Учебное+пособие+Ред.+2020

51

меньше 1,0 мл). Бесцветный раствор и большое количество осадка свидетельствуют об отсутствии гемолиза.

Определить, при какой концентрации раствора хлорида натрия наступает гемолиз и сделать вывод об осмотической устойчивости исследованных эритроцитов.

7. Эритроцитометрия и кривая Прайс-Джонса.

Эритроцитометрия – определение размеров эритроцита: диаметра, объёма и толщины. Определение диаметра эритроцитов можно проводить под микроскопом с помощью

окулярмикрометра и автоматических счётчиков.

Кривая Прайс-Джонса отражает распределение эритроцитов по диаметру. На оси абсцисс откладывают величину диаметра эритроцитов в мкм, а на оси ординат – процентное содержание эритроцитов соответствующего диаметра. В норме большинство эритроцитов (~70 %) имеет диаметр 7 – 8 мкм, максимум приходится на эритроциты диаметром 7,2 – 7,5 мкм. Эритроциты диаметром меньше 6,7 мкм относят к микроцитам, больше 7,7 мкм к макроцитам, больше 9,5 мкм к мегалоцитам.

Ширина основания кривой характеризует анизоцитоз. При макроцитозе и мегалоцитозе кривая имеет пологую форму, широкое основание, две или несколько вершин и сдвинута в сторону больших диаметров эритроцитов. При микроцитозе кривая имеет широкое основание, две вершины, сдвинута влево в сторону меньших диаметров.

Средний объём эритроцита определяется отношением гематокритного показателя к количеству эритроцитов в 1 мкл крови. В норме он колеблется от 76 до 96 мкм3. При количестве эритроцитов 5 млн в 1 мкл крови и гематокритном показателе 45 % средний объём эритроцита равен 90 мкм3. Средний объём эритроцита увеличивается при макроцитозе, а уменьшается при микроцитозе.

Средняя толщина нормальных эритроцитов 1,9 – 2,1 мкм.

Практическая работа.

Определение диаметра эритроцитов с помощью микроскопа МИКРОМЕД-6 с цифровой видеокамерой ТСА-9.

Микроскоп БИОМЕД-6 с видеокамерой ТСА-9 предназначен для наблюдения препаратов в проходящем и падающем свете методом фазового контраста. В практической работе используется для параметрического и количественного анализа эритроцитов и лейкоцитов.

Порядок работы с микроскопом и видеокамерой. Установить видеокамеру ТСА в тубус адаптера видео-фотонасадки. Включить микроскоп в сеть и тумблер включения микроскопа в сеть поставить в положение «1». Переключатель светового потока должен быть включен (выдвинут). Для работы с компьютером используются два входа USB –один для включения видеокамеры, другой для ТОКЕН-ключа этого микроскопа. На предметный столик с измерительными нониусами устанавливается препарат с мазком крови. Для настройки прибора используется объектив 40х/0,65 с пружинкой, который находится в револьверной головке. В центр препарата наливается 1-2 мл иммерсионного масла. С помощью ручек грубой и тонкой настройки, а также окуляра выбирают область исследования (анализа) мазка крови.

52

Цифровая камера ТСА-9.

Микроскоп Биомед-6.

1 – основание, 2 – осветитель, 3 – регулятор диафрагмы конденсора, 4 – конденсор, 5 – предметный столик с измерительным нониусом, 6 – держатель препарата, 7 – объективы, 8 – револьверная головка, 9 – окуляры, 10 – адаптер видео-фотонасадки, 11 – тринокулярная (бинокулярная) насадка, 12 – переключатель сетевого потока, 13 – винт крепления тринокулярной насадки, 14 – штатив, 15 – ручка грубой настройки, 17 – коаксиальная ручка перемещения препарата, 18 – лючок галогенной лампы.

На «Рабочем столе» компьютера активируют ярлык «Микро-View».

На экране появится поле с выбранной областью исследования.

Примечание. Внизу, слева элементы настройки экрана, которыми, при необходимости можно пользоваться.

Формируют файл изображения, путем нажатия кнопки «снимок» (на панели «настройки») и используют его для последующего анализа.

