1. Требования к организации работ, состав питательных сред

Требования к организации работ с культурами тканей подробно изложены в ряде монографий [10, 11] и специальных руководств [12]. Эти вопросы отражены также применительно к плодовым и ягодным культурам [13, 14]. В упомянутых руководствах описаны также методы и приемы ма­нипулирования с растительными клетками и тканями в культуре in vitro, приведены составы основных питательных сред и методики их приготовления.

Поэтому, не повторяя общеизвестных положений, остановимся лишь на составе питательных сред применительно к различным эта­пам культивирования земляники.

Для выращивания тканевых культур, регенерации, размножения и укоренения растений, был разработан целый ряд питательных сред. Это среды Мурасиге и Скуга, Андерсона, Уайта, Смирнова, Шенка и Хильдебрандта, Хеллера, Лисмайера и Скуга и других. Питательные среды различаются в основном по минеральному составу (макро - и микроэлементы). В состав сред входят также источники углеводов (как правило, сахароза), железа, а также витамины и аминокислоты. Удобнее использовать агаризованные среды. Для работы с плодовыми и ягодными растениями удобен бактериологический агар испанского производства.

В работах ряда исследователей [15, 16] установлено, что для земляники, как и для большинства плодовых и ягодных культур, оп­тимальной на всех этапах культивирования является среда по про­писи Мурасиге и Скуга. Это одна из наиболее универсальных сред. Для нее характерно высокое содержание азота и калия. Хорошие результаты дает также применение среды Андерсона и среды QL (Quoirin, Lepoivre,1977) в модификации A. Jacobini, A.Standardi (1982).

Состав питательных сред, применяемых в работе с земляникой садовой

Компоненты среды	Концетрация в среде, мг/л
	Мурасиге-Скуга	Андерсона	QL в модификации A. Jacobini и A.Standardi (1982)
1	2	3	4
NH4NO3	1650	400	400
KNO3	1900	480	1800
MgSO4 . 7H2O	370	370,4	360
KH2PO4	170	330,6	270
CaCl2. 2H2O	440	442,2	-
Ca(NO3)2. 4 H2O	-	-	1200
KI	0,83	0,3	0,08
H3BO3	6,2	6,2	6,2
MnSO4. 4H2O	22,3	24,9	1,0
ZnSO4. 7H2O	8,6	8,6	8,6
Na2MoO4. 2H2O	0,25	0,25	0,25
CuSO4. 5H2O	0,025	0,025	0,025
CaCl2. 6H2O	0,025	0,025	0,025
FeSO4 . H2O	27,8	55,7	27,85
Na2 ЭДТА. 2H2O	37,3	74,5	37,25
1	2	3	4
Мезоинозит	100	100	100
Тиамин	0,4	0,4	0,1
Пиридоксин	0,5	-	0,5
Никотиновая кислота	0,5	0,5	2,0
Глицин	2	2	2,0
Сахароза	20000-30000	-	30000
Глюкоза	-	30000	-
Агар-агар	7000	7000	7000

Помимо указанных в прописи среды витаминов, при работе с зем­ляникой целесообразно добавлять в нее также рибофлавин (В₂), биотин (Н), аскорбиновую кислоту (С) и другие витамины в концентрациях 0,5-1,0 мг/л.

Для индукции и поддержания каллусных культур, регенерации побегов из изолированных тканей, размножения и укоренения побегов используются регуляторы роста различных классов: цитокининов, ауксинов и гиббереллинов в различных сочетаниях и концентрациях.

К группе цитокининов относятся 6-бензиламинопурин (6-БАП), 6-фурфуриламинопурин (кинетин), тидиазурон, 2-изопентениладенин (2iP). В работе с земляникой используются, как правило, 6-БАП и кинетин. Из группы ауксинов в среды вводят 2,4- дихлорфеноксиуксусную кислоту (2,4-Д), 3-индолилмасляную кислоту (ИМК), 3-индолилуксусную кислоту (ИУК), нафтилуксусную кислоту (НУК). В рабо­те с земляникой используются все эти вещества, т.к. действие их сортоспецифично, что подробнее будет отражено в разделах, посвя­щенных каллусогенезу и регенерации.

Гибберелловая кислота (ГК) обычно применяется при регенерации и размножении, т.к. приводит к вытягиванию побегов в длину.

Т.к. некоторые регуляторы роста (ГК, ИМК) и витамины являют­ся термолабильными, они подвергаются холодной стерилизации через мембранный фильтр, после чего их в ламинар-боксе добавляют в сос­тав питательных сред,

При каллусогенезе земляники целесообразно добавление гидролизата казеина.