26. Методы оздоровления посадочного материала (термотерапия, метод апикальных меристем, химиотерапия).

Метод апикальных меристем. Меристема – конус активно делящихся клеток, расположенных на кончике побегов или корней. Для оздоровления используют меристему побегов шириной 0,1 мм и длиной 0,2–0,4 мм. Метод основан на том, что распределение вируса в растении неравномерно и наименьшая концентрация наблюдается в зоне апикальной меристемы. Вычленение апикальной меристемы и высадка ее на питательную среду приводят к снижению концентрации или полной элиминации вируса в дочернем растении после его регенерации из апикальной меристемы.

В настоящее время метод получил широкое распространение и используется для оздоровления посадочного материала картофеля, плодовых, ягодных, декоративных растений. Использование метода апикальных меристем само по себе не гарантирует обязательного оздоровления. Вирус может присутствовать в апикальной меристеме в скрытом состоянии. В связи с этим необходимо сочетать метод апикальных меристем с другими методами оздоровления (термо- и химиотерапия).

Термотерапия. Тепловая обработка растений в культуре in vivo или in vitro обычно предшествует вычленению апикальных меристем. Термотерапия (лечение зараженных вирусными болезнями растений длительным воздействием на них повышенных температур) способствует элиминации вирусов в инфицированных растениях

Термотерапия выполняется обычно при температуре, не угнетающей развитие растений и подавляющей развитие вирусов. Наиболее часто используется температура 36–38 °С. Для выполнения термотерапии растения, черенки или клубни помещают в термокамеры, где в течение первой недели температуру изменяют от 25 °С до 37 °С путем ежедневного увеличения на 2 °С. Продолжительность термотерапии зависит от биологии культуры, сорта и состава вирусов инфицированного растения. Если для картофеля оптимальная продолжительность составляет около 4 недель, то для хризантем – более 12 недель.

Химиотерапия. Метод предполагает использование химических соединений – ингибиторов вирусов, которые добавляются в состав питательной среды. Наиболее часто для этих целей применяют виразол. Виразол стерилизуется путем фильтрации и добавляется в охлажденную питательную среду. Концентрация препарата зависит от вида растения, длительность обработки подбирается эмпирически. По мере возрастания концентрации усиливается процесс элиминации вирусов, однако при концентрации выше 20–50 мг/л уменьшается темп роста и может наблюдаться фитотоксический эффект. Виразол показал высокую эффективность при оздоровлении картофеля, черешни, сливы, малины, декоративных растений.

27. Технология выращивания безвирусного посадочного материала картофеля.

Для оздоровления посадочного материала картофеля используется три основных метода: термотерапия, метод апикальных меристем и химиотерапия. Для термотерапии отбирают клубни, типичные по внешним признакам для данного сорта, не имеющие поверхностных повреждений, без признаков инфекции, моют их и размещают в кюветах, заполненных стерильным песком. Кюветы устанавливают в термобокс, где поддерживается температура +37 °С и влажность 75 %. Через 7–10 дней клубни подкармливают раствором Кнопа и микроэлементов по Мурасиге-Скуга. Термотерапия клубней в течение 35–50 дней резко снижает, а по отдельным сортам полностью освобождает клубни картофеля от вируса скручивания листьев. Однако этот метод не дает положительного эффекта по освобождению от вирусов X, S, M, Y, А. Ростки клубней, прошедших термотерапию, длиной 2 см и более стерилизуют в 0,1 %-м растворе диацида 3–5 минут, затем 3 раза промывают в стерильной воде. Стерилизовать ростки также можно в 1– 6 %-м растворе гипохлорита кальция или натрия или в 0,1 %-м растворе сулемы. Меристему размером 0,1-0,25 мм вычленяют в ламинарном боксе под микроскопом с 24-кратным увеличением с помощью медицинской иглы. Меристему высаживают на модифицированную среду Мурасиге-Скуга и культивируют при температуре +24–25 °С, освещенности 6 тысяч люкс, фотопериоде 16 часов, влажности воздуха 70 %. За 30–45 дней из меристемы вырастает растение с 5-6 листочками При сочетании метода апикальных меристем с химиотерапией в состав питательной среды добавляют виразол или 2,5-олигоаденилаты. Полученное из меристемы растение-регенерант черенкуют и проводят контроль на наличие вирусной инфекции методами иммуноферментного анализа и электронной микроскопии. Оздоровленные растения размножают в культуре in vitro или in vivo. При традиционном размножении in vitro растения черенкуют в условиях ламинарного бокса на черенки с одним листочком, которые помещают на свежую питательную среду Мурасиге-Скуга. Условия культивирования: температура +18–25 °С, относительная влажность воздуха 70 %, освещенность 6–8 тысяч люкс, фотопериод – 16 часов. За 20-30 дней вырастает растение с корневой системой, готовое к новому черенкованию.