Определение диаметра эритроцитов. На «Рабочем столе» компьютера активируется ярлык «Микро-анализ Pro». В верхней части программы появятся элементы управления программой. С помощью иконки «Файл» открывается снимок, сделанный в программе «Микро-View», с выбранной областью анализа. На снимке последовательно выбираются отдельные эритроциты и выделяют на изображении измерительный контур - прямоугольник таким образом, чтобы его ширина или высота совпадала с диаметром эритроцита. Размер нужной стороны в пикселях определяется с использованием иконки «Анализ», в котором применяются разделы: «установить параметры измерения» (площадь), потом «ручное измерение». Для получения величины диаметра эритроцита в мкм необходимо знать количество пикселей в 1 мкм на снимке с данным увеличением. Для этого необходимо сфотографировать при данном увеличении, а затем оценить в пикселях объект с известными размерами в мкм. Например, маленький квадрат камеры Горяева, сторона которого составляет 1/20 мм, т.е. 50 мкм. На снимке, сделанном через объектив 40х/0,65, сторона маленького квадрата составляет 385 пикселей, а 385/50 = 7,7. Если диаметр эритроцита в пикселях будет 47, то это составит 47/7,7 = 6,1 мкм.

53

6.2. Форменные элементы крови.

Физиологическая характеристика эритроцитов. Понятие об эритроцитозе и эритропении, анизоцитоз, пойкилоцитоз.

Гемоглобин, его виды и соединения, возрастные изменения, физиологическое значение. Цветовой показатель.

Физиологическая характеристика лейкоцитов. Лейкоцитарная формула и её клиническое значение. Понятие о лейкоцитозе и лейкопении. Изменение картины периферической крови при физических нагрузках.

Кроветворение, регуляция.

Методы подсчёта форменных элементов в камере Горяева.

Вопросы программированного контроля по теме занятия.

1.Сколько эритроцитов в одном литре крови: у мужчин, у женщин?

2.Какие функции выполняют эритроциты, что для них характерно?

3.Что такое эритроцитоз, эритропения?

4.Что характеризует кривая Прайс-Джонса? Что такое микроцитоз, макроцитоз, анизоцитоз, пойкилоцитоз?

5.Какие методы используются для определения количества эритроцитов?

6.Какие из указанных величин соответствуют содержанию гемоглобина в крови женщин, мужчин?

7.Что характерно для гемоглобина плода, новорожденного, взрослого?

8.Соединения гемоглобина.

9.Чему равен цветной показатель и о чём он говорит? Как определяется?

10.Какие функции выполняют лейкоциты? Сколько их в одном литре крови?

11.Что такое лейкоцитоз и лейкопения? Причины их вызывающие?

12.Какие лейкоциты относятся к гранулоцитам и к агранулоцитам?

13.Каковы функции базофилов, эозинофилов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов? Каково их % содержание?

14.Как определяется лейкоцитарная формула? Причины её сдвига вправо, влево?

15.В каких случаях будет меняться соотношение зрелых и молодых нейтрофилов?

16.Что характерно для процесса кроветворения (гемопоэза), в каких органах он протекает? Что характерно для костного мозга, его функции?

17.Какие факторы поддерживают эритроцитарное равновесие в организме?

18.Каковы свойства стволовой полипотентной клетки, частично детерминированной клетки, унипотентной клетки?

19.Какие функции выполняет микрососудистый компонент короткоранговой регуляции кроветворения?

20.Какие факторы могут принимать участие в специфической дальноранговой регуляции гемопоэза?

21.Какие факторы участвуют в неспецифической регуляции гемопоэза?

Практические работы.

Счётная камера Горяева представляет собой толстую стеклянную пластину (предметное стекло) с углублением в центре, равным 1/10 мм. На дне камеры нанесены две сетки Горяева, разграниченные глубокой поперечной канавкой. Сбоку от сеток находятся стеклянные прямоугольные пластинки, к которым притирают специальные шлифовальные покровные стекла. Сетка Горяева представляет собой квадрат 3 х 3 мм, который разделен сверху и слева на 15 равных частей и состоит из 225 больших квадратов. Каждый третий ряд как сверху, так и слева разделен еще на 4 части и таким образом на пересечении образуются квадраты, разделенные на 16 малых. Большие квадраты, рассеченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями; и квадратами чистыми, без линий.

54

Сторона большого квадрата 1/5 мм; площадь большого квадрата 1/25 мм2; глубина камеры равна 1/10 мм; объем большого квадрата 1/250 мм3.

Сторона малого квадрата 1/20 мм; площадь малого квадрата 1/400 мм2; глубина камеры равна 1/10 мм; объем малого квадрата 1/4000 мм3.

Для исключения ошибок подсчёта форменных элементов, связанных с их нахождением на границах квадратов, применяют правило Егорова: клетки считают внутри квадрата и на его верхней и левой границах.

1. Подсчёт эритроцитов в камере Горяева.

Камера Горяева должна быть сухой и чистой. К ней притирают покровное стекло до появления радужных полос (только при этих условиях соблюдается правильный объем камеры). Смеситель (меланжер) также должен быть чистым и обязательно сухим, на его короткий капилляр надевают резиновую трубку с грушей. В меланжер для эритроцитов (красная палочка в шарообразном расширении) до нижней метки "0,5" набирают кровь, погрузив в нее кончик смесителя; затем до метки "101" за шарообразным расширением 3% гипертонический раствор, в котором эритроциты сморщиваются - кровь разводится в 200 раз. Кровь набирают строго до метки, но если получилось больше, необходимо выпустить на ватку или фильтровальную бумагу. Закончив набор жидкости, переведите смеситель (меланжер) в горизонтальное положение, снимите резиновую трубку, закройте капилляр с обеих сторон большим и указательным пальцами и тщательно перемешайте кровь с жидкостью в расширении смесителя, встряхивая его. Кровь готова для подсчета эритроцитов. Полученной смесью заполняют счетную камеру Горяева. После заполнения камеры оставьте на 1-2 минуты в покое для оседания форменных элементов, приступайте к подсчету при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения (диафрагма прикрыта и несколько опущен конденсор). Эритроциты считают в 5 больших (5·16 = 80 малых) квадратах. Подсчёт производят по формуле: Э = А·4000·200·106/80 где Э - количество эритроцитов в 1 л крови; А - сумма эритроцитов в 5-ти больших квадратах (80-

ти малых); 4000 - множитель, приводящий к объёму крови 1 мкл (объём малого квадрата 1/4000 мкл); 200 - разведение крови (кровь в меланжере разводится в 200 раз); 80 - число малых квадратов; 10^6 - количество мкл в одном литре. Количество эритроцитов в норме: у женщин

3,9-4,7 10^12 /л; у мужчин 4-5 10^12 /л.

Произведите подсчёт количества эритроцитов в 1 л крови, сделайте заключение о соответствии полученных результатов нормативным.

2. Подсчёт лейкоцитов в камере Горяева.

Камера Горяева должна быть сухой и чистой. К ней притирают покровное стекло до появления радужных полос. В смеситель (меланжер) для лейкоцитов (белая палочка в шарообразном расширении) до нижней метки "0,5" набирают кровь, а затем до метки "11" за шарообразным расширением 5% раствор уксусной кислоты, которая разрушает оболочки лейкоцитов (в камере

55

подсчитывают их ядра), а кровь в меланжере разводится в 20 раз. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах согласно правилу Егорова. Подсчёт производят по формуле:

Л=В·250·20·106/100

где Л - количество лейкоцитов в 1 л крови; В - сумма лейкоцитов в 100 больших квадратов; 250 - множитель, приводящий к объёму крови 1 мкл (объём большого квадрата 1/250 мкл); 20 - разведение крови (кровь в меланжере разводится в 20 раз); 100 - число больших квадратов; 106 - количество мкл в одном литре.

В норме количество лейкоцитов 4-5 109 /л. Факторы, влияющие на количество лейкоцитов: возраст; время суток (нормальные биоритмы); приём пищи.

3. Определение содержания гемоглобина методом Сали.

Содержание гемоглобина крови в норме у взрослых: у мужчин 130-160 г/л; у женщин 120140 г/л. Суточные вариации содержания гемоглобина в периферической крови достигают 15% с максимумом по утрам. У жителей северных регионов и высокогорных районов уровень гемоглобина нередко оказывается выше приведенных значений на 10 г/л. У пожилых людей (старше 65 лет) нижняя граница нормы показателя достигает 122 г/л у мужчин и 110 г/л у женщин.Гемометр Сали представляет собой штатив и состоит из 3 пробирок одинакового диаметра. Одна (средняя) пробирка - пустая, две другие запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски. Интенсивность окраски стандарта соответствует идеальной норме - содержанию гемоглобина 166,7 г/л (16,67 г%).

ЦЕЛЬ: освоить определение содержания гемоглобина по методу Сали.

ОСНАЩЕНИЕ: гемометр Сали; 0,1Н раствор хлористоводородной кислоты; дистиллированная вода, капилляр (0,02 мл) стеклянная палочка.

Определите концентрацию гемоглобина в образце крови, предлагаемой для исследования; сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативам.

4. Расчёт цветового показателя.

Цветовым показателем (ЦП) называют условную величину, характеризующую степень насыщения гемоглобином каждого эритроцита. Этот показатель можно вычислить, зная содержание гемоглобина в исследуемой крови и количество эритроцитов в 1 мкл этой же крови.

ЦП = Нв (г/л) * 3 / (три первых цифры от числа эритроцитов) В норме цветовой показатель равен 0,85 - 1,15 - нормохромазия.

Превышение ЦП верхнего предела нормы называют гиперхромазией, уменьшение за предел нижнего уровня нормы - гипохромазией.

ХОД РАБОТЫ: определив в исследуемой крови содержание гемоглобина и эритроцитов в 1 л крови, рассчитайте цветовой показатель, сопоставьте с показателями нормы.

56

5. Подсчёт лейкоцитарной формулы.

Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов, которые считают в окрашенных мазках крови в пересчете на 100 лейкоцитов и выражают в виде процентного содержания. Для более точного ее вычисления необходимо просмотреть 200 лейкоцитов, а полученный результат поделить на 2.

Лейкоцитарная формула (лейкограмма в норме).

В крови могут встречаться зрелые и юные формы лейкоцитов. В норме их легче всего обнаружить у самой многочисленной группы, т.е. у нейтрофилов. Юные нейтрофилы (миелоциты) имеют довольно крупное бобовидное ядро. Палочкоядерные – ядро, не разделенное на отдельные сегменты. Зрелые, или сегментоядерные, имеют ядро, разделенное на 2-3 сегмента. Чем больше сегментов, тем старше нейтрофил. Увеличение количества юных и палочкоядерных нейтрофилов свидетельствует об омоложении крови – это сдвиг лейкоцитарной формулы влево (лейкоз, белокровие, инфекции, воспаления). Снижение количества этих клеток свидетельствует о старении крови – это сдвиг лейкоцитарной формулы вправо.

ХОД РАБОТЫ: включить микроскоп БИОМЕД-6 с видеокамерой ТСА-9, подключить его к компьютеру (по описанию в предыдущем параграфе), установить препарат с мазком крови.

При просмотре мазка для подсчета лейкоцитарной формулы и морфологической оценки клеток используют иммерсионную систему. Так как различные виды лейкоцитов распределяются на мазке неравномерно подсчет клеток необходимо производить всегда по одной системе.

Мазок передвигают от верхнего края к нижнему, затем отодвигают на 2–3 поля зрения, вдоль края и идут в обратном направлении до верхнего края и т. д.

Идентифицируют и подсчитывают не менее 100 лейкоцитов. Подсчитывают только целые неразрушенные клетки. Если при этом обнаруживаются какие-либо отклонения от нормы (появление дегенеративных форм клеток, не выявляемых у здорового человека, изменение нормального соотношения различных типов лейкоцитов), обязательно просматривают еще 100 лейкоцитов по описанной методике. Полученные результаты регистрируют с помощью клавишного счетчика или другим способом.

Используют нониусы горизонтального перемещения «лево-право» и «вперед-назад». Рекомендуемая точка начальной установки «вперед-назад» должна быть на цифре 10, а «левоправо» на цифре 40 (начальную установку измерения можно произвольно изменять). Последовательно передвигая нониусы на 1 мм (одно поле зрения), вначале «вперед-назад», а потом «лево-право» и подсчитывают количество и виды лейкоцитов, попавших в поле зрения.

Полученные данные внести в таблицу.

Лейкоцитарная формула (лейкограмма).

57

Сделать вывод по соответствию лейкоцитарной формулы норме, наличию сдвигов вправо или влево.

6.3. Антигенные системы крови. Группы крови. Гемостаз.

Группы крови. Резус-фактор. Значение при переливании крови, в акушерстве и в практике судебно-медицинской экспертизы. Правила переливания крови. Кровезамещающие растворы.

Физиологическая характеристика тромбоцитов. Сосудисто-тромбоцитарный и плазменный (коагуляционный) гемостаз, их фазы. Факторы свёртывающей и противосвёртывающей систем крови. Возможные последствия при нарушении систем про- и антикоагулянтов. Влияние факторов внешней и внутренней среды на процессы гомеостаза. Сосудистая стенка как регулятор свёртывания крови и фибринолиза.

Вопросы программированного контроля по теме занятия.

1.Какие агглютиногены и агглютинины характеризуют групповую принадлежность крови по системе АВО, по системе резус и по другим системам?

2.Какие агглютиногены и агглютинины (антигены и антитела) содержатся в крови I(O), II(A), III(B), IV(AB) групп?

3.Какие антигены не имеют естественных антител? Какие антитела являются естественными, какие иммунными?

4.Какой из антигенов группы А имеет наиболее выраженные антигенные свойства?

5.Какой агглютинин может способствовать склеиванию эритроцитов, содержащих О-антиген?

6.Какими правилами пользуются при переливании крови? Какие пробы используются для определения совместимости крови донора и реципиента?

7.Что характерно для сосудисто-тромбоцитарного гемостаза?

8.Какое вещество вызывает вторичный спазм сосудов при сосудисто-тромбоцитарном гемостазе?

9.Что характерно для плазменного (коагуляционного) гемостаза?

10.Какие вещества образуются в конце первой, второй и третьей фазы плазменного гемостаза?

11.Как запускаются внутренний, внешний механизмы образования протромбиназы?

12.Какова роль тромбопластина (III фактор)?

13.Какие вещества активируют фактор контакта (XII или Хагемана)?

14.Какие вещества активируют Х фактор при внешнем и внутреннем механизмах?

15.Какие вещества активируют XI фактор (плазменный предшественник тромбопластина)?

16.Какие вещества активируют IX фактор (антигемофильный глобулин А)?

17.Какие вещества активируют VIII фактор (антигемофильный глобулин В)?

18.Какие вещества активируют VII фактор?

19.Какие факторы активируют переход протромбина в тромбин?

20.Какие функции выполняет фибрин? Где может находиться фибриноген?

21.Какие факторы активируются при участии ионов Са++?

22.Как изменится время свёртывания крови при возбуждении симпатического отдела ВНС?

23.Какие факторы обеспечивают жидкое состояние крови?

24.Какие вещества относятся к образующимся антикоагулянтам, а какие к постоянным?

25.Какие факторы относятся к фибринолитической системе? Какой основной?

26.Какие вещества активируют переход плазминогена в фибринолизин?

27.Какова роль калликреина (XIV фактора), высокомолекулярного кининогена (XVфактора)?

28.Какие методы используются для регистрации свёртывания крови?

29.Что такое тромбоэластография? Какие показатели позволяет определить?

Практические работы.

1. Определение групповой принадлежности крови по системе АВ0 перекрёстным методом - стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой определения групп крови по системе АВ0 методами стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, тарелка с нанесенными на ней обозначениями агглютининов сывороток, стандартные сыворотки I, II, III групп двух серий с разным титром антител, стеклянные палочки, физиологический раствор, стандартные эритроциты групп А(II) и В

(III).

58

а) Метод стандартных сывороток.

ХОД РАБОТЫ: наносят на тарелку в соответствующие квадраты (лунки) пипеткой крупные капли сывороток двух серий I(0), II(A), III(B) групп (нельзя допускать смешивания сывороток!).

Концом чистой стеклянной палочки (или углом предметного стекла) захватывают небольшое количество крови и помещают рядом с каплей сыворотки (капля вносимой крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки), осторожно перемешивают. Вносят кровь и в две остальные капли сывороток, используя другие стеклянные палочки или углы предметного стекла. Слегка покачивая тарелку в течение 5 мин, наблюдают за каплями. Затем добавляют каплю физиологического раствора для исключения ложной агглютинации и оценивают результат. Агглютинация выглядит в виде мелких красных крупинок, постепенно увеличивающихся в размере на фоне светлеющей сыворотки. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности эритроцитов исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.

б) Метод стандартных эритроцитов.

ХОД РАБОТЫ: на тарелку, разделенную на секторы наносят каплю сыворотки исследуемой крови, которая в 10 раз меньше капли стандартных эритроцитов; рядом поместите каплю стандартных эритроцитов А(II) и В (III) групп. Действия проводят разными стеклянными палочками. Перемешивают капли углом предметного стекла, тарелочку покачивают в течение 3 минут; затем добавляют по капле физиологический раствор для исключения ложной агглютинации, продолжают смешивать покачиванием и через 5 минут оценивают результат. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности сыворотки исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.

Оценка результатов.

2. Определение групповой принадлежности крови по системе АВ0 методом цоликлонов.

Цоликлоны - продукты гибридных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридные клеточные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, полностью идентичных по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.

Цоликлоны анти-А (аналог агглютинина альфа) и анти-В (аналог агглютинина бета) предназначены для определения групп крови человека вместо стандартных сывороток. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается; температура воздуха в помещении должна быть от 15 до 25º С.

ЦЕЛЬ: освоить методику определения групп крови по системе АВ0 методом цоликлонов. ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, цоликлоны анти-А (розовый цвет) и анти-В (голубой цвет), исследуемая кровь.

ХОД РАБОТЫ: наденьте перчатки. Нанесите на пластинку по одной капле (0,1 мл) реагентов анти-А и анти-В и рядом по одной капле крови (0,1 мл), которая в 10 раз меньше капли сыворотки. Реактив и кровь тщательно перемешайте стеклянными палочками. Наблюдение за ходом реакции проводите при легком покачивании пластинки в течение 2-5 минут. При положительном результате - агглютинация эритроцитов; при отрицательном результате капля - равномерно окрашена в красный цвет, агглютинаты не обнаруживаются.

59

Оценка результатов:

3.Определение резус-принадлежности крови методом стандартных цоликлонов.

ЦЕЛЬ: освоить методику определения резус-принадлежности крови.

ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, вата, тарелка, стеклянная палочка, пипетки, физиологический раствор, спирт, стандартный цоликлон анти-D, кровь донорская.

ХОД РАБОТЫ: нанесите на сухое стекло каплю стандартного цоликлона анти-D, затем в 10 раз меньшую каплю исследуемой крови, смешайте. При комнатной температуре чётко выраженная агглютинация наступает через 30 – 60 секунд. При наличии агглютинации кровь считают резусположительной (Rh+), а при отсутствии - резус-отрицательной (Rh-).

Оценка результатов:

Цоликлон анти-D супер Вывод о резус-принадлежности исследуемой крови

4.Определение индивидуальной совместимости крови донора и реципиента по системе АВ0.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой.

ОСНАЩЕНИЕ: сыворотка реципиента, кровь донора, физиологический раствор, тарелка, стеклянные палочки.

ХОД РАБОТЫ: на тарелку наносят каплю - сыворотки реципиента, рядом (в 10 раз меньшую каплю) - крови донора; перемешивают стеклянной палочкой 4-5 минут, добавляют 2-3 капли физиологического раствора для исключения ложной агглютинации. Наличие агглютинации указывает на несовместимость крови донора и реципиента.

5.Проведение биологической пробы.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой проведения биологической пробы.

ОСНАЩЕНИЕ: система, заполненная переливаемой жидкостью (кровь, плазма, компоненты крови -эритроцитарная масса и др.)

Проведение пробы: первые 45 мл крови (плазмы) переливают струйно по 15 мл через 3 минуты и наблюдают за состоянием больного при вливании каждой порции и в перерывах между вливаниями.

Явления несовместимости: беспокойное поведение больного, чувства жара во всем теле, стеснение в груди; боли в пояснице, животе и голове; снижение артериального давления, малый и частый пульс, бледность кожных покровов; моча красно-коричневого цвета ("мясных помоев") в результате гемолиза эритроцитов. При явлениях несовместимости переливание данной гемотрансфузионной среды отменяется, проводятся клинические и лабораторные исследования.

6.Определение времени остановки кровотечения.

Внорме время остановки кровотечения не превышает 4 мин. Удлинение при тромбоцитопениях и тромбоцитопатиях (нарушениях функциональных свойств тромбоцитов). ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой.

ОСНАЩЕНИЕ: принадлежности для взятия крови, секундомер, стерильная фильтровальная бумага.

ХОД РАБОТЫ: производится прокол кончика пальца скарификатором. Включается секундомер, каждые 30 секунд фильтровальной бумагой снимается капля крови, выступившая самостоятельно (без надавливания). После остановки кровотечения секундомер останавливается, палец обрабатывается настойкой йода.

60

7. Определение времени свертывания крови.

Свёртывание крови in vitro обусловлено внутренним механизмом, запускаемым за счёт контактной активации фактора XII (Хагемана). В норме свёртывание капиллярной крови начинается через 0,5 – 2 минуты, заканчивается через 3 – 5 минут. Свёртывание крови, взятой из вены, составляет 5 – 10 минут. Удлинение времени свёртывания отмечается при гипокоагуляции (гемофилии, лечение антикоагулянтами), укорочение – при гиперкоагуляции.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с определением времени свёртывания капиллярной крови визуальным методом.

ОСНАЩЕНИЕ: принадлежности для взятия крови, секундомер ХОД РАБОТЫ: после прокола пальца, первая капля удаляется, в капилляр Панченкова набирается

25 мм крови, включается секундомер. Путём наклона капилляра на 45º кровь переводится на его середину, затем, через каждые 30 секунд, капилляр наклоняется на 45º в одну сторону, возвращается в горизонтальное положение, через 30 секунд наклоняется в другую сторону. Отмечается момент замедления движения крови и появления на стенке капилляра микросгустков. Окончание процесса свёртывания – момент полного прекращения движения крови.

8. Определение протромбинового времени.

Протромбиновый тест Квика характеризует процесс свёртывания крови при его запуске по внешнему механизму и имеет исключительное значение для определения активности фактора VII.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой.

ОСНАЩЕНИЕ: раствор тромбопластина (стандартный); 3,8% раствор цитрата натрия; 0,5% раствор хлорида кальция; капилляр Панченкова; пробирка, водяная баня или водяной термостат, поддерживающий температуру 37º С; секундомер.

ХОД РАБОТЫ: В капилляр Панченкова набирается раствор цитрата натрия до отметки «80», производится прокол пальца и в тот же капилляр (не удаляя цитрат натрия) набирается кровь, пока уровень набранной смеси не достигнет метки «0» («К»). Содержимое капилляра переносится в пробирку, которая помещается в водяную баню на 1 минуту. В пробирку с цитратной кровью вносится раствор тромбопластина капилляром Панченкова, заполненным до метки «0» («К»), и такое же количество раствора хлорида кальция. Включается секундомер. Пробирка в водяной бане осторожно покачивается. Секундомер останавливается в тот момент, когда образуется сгусток крови. Полученное значение – «протромбиновое время» (ПВ).

Зная ПВ испытуемого (ПВИ) и нормальное протромбиновое время (ПВН), которое зависит от активности стандартного тромбопластина (оно бывает указано на флаконе, обычно 12 – 18 секунд; проверяется на нескольких образцах донорской крови), можно рассчитать протромбиновый индекс (ПИ): ПИ = ПВН / ПВИ * 100.

Внорме ПИ составляет 90-100%. Чем больше протромбиновое время, свидетельствующее

огипокоагуляции крови, тем меньше значения протромбинового индекса.

9. Тромбоэластография.

ЦЕЛЬ: ознакомиться с методикой.

ОСНАЩЕНИЕ: тромбоэластограф, секундомер, принадлежности для взятия крови. Тромбоэластограф – прибор для регистрации процесса свёртывания крови по внутреннему

механизму. Используется для динамического контроля лечения антикоагулянтами. Основной частью тромбоэластографа является кювета, в которую вносят исследуемую кровь. В кювету погружают стержень с диском или пластиной на конце, которая не касается ее стенок. Стержень связан с регистрирующим устройством тромбоэластографа. Специальное устройство придает кювете колебательно-вращательные движения, которые передаются на стержень и регистрирующее устройство только в том случае, когда в кювете, заполненной кровью, начнется образование нитей фибрина. По мере образования и уплотнения сгустка амплитуда колебаний стержня увеличивается и достигает максимума.