- •Для выполнения лабораторных работ
- •Задание 3. Определение триптофана в зерне сельскохозяйственных растений
- •Задание4. Определение аминокислот методом тонкослойной хроматографии (тсх)
- •Задание 7. Определение изоэлектрической точки белков
- •Задание 8. Специфичность действия ферментов
- •Задание 9. Определение оптимальных значений pH для различных ферментов
- •Задание 11. Обнаружение каталазы и пероксидазы в растительных объектах
- •Обнаружение пероксидазы
- •Задание 12. Определение активности тирозиназы
- •Углеводы
- •Задание 16. Свойства моносахаридов и дисахаридов. Ферментативный гидролиз сахарозы
- •Задание 18. Определение сахарозы в сахарной свекле на поляриметре
- •Задание 20. Определение констант жиров
- •Витамины
- •Задание 23. Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях
- •Органические кислоты Задание 24. Определение общей кислотности
- •Задание 25. Определение свободных органических кислот
- •Небелковые азотистые соединения Задание 26. Определение нитратного азота потенциометрическим методом
Витамины
Задание 21. Качественные реакции на жирорастворимые витамины Е (токоферол) и А (ретинол).
Оборудование и реактивы: пробирки, пипетки, водяная баня; 0,1%-ный раствор токоферола в 96% спирте или масляный раствор – промышленный препарат; раствор витамина А в масле - промышленный препарат; концентрированная HNO3; 0,2%-ный спиртовой раствор хлорного железа; концентрированная H2 SO 4 .
Обнаружено несколько близких друг другу по химической структуре токоферолов: α-, β-, γ-.
Витамин Е участвует в окислительно-восстановительных реакциях, является антиоксидантом непредельных жирных кислот.
Витамин А является структурным компонентом биологических мембран, участвует в синтезе мукополисахаридов, в процессах светоощущения. Витамин А встречается в продуктах животного происхождения.
Ход работы:
1. В сухую пробирку вносят 3 капли токоферола в спирте, прибавляют под тягой 6 капель азотной кислоты и пробирку слегка встряхивают. Образующаяся эмульсия расслаивается, причём верхний маслянистый слой окрашивается в красный цвет. Реакция обусловлена окислением токоферола до окрашенного продукта, имеющего хиноидную структуру.
2. В две пробирки наливают по 2-3 капли масляного раствора витамина Е. В первую пробирку добавляют 1-2 мл воды, во вторую – такое же количество азотной кислоты. Обе пробирки нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. В пробирке с азотной кислотой масляный слой витамина окрашивается в оранжево-красный цвет.
3. В пробирку вносят несколько капель спиртового раствора токоферола, прибавляют равное количество раствора хлорного железа, перемешивают и нагревают. Р аствор окрашивается в красный цвет.
4.В пробирку наливают 3 капли масляного раствора витамина А и добавляют 1 каплю серной кислоты. В пробирке появляется сине-фиолетовое окрашивание.
По результатам опыта записать выводы.
Задание 22. Качественные реакции на водорастворимые витамины: В2 (рибофлавин), В6 (пиридоксин), С (аскорбиновая кислота)
Оборудование и реактивы: пробирки, пипетки, 0,025%-ный раствор витамина В2, концентрированная HCl, металлический цинк, 5%-ный раствор хлорного железа, ступки фарфоровые, воронки стеклянные, колбы конические на 100 мл, 0,1%-ный раствор йода в KI, насыщенный раствор K3Fe(CN )6 , 2%-ный раствор хлорного железа, свежеприготовленный 0,01%-ный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола, 10%-ный раствор HCl.
Материалы: клубни картофеля, капуста, растворы витаминов B2 ,B6 .
Рибофлавин входит в состав флавиновых нуклеотидов - ФМН и ФАД, являющихся коферментами многих дегидрогеназ. В окисленной форме рибофлавин окрашен в жёлтый цвет, а в восстановленной – бесцветный.
Пиридоксин является коферментом трансаминаз и других ферментов.
Аскорбиновая кислота участвует в окислительно-восстановительных реакциях . Она легко окисляется до дегидроаскорбиновой кислоты, которая в щелочной среде образует дикетогулоновую кислоту. Восстанавливающая способность аскорбиновой кислоты является основой большинства количественных методов её определения.
Ход работы:
1. В пробирку вносят 1 мл раствора рибофлавина, добавляют под тягой 5 капель концентрированной HCl и несколько кусочков металлического цинка. Жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина.
2. В пробирку вносят 0,5 мл раствора пиридоксина, добавляют 1 каплю раствора хлорного железа и перемешивают. Жидкость окрашивается в красный цвет. Реакция основана на образовании комплексного соединения фенолята железа.
3. Растирают измельчённые клубни картофеля или листья капусты (5-10 г) в фарфоровой ступке, приливают 10 мл воды, перемешивают и фильтруют.
3.1. В две пробирки вносят по 1мл дистиллированой воды и по 2 капли 0,1%-ного раствора йода в KI. В одну пробирку добавляют 1 мл дистиллированной воды , а в другую – 1 мл фильтрата растительных тканей. Во второй пробирке раствор йода обесцвечивается вследствии окисления аскорбиновой кислоты в дегидроаскорбиновую и восстановления йода до йодоводородной кислоты.
3.2. К двум мл картофельного или капустного сока добавляют 1 каплю свежеприготовленного раствора K3[Fe (CN)6], а затем одну каплю раствора хлорного железа и 5 капель раствора HCl. В присутствии аскорбиновой кислоты происходит восстановление К3 [Fe(CN)6] в K 4Fe(CN)6], который с трёхвалентным железом образует окрашенный в голубой цвет продукт. В контроле вместо сока берут дистиллированную воду (появляется бурое окрашивание).
3.3. К 1-2 мл сока добавляют осторожно по каплям свежеприготовленный 0,01%-ный раствор 2,6- дихлорфенолиндофенола. Происходит обесцвечивание красителя.
Объяснить полученные результаты и записать выводы.