 1 часа в растворах этих препаратов в концентрациях соотвотственно 3 и 5%. Технологический процесс первичной обработки шерсти не инактивирует риккетсий.

Хорошим консервантом для риккетсий является смесь 50% глицерина и физиологического раствора поваренной соли в соотношении 1 : 1.

10% взвесь из желточных мешков куриных эмбрионов зараженных риккетсиями, полностью инактивируется под влиянием эфира в течение 15 минут.

Пенициллин, независимо от дозы не влияет на развитие риккетсий, а стрептомицин в очень высоких дозах (10000 единиц на эмбрион) лишь частично задерживает их развитие.

Устойчивость риккетсий к воздействию факторов внешней среды и многих дезинфекторов обеспечивает длительное их сохранение